目 外 秫 韭 1 1

    成龄白栎腋芽离体培养诱导小植株再生

    译者：况成秋

    校者；吴克贤

    一

    、 前 言

    自 栎 ( Qt i e r c u s c r i s p u l a Bl u mc )

    是 生 长 菇 蘑 和 用 材 的 重 要 树 种。由于

    以扦插方式进行无性繁殖比较困 难 ， 加 之

    嫁接不易亲和，复活迟缓，因此，选出的优

    良个体不能迅速增殖。进行栎属 的 育 种 工

    作，其目的是为生产优 良的香蕈提供原木，用选择的优良个体以无性繁殖方 式 繁殖 苗

    木，这不仅是建育种园，而且也是取得良好

    育种效果 的方法。因此，采 用组织培养法，对栎属进行无性繁殖，被认为是一种有效的

    方法。在栎属中，已有成龄赤栎和栎再生的

    例子，但是关于白栎再生成功的报告尚未见

    报导。笔者用2 5 年生白栎的萌生枝腋芽诱导

    小植株再生的试验结果作如下报道。

    二. 材料和方法

    1. 材 料的灭菌

    试验材料于1 9 8 7 年l O 月2 7 日取 自石川县

    林业试验林 内2 5 年生自栎单株。取 约 6 0 c m

    长的枝条，根据伊藤、松尾的方法，在湿度

    为5 O ±1 0 %以及湿度2 5 ±3℃的 条 件 下 ，水培促进萌芽枝生长，每天 日光灯照明1 6 J ~

    时， 光强度3 0 0 0 L x。当萌芽 枝伸长到1 0 ~2 0

    c m h ，从叶柄中间部位剪去叶片， 按腋 芽位

    置 将其切成 1～ 2 c m长的Y字型带腋芽小段

    供试验之用。依萌芽枝伸长的先后顺序，初

    期墙养的对问依次为1 9 8 7 年 1 1 月 1 7日，3 0

    日，1 2 月 3日，2 4 日。外植体的灭菌，首先

    在 7%的酒精 中浸 2 mi n ，再在 3%过氧 化

    氢溶液中浸 3 mi n ，以上两步均需在搅拌器

    内搅拌，并在常压下进行。将灭过菌的外植

    体放入净化台内用无菌水冲洗 3次，把表面

    消毒过程中受到药害的茎基部除掉。为防止

    酚类物质产生褐变，采用井出、山本的硝酸

    银处理法，即将外植体基部的切口在经孔径

    0 . 4 5 u r n的滤器除菌的1 0 0 0 p p m硝酸银 溶 液

    中浸 3 S ，待硝酸 银溶液浸透组织，再 将 外

    植体插入2 . 5 %的琼脂凝胶中 浸 3 0 mi n，然

    后接种于诱导芽伸长的培养基上进行培养。

    接种后初期培养的 7天内，要注意观察杂菌

    污染的情况，及时将未受污染的材料移植到

    新培养基中。把装有试验材料的 试 管 置 于

    2 5 ±3℃的恒温室内培养，每 日用日光灯照

    明1 6 h ，光照强度约8 0 0 0 ~1 0 0 0 0 Lx。

    2、芽伸长培养基

    这种培养基是以WPM 中加 1 0 0 mg 1 肌

    醇，2 0 g ! 蔗糖为基本培养基， 再加入琼脂 6

    g 1 以 及 细胞分裂素类。此培养基使用的细

    胞分裂素有 6一苄基瞟呤 ( BAP)，异戊烯

    基瞟呤)Zi p )和硫酸腺瞟呤 ( 4 PU) 3个

    种类连同未加激素处理的共设1 3 个处理，各

    处理细胞分裂素的浓度如( 表 1) 所示。

    3、促进生根和 生根培养基

    外植体的腋芽经过l 0 天左右的培养，【 ! 口

    可见其开始 伸长。经3 O 天培养，在新芽伸长

    到 1～ 2 c m，可将其切下并移到生根培养基

    巾。为了防止渴变， 仍按井出、山本的方法，把 口修 成 斜 面 ， 用S TS 处理切 口。 即在

    经孔径0 . 4 5 u m的滤器除菌的0 . 0 2 r am硝酸镟

    溶液与0 . 1 6 r aM硫代硫酸钠等量混合 液中浸

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    5 s ， 再用2 . 5 %琼脂凝胶处理3 0 mi n ， 然后插

    入生根培养基中。以芽伸长培养基为基本培

    养基， 加琼脂7 . o g 1 和植物生长激素类及活

    性炭1 0 g 1共设1 4 个处理， 见( 表 2)。表中

    I B人经过滤除菌，以浓度5 0 0 p p m的 I BA 溶

    液浸泡 3 s ，并在0 . 2 p P m的I BA和0 . 0 0 2 p p

    m的NAA共存的条件下，尽量使NAA浸透

    在培养基内的材料中。同时，制备不添加活

    性炭而只添~ n l o g l 泡 沸石的培养基。

    4、小植株在沮室内的驯化

    把已生出根的幼小植株，移至经水冲洗

    过的蛭石培养基中，用透明塑料布复盖，放

    入恒温室 内1 O 天。然后移 植到含有无机盐的

    营养钵中 ......