关键词: 绿色荧光蛋白;磷脂酶C;逆转录病毒载体;胶质瘤

    中图号:R730.41

    摘 要:目的 构建含有PLC-γ1分子Z区(PLCZ )和绿色荧光蛋白基因的双顺反子逆转录病毒载体，并将其导入SHG44胶质瘤细胞中，以探索PLC-γ1分子对胶质瘤细胞侵袭作用的影响. 方法 PCR法扩增PLCz基因，测序后克隆入pIRES-EGFP荧光蛋白表达载体中，酶切鉴定重组体.将PLCz-IRES-EGFP片段克隆入逆转录病毒载体pLXSN的相应位点，构建含有PLCz和EGFP基因的逆转录病毒载体，脂质体介导下转染包装细胞PA317，G418筛选并检测病毒滴度后挑选细胞克隆.病毒上清感染人脑胶质瘤SHG44细胞，G418筛选获得稳定转染细胞，PCR检测外源基因的整合，Northern blot检测外源基因的转录，Western blot和荧光显微镜分别检测PLCz分子和EGFP的表达. 结果 PCR扩增得到大小约650bp的特异性条带，序列测定结果与发表序列一致.构建得到含有PLCz和EGFP基因的双顺反子逆转录病毒载体，转染人脑胶质瘤细胞SHG44，得到稳定转染的细胞株SHG44-PIE.PCR扩增显示目的片段已整合入细胞基因组.Northern blot分析显示为单一的转录本.Western blot可见大小约50×103 的特异性条带，荧光显微镜检测显示EGFP获得良好表达. 结论 成功构建含有PLCz和绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒载体，并获得稳定转染该载体的SHG44胶质瘤细胞株.

    Construction of retroviral vector containing green fluorescent protein and PLCZ and its expression in SHG44glioma cells

    LI Xia，ZHANG Xiang，GU Jian-Wen，FU Luo-An，SUN Qiang，LIU Xian-Zhen，WANG Xuan

    Institute of Neurosurgery of Chinese PLA，Xijing Hospital

    Department of Biochemistry，Faculty of Preclinical Medicine，Fourth Military Medical Uni-versity，Xi'an710033，China

    Keywords:green fluorescent protein;phospholipase C;retroviral vector;glioma ......