世界农药 第二十五卷第五期( 2 0 0 3 a t - . ) 3 1

    印楝素定量技术研究进展

    李永红 杨光伟

    ( 西南农业大学生物中心)

    摘要： 印楝素是一种极具开发前景的植物源生物农药。在对印楝素在各种样品和环境中的残留情况以及商品

    制剂生产中， 要求有一种简便、 快速、 灵敏的检测方法。本文就近年来对印楝素的含量分析研究中的几种重要技术

    做了介绍， 如： R P - I - I P L E、 S F C、 H P I . ~ . A t ~I - M S 、 E L I S A 、 比色法。

    关键词： 印楝素 定量分析

    印楝( A z a d r a c h t a n d c a A. J u s s ) 为楝属， 系热带

    和亚热带植物， 原产印度、 巴基斯坦等国， 中国无 自

    然分布… 1。1 9 6 8年 ， B u t t e n mr t h等人【 2 J 从印楝 中分

    离得到印楝素( A z a d a c h i n ， A Z ) ， 试验得知其对沙漠蝗

    具很强的拒食活性， 此后经过几十年的研究， 发现印

    楝素对农林、 仓储、 卫生害虫具有拒食、 驱避、 影响生

    殖、 干扰生长发育等作用。更为重要的是印楝素农

    药在环境中易降解、 无残 留、 害虫也不易产生抗药

    性， 对人畜、 有益生物安全 3。所以印楝素农药被认

    为是一种极具开发前景的植物源生物农药。

    印楝素( C 3 5 ~ - h 4 ol 6 ) 是一种高度氧化的四环三萜

    类物质( 柠檬苦素类) ， 具有 A ——A z . G七种结

    构非常相似的分子 ， A Z 。 A是其中活性最高 、 最重要

    的化学物质。印楝素在种仁 中含量最高 ( 0 . 2 % 一

    0 . 6 %) ， 经冷榨得到的印楝油中也大约含有 0 . 3 %的

    印楝素。但印楝素含量受产地气候、 土壤条件影响

    而差别较大。印楝素对光、 热敏感， 在见光遇热情况

    下极易分解。在印楝中除了印楝素外， 还有 n i m b i n 、n等多种柠檬苦素类物质， 约占已发现的 3 0 0

    多种化合物的三分之一【 3 ， 。

    在对印楝素生物农药的研究中， 一直希望有一

    种简便、 快速、 灵敏的定量印楝素的方法， 检测各种

    样品及环境中 A z的含量和残留情况。在一直以印

    楝素含量作为生产商品制剂标准的农药生产中， 更

    是需要一种这样的检测技术。本文就近年来有关对

    印楝素定量分析的技术作一综述。

    1 . 色谱法

    1 . 1 高效液相色谱( I L C)

    印楝素相近成分复杂， 分离困难， 在采用 H P L C

    分离印楝素的研究中， 发现 R P - I - I P L C分离具极性的

    印楝 素 比较 理 想。在 分 离 技 术 经 验 基 础 上 ， R p -

    H P L C定量技术成为印楝素分析中最常用的方法。

    已有多篇文章报道 H P L C在分析印楝素含量上

    的应用 ， 引， 下面 以 K. M. S . S u n d a r a n和 J . C u r r y ~ J 的

    分析方法为例 。

    从采回的各土壤、 叶、 河水样品通过处理均匀加

    人不同浓度梯 度的 A Z . A标准样品及 Ma r g o s a n . 0商

    品制剂( O . 3 %A Z含量) ， 水样为 1 0—2 0 0 ~ ： L ， 其它

    样品为 O . 5—1 0 t g g 。

    首先通过预制备把样品中印楝素提取出来。5 g

    样品用甲醇： 水( 1 ： 1 ) 浸提 3 0 m i n ( 5 0 m L×3 ) ， 浸提液

    浓缩至 8 0 m L ， 加人 5 m L 5 %氯化钠溶液； 己烷萃取除

    去脂类( 3 0 m L×2 ) ， 再用二氯甲烷萃取( 6 0 m L×3 ) 。

    二氯 甲烷 提取 液过装 有 无水 硫 酸钠 的柱子 干燥 ，4 o ℃下除去溶剂得到富集 A z . A的物质， 转溶于 l m L

    乙酸乙酯， 上 no 五 s i l 小柱进一步处理 ， 1 5 m L乙酸乙

    酯冲柱， 得到洗脱液浓缩。从水样 中提取可直接用

    二氯甲烷( 6 o m t . ×3 ， 1 0 0 m L水样) 萃取， 用上面方法

    预制备样品。这种回收方法回收率>8 o %。

    下面再用标准曲线法测样品中印楝素的含量，标准溶液浓度范围为： 0 . 5—2 5 t , e , m L 。H P L C条件：

    c l 8 硅胶柱( 1 5×4 . 6 m m， 直径 5 m) ， 洗脱速率 1 . 0

    r n l Jm i n ， 柱温 8 0 c I = ， U V 2 1 0 n m检测 ， 流动 相 乙腈 水

    ( v v) 梯度洗脱 2 2 . 5 m ( 2 0 % 3 5 %乙腈) ， 再用乙

    腈洗脱 1 0 m i n 。A Z的保留值为2 0 . 6 m i n 。

    这种定量技术可测得极限浓度为： O . 2 t g g ( 叶

    和土壤) 、 O . 2 5 r e s ( 落叶) 、 5 . 0 r e L ( 河水) 。

    用 I - I P L C分析的前处理过程， 要求有高的 A z回

    收率。在分析印楝油 中 A Z含量时， 用上面的预处

    理方法不太合适， 而且， 用上面的方法， 所需样品量

    大， 溶剂量也大 ， 这不仅增加工作量也浪费试剂。

    A t m a k u r a R a m e s h等人… 8用石墨碳黑 固相萃取 法

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    ( G r a p h i t i s e d C a r b o n B l a c k， G C B， S o l i d P h a s e E x t r a c t i o n.

    S P E ) 对印楝油样品前处理， 再用 R P — H P L C分析， 得

    到很好的效果。

    加 A Z - A等供试柠檬苦素类物质于 l m L印楝油

    中， 充分混合制得供试分析样品。加 1 0 m L己烷剧

    烈振荡 3 mi n ， 上 S P E萃取柱( 石墨碳黑 5 0 0 r a g ) ， 渗滤

    5 m i n ， 真空下把油抽干。2 m L己烷冲柱 ， 保证除干

    净， 再用 5 m L乙腈缓慢冲柱， 收集乙腈相 ， R P - I - I P L C

    定量分析( 甲醇： 乙腈： 水 =3 5 ： 1 5 ： 5 o ) 。

    该法成功地对印楝油样品中的 A Z - A、 A Z - B、n i mb i n 、 a l a ~ n四种成分进行了定量分析。前两种

    化合物的回收率达 9 9 . 2～1 0 4 . 7 %， 后两种达 9 7 . 4～

    1 0 2 . 0 %。但这种方法要注意温度对回收率的影响。

    在 S P E吸附活性物质后 ， 填料在 3 0 ℃下置 7 2 h后回

    收率下降 1 8～2 7 %， 2 0 q C回收率下降 1 0～1 5 %， 而

    4 ℃下回收率无变化 。

    用 S P E前处理样品， 回收率高、 快速、 节省试

    剂、 重现性好 ， 可用 于各种样品的测定。

    1 . 2 超 临 界 流 体 色 谱 ( S u p e r c r i t i c a 1 . f l u i d C h r o .

    ma t o g r a p h y ......