高效液相色谱法测定血浆中左亚叶酸钙的含量

    邓富良1 陈本美1 饶均明2 周 平1 邓世林1 陈 新1 余俊龙

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    1 (中南大学湘雅医学院分析测试中心,长沙410078) 2 (中南大学湘雅医院检验科,长沙410008)

    3 (中南大学湘雅医学院病原生物学系,长沙410078)

    摘 要 建立了测定血浆中左亚叶酸钙含量的RP2HPLC方法。采用Diamonsil C18色谱柱(150 mm ×4. 6 mm,5μm) ,乙腈250 mmol/L磷酸氢二钾/磷酸二氢钾缓冲溶液(10∶90, V /V ,用磷酸调pH至4. 0)为流动相,用前

    经0. 45μm的过滤膜,超声脱气, 流速为1. 0 mL /min, 紫外检测波长为290 nm, 柱温为35℃, 进样量20μL。

    该方法最低检出限为0. 2 ng;线性范围为0. 05～10 mg/L, 方法平均回收率在97. 0%以上;日内及日间精密度

    的相对标准偏差分别小于4%和6%。该方法简单,快速,灵敏度高,重复性好。

    关键词 高效液相色谱法,左亚叶酸钙, 血浆

    2004207224收稿; 2005203231接受

    1 引 言

    左亚叶酸钙作为52FU化疗增效药及MTX解救剂己大量用于临床,为了了解该药的人体生物利用

    率,建立一种简单、灵敏度率、重现性好的测定方法非常必要。Esp inosa2Mansilla等[ 1 ]采用紫外分光光度

    法测定了血浆中的左亚叶酸钙,由于该方法的干扰因素较多,须采用特殊处理以消除干扰;现在最常用

    的方法是采用固相萃取,离子对反相高效液相色谱法[ 2～4 ]进行分离测定。本研究采用甲醇沉淀蛋白,等

    度非离子对洗脱,成功地分离测定了血浆中左亚叶酸钙。本方法简单、灵敏度高、重现性好,为左亚叶酸

    钙的药代动力学研究、临床血药浓度检测以及药物质量的评价提供了可靠的依据。

    2 实验部分

    2. 1 仪器与试剂

    LC26A高效液相色谱仪(日本岛津公司) ,包括LC26A输液泵、SCL26A系统控制器、SIL26A自动进

    样器、SPD26AV紫外2可见光检测器、CTO26A柱温箱; Hw22000数据站(南京千谱软件有限公司) ; Lx32Ⅱ

    离心机(上海医用仪器厂) ;UVS400A离心干燥器(美国Savant公司) ......