关键词: 内皮素;反义寡核苷酸;血管平滑肌细胞

    摘 要:目的 观察Ⅰ型内皮素受体(ETA)反义寡核苷酸(ODN)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和内膜增生的抑制作用. 方法 ①细胞培养:取家兔主动脉中膜消化后培养传代，经抗α-actin鉴定后使用第4～6代传代细胞;②人工合成ODN:经Genbank检索筛选，合成含18bp ETA-ODN片段，再对5'端硫代修饰以增加稳定性，同时行地高辛标记以检测反义片段的细胞膜穿透性;③MTT分光光度法检测ETA-ODN对VSMC增殖的抑制作用;④运用放射受体结合分析法(125 I-ET-1)了解ODN对ETA蛋白表达的抑制作用，以探讨其反义作用;⑤兔颈动脉空气干燥模型在体研究ODN对血管内膜增生的抑制作用:应用F-127凝胶载体携带ETA-ODN(3.0μmol L-1 )导入血管周围，术后不同时间观察增生内膜相对厚度. 结果 ODN于培养后12h进入细胞内，并逐渐增加;15μmol L-1 ETA-ODN对VSMC增殖具有抑制作用，24h后即有显著作用;ETA-ODN对ETA表达亦有明显的抑制作用，表现为CPM于24h逐渐减少;ETA-ODN导入后，血管增生内膜相对厚度减少. 结论 ETA-ODN以浓度和时间依赖方式抑制ETA蛋白表达以及VSMC的增殖;反义寡核苷酸是通过反义机制实现对ETA蛋白和VSMC增殖的抑制作用.

    Antisense endothelin┐1receptor oligonucleotide in┐hibit vascular smooth muscle cell proliferation and intimal hyperplasia

    QIAN Ji-Xian ，ZHANG Bai-Gen，LI Gui-Yun ，ZHANG Lan，DENG Lian-Fu，ZHU Ya-Ping

    1 Center of Orthopedics Surgery of Chinese PLA，Tangdu Hospital，Fourth Military Medical Univer-sity，Xi'an710038，China，2 Department of Vascular Surgery，Renji Hospital，Shanghai Second Medical University， 3 Department of Obstetric and Gynnae-cology，Xijing Hospital，Fourth Military Medical University ......