第32 卷

    2004 年8 月

    分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告

    Chinese Journal of Analytical Chemistry

    第8 期

    1074～1076

    模拟酶催化荧光反应测定核酸

    陈小兰

    3

    许金钩

    (厦门大学化学系, 厦门361005 )

    摘 要 痕量核酸对meso2四2(32N2甲基吡啶基) 卟啉合锰( Mn2TMPyP ) 催化H2O2 氧化对2羟基苯乙酸

    ( p2HPA) 的荧光反应产生增强作用,且增强程度与核酸浓度之间有良好的线性关系,据此建立了测定核酸的

    高灵敏的荧光分析方法。在最佳条件下,测定小牛胸腺DNA 和酵母RNA 的线性范围分别是2. 0～150μg/ L

    和510～100μg/ L ;检出限分别为0. 6 和1. 6μg/ L 。对50μg/ L CT DNA 作7 次平行测定,相对标准偏差为

    116 %。本法已应用于锯缘青蟹样品中核酸含量的测定,所得结果与紫外吸收法一致。

    关键词 meso2四2(32N2甲基吡啶基) 卟啉合锰( Mn2TMPyP ) ,催化荧光反应,核酸

    2003206210 收稿;2004202217 接受

    本文系福建省青年科技人才创新项目资助课题(No. 2001J042)

    1 引 言

    核酸作为生物体生命遗传的物质基础,在生命过程中具有十分重要的作用。由于核酸几乎不发荧光,人们难以利用核酸的内源荧光对核酸进行定量测定1 。因此,以荧光法对核酸进行定量测定时,需使用外

    源探针, 如溴化乙锭(EB) 、Hoechst 33258、噻唑橙二聚体( TOTO) 和 唑黄二聚体等2 ～5 。

    金属卟啉作为辣根过氧化物酶(HRP) 的模拟酶,能催化H2O2 氧化一些荧光底物的过氧化反应6 。进

    一步研究发现,将DNA 或RNA 加入到meso2四2(32N2甲基吡啶基) 卟啉合锰( Mn - TMPyP ) 催化H2O2

    氧化对2羟基苯乙酸( p2HPA) 的荧光反应体系中时,体系的荧光强度明显增大,并与加入的核酸的量在一定

    范围内成正比。基于此,建立了高灵敏的催化荧光增强测定核酸的新方法。

    2 实验部分

    2. 1 仪器与试剂

    650210S 荧光分光光度计(日本日立公司) ; DU27400 紫外2可见分光光度计(Beckman 公司) ......