第 2 2卷 第 4期

    2 0 01年 1 2月

    热 带 作 物 学 报

    CHI NES E J 0URNAL OF TROPI CAL CROPS

    V0 1 . 22 No 4

    De c. 20o1

    印楝种子中杀虫活性成分的分离提取研究

    彭黎 旭 冯信平 ， 吴莉宇 符悦冠 ：

    f 1中国热带农业科 学院分析 测试 中· 海 南 檐 州 5 7 1 7 3 7 ；

    2中国热带农 业科 学院植物保护研 究所 海 南 儋 州 5 7l 7 3 7)

    摘要 将 印楝种 子 中杀 虫活 性成 分分离 成油溶性 和 水溶 性 2个混 合物后 ，再 用萃 取 分 离法

    分 别将各 混合物 分 离为 3个 小组 ，含话性 物质 个数 较 多 的小组 用 快速 低压 液相 色 谱法 分 离

    为 1 2 4个极性不同的产物， 分离产物中的活性物质个数用薄层色谱法鉴定 ， 对有代表性的 6

    个 分离产 物进 行杀虫 活 性初步 试验 结果 表明 ， 车试 验 中 用 于提 取和 萃 取 印樟 种仁 中的 杀

    虫活性 成分 的有 机溶 剂的措配 是 目前较好 的一种 ， 能 达到油 溶 性活 性成 分 与油 脂 基本 分离 ；

    用快速 低压渡 相 色谱 法分 离的印楝 杀 虫活性物 质 具有 很高的 杀虫选 择性 和广 谱 杀虫 性 。

    关键 词 印糠种 子 杀 虫活性 成分 分 离提取

    中图法 分类号 T Q4 5 3 3

    印楝 z a d i r a c h t ai n d i c aAI J u s s )种 子中含有 3 0 0多种 杀虫活性成 分 ， 其 中有 1 O 0多种

    是杀虫活性较 强的四环三 萜类化合物——柠檬素 ( L i mo n o i d s )I J l 。 化学结构相近 的化合物，极性的强弱与其 杀虫活性有较大 的关系 。 通常情况 下， 极 性强 的柠檬素类 化合物对害 虫的

    触杀作用和 生长 发育 抑制 作用 强， 极 性弱的柠檬 素类 化合物对 害虫的拒食作用 、 产卵 驱避

    作用 和杀菌作用 强。 所 以把 印楝 种子中的杀虫活 性物质按极性 大小分成不 同的组后 ， 可 以

    研究每一组分离物对害虫的各种杀虫作用和药 效， 筛选 出肪 治某一种 害虫最有 效的一组 分

    离物 ， 或是对某几种害虫最有效的一组分离物 。 目前 国内外对印楝 生物 农药 的研 究， 主 要关

    注油溶性杀虫活性成分1 2 1 ， 很多情况是把从印楝种子中榨 出的油乳化 后， 直接作 为印楝 生物

    农药研究和使用 ， 对水溶性的印楝杀虫活性成分的关注较少。 为 了有 效地提 取水 溶性 成分，本研究按极性的强弱把 印楝种子中的杀虫活性 物质分离成不 同的组， 初步测定了有代表性

    的分离产物 的杀虫活性 。

    l 材 料 与方法

    I I 1 材 料

    1 . 1 . 1 供试材料 印楝种子 ( 缅甸进 口)， 瓜叶螟试 虫 ( 采 自海南省乐东县乐罗镇黄瓜地 ，田间已超 过 1 5 d没施过农 药)。

    1 . 1 . 2 试剂 二氯 甲烷 ( A. R)， 9 5%正 已烷 ( A. R)， 甲醇 ( A. R)， 无水 乙醇 ( A. R)， 乙酸

    乙酯 ( A. R)， 乙腈 ( 色谱纯)， 水 ( 色谱纯)， 石 油醚 ( 3 0 6 0℃)。

    中国热带农业科 学院基金资助项 目； 国家科技部重点攻关项 日。

    彭辇旭 舅. 1 9 61年生 ， 工学硬士 ， 副研究 员。研 究方 向： 印檬提取钧 与新型高效生物农药的研制 . 天 热产

    物化 学 . 无公害农药开发研究 。

    收稿 日期： 2 0 01 - 1 0、 1 0 修回 日期： 2 0 0 1 — 1 1 - O J

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    1 . 1 . 3 仪器 快 速低压 液相色 谱仪 ( 意大利 Eme r k公司 生产 )；薄层层 析 板 S i l i c a g e l

    6 0 F 2 5 4 ( 意 大 利 Eme r k公司 生产 ) 。

    1 . 2 方 法

    1 . 2 . 1 萃取分离 将粉碎 的印楝种仁粉装 入空心 玻璃柱 内， 用 正 已烷提取 3次 ， 在 4 0℃条

    件下旋转蒸发 除去大部份正 已烷 ， 然后用有机泵 ( o r g a n i c p u mp )除去剩余溶剂 ， 得到含 油

    溶性杀虫活性成分的提取物( a ) 。 种仁粉用氮气吹干 ， 用 甲醇提取 3次 ， 旋转蒸发除 去甲醇提

    取液 中的大部份 甲醇， 用有机泵 除去剩 余溶 剂， 得到含水溶性 杀虫 活性成分 的提取物 ( b)。

    用 2 0 0mL石油醚溶解提取物 ( a )， 搅拌振摇后， 每次用 8 0mL乙腈萃取 ， 共 萃取 3次 ， 3次

    乙腈 萃取液合 并， 再 用 6 0mL甲醇进行萃取 ， 共萃取 3次 ， 3次 甲醇 萃取液合 并 ， 然 后将 乙

    腈 萃取液 、 石油醚 萃取液和 甲醇萃取液在低温 条件下蒸干 ， 就得 乙腈 萃取物 ( a )， 石 油醚

    萃 取 物 ( a 2 )和 甲醇 萃 取物 ( a ， ) 。

    用 2 0mL的水溶 解提取物 ( b)， 每次加入 1 5mL二氯 甲烷进行 萃取 ， 共 萃取 3次 ， 合

    并 3次二氯 甲烷 萃取液 ， 蒸干溶剂后得二氯 甲烷萃取物( b ) 。 水相再用 乙酸 乙酯进行 萃取分

    离 ， 每次加入 1 0mL， 共萃取 3次 ， 合 并 3次乙酸 乙酯萃取液 ， 低温 蒸干 溶剂后得 乙酸 乙酯

    萃取物( b ) 。 旋转蒸发水相得萃取物 ( b ， )。 萃取分离流程 见图 l 。

    1 . 2 . 2 快 速 低 压 液 相 色 谱

    方 法 进 一 步 分 离 提 取 物 a

    和 b 实验 中所 用色 谱柱 的

    固 定 相 都 是 硅 胶 S i l i c aGe l

    6 0 (o. 0 4 0 -0 . 06 3 mm 1 ， 固 定

    相 用 量 根据 待 分 离物 的量

    而定， 一般在 2 0 ～ 1 0 0 g之间 ，玻璃 色 谱 空柱 的 内径 也 根

    据分离物 的量 而 定， 一般 在

    1 ～ 4 c m 之 间 。 柱 出 口先 用 脱

    脂 棉塞 稳 ，棉花 不 宜过 多 ，加 入 1 c m 左 右 的 海 沙 后 ，装入硅胶固定相 ， 再装入 l c m

    左右 的海 沙， 用梯 度洗脱 的

    第 1配 比流 动 相 先 冲 洗 柱

    子 ， 井 用 脉 冲 法 快 速 排 出 固

    印楝种 仁粉 ( 3 0 0 g )

    9 5 正己烷

    3 x 3 。 0 mL

    正 己烷溶被击溶剂

    印楝油( a )

    己脯 石油醚

    石油醚莘取糟 ( )

    氰气陈溶剂

    击油种仁粉

    甲辟3 x3 0 0【 D L

    J

    厂] 陈溶剂 印樟饼

    甲醇萃取物 ( b )

    l

    物( a 二氯 烷水

    二氯

    E t 0 A e ~ ( b 2 ) 水溶性棍台物( b 3 )

    图 1 印楝种仁 萃取流 程 图

    定相 中的气 泡 ， 然后根 据柱 容量加入提取物 a 或 b ， 在不加压 的情 况下 ， 让所 有待 分离物

    全部集 中在柱头上 ......