不同因子对杜仲愈伤组织继代培养的研究X

    李 琰1

    , 王冬梅2

    , 崔宏安1

    , 张康健2

    (1.西北农林科技大学 生命科学学院,陕西 杨陵 712100 ;2.西北农林科技大学 园艺学院,陕西 杨陵 712100)

    摘 要:实验进行 NAA ,NAA与BA 及 KT 的组合 ,光照条件 ,培养基 pH 和糖种类对杜仲愈

    伤组织继代培养的影响。结果表明 ,单独使用NAA时 ,以0. 5 mg· L - 1

    愈伤组织继代生长率最

    高。NAA与细胞分裂素配合使用时 ,以 0. 5 mg· L - 1

    NAA + 0. 5 mg· L - 1

    BA 最好 ,其愈伤组

    织生长量明显大于单独使用 NAA ,KT的加入不利于愈伤组织的生长。光照条件以 12 h 光照

    12 h暗培养最好 ,pH以6. 3 最为适宜 ,糖以分析纯的蔗糖比葡萄糖和市售普通白糖生长量大。

    关键词:杜仲;愈伤组织;继代培养

    中图分类号:S722. 37 文献标识码:A 文章编号:100127461 (2004) 0120061203

    Influence of Different Factors on Callus Subculture of Eucom mia ulmoi des

    LI Yan1

    , WANGDong2mei

    2

    , CUI Hong2 an1

    , ZHANG Kang2jian2

    (1. Col lege of L if e Science , NW Sci2Tech Univ . of A gr. and For. , Yangli ng , S haanxi 712100 , Chi na ; 2. Col lege of Forest ry ,NW Sci2Tech Univ . of A gr. A nd For. , Yangli ng , S haanxi 712100 , Chi na)

    Abstract :Callus subculture of Eucom mia ulmoides was studied by different concent rations of NAA , combination

    of NAA and BA or KT , condition of light , pH of medium and carbon sources. The result showed that , 0. 5mg

    · L - 1

    NAA was best for callus subculture when it was used singly. The best combination was 0. 5mg· L - 1

    NAA

    + 0. 5mg· L - 1

    BA when both NAA and cytokinins were used. The callus yield was significantly higher than us2

    ing NAA singly. KT was not suitable for callus subculture. 12 hour light and 12 hour dark was benefit to callus

    growth. The best pH value of the medium for the callus growth was 6. 3. Sucrose as carbon source was bet ter

    than glucose and refined sugar .

    Key words : Eucom mia ulmoides ; callus ; subculture

    利用植物细胞培养生产药用成分是近年发展起

    来的新领域 ,它已成为开发药用植物资源的重要途

    径[1 ,2 ]。据不完全统计 ,应用于植物组织培养生产

    次生代谢产物的植物已达百种以上 ,近半数的次生

    代谢产物含量超过原植物。人参根的培养在日本已

    商业化 ,长春滕、毛地黄组织培养已逐步走向中试和

    工业化规模[3 ]。杜仲( Eucom mia ulmoides)为我国

    特有的经济树种 ,国家二类重点保护植物[4～7 ]。杜

    仲的有效成分木脂素类、桃叶珊瑚甙、木酚素二葡萄

    糖甙等为次生代谢产物 ,植株内含量很低 ,在其它植

    物中的含量也很低 ,虽然可以通过提取获得产品 ,但

    受原料 ,季节等条件的限制 ,提取量很有限 ,利用微

    生物或化学方法至今不能合成 ,杜仲这些药用成分

    药物至今难以满足市场需要。利用组织培养生产有

    用的次生代谢产物可以在人工控制的条件下改变培

    养条件 ,进行特定的生物转化反应 ,得到超越整株植

    物产量的代谢产物及节省土地资源 ,但迄今为止国

    内外对杜仲组织培养研究的报导并不多[8～13 ]。本

    实验为组织培养的初期工作。旨在比较不同的理化

    因子对杜仲愈伤组织继代培养的影响 ,筛选出杜仲

    愈伤组织生长的最佳条件 ,为下一步工作的顺利进

    行奠定基础。

    1 材料与方法

    供试材料为杜仲茎段在 MS + NAA 1. 0 mg L

    +BA 0. 3mg L 上诱导的愈伤组织 ,置于不同因子

    西北林学院学报 2004 ,19 (1) :61～63

    Journal of Northwest Forest ry University

    X 收稿日期:20022 112 12

    基金项目:国家“十五”攻关项目(2001BASO2B0403)及西北农林科技大学青年科研专项部分内容

    作者简介:李琰(19712) ,女,河南洛阳人,讲师,主要从事植物学及药用植物组织培养教学和科研工作。

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.处理的B5 培养基上 ,进行愈伤组织继代培养的研

    究 ,每个处理接种 20 瓶 ,每瓶接种愈伤组织 2～3

    块、鲜重控制在 0. 30～0. 40 g 之间 ,每处理接种 20

    瓶 ,培养 20 d 后收获 ,计算愈伤组织增长量和增长

    率。

    愈伤组织增长量 =收获量瓶 - 接种量瓶

    愈伤组织增长率 =愈伤组织增长量 × 100接种

    量

    以上培养基除实验处理外 ,加入蔗糖 30 g·

    L - 1

    ,用琼脂 6 g· L - 1

    固化 ,50 mL 三角瓶内装 20

    mL 培养基 ,高压灭菌前将pH调至 6. 3. pH对愈伤

    组织生长影响的培养基 pH 用 PHS - 2C 型酸度计

    测量 ......