多指标正交试验优选酸枣仁最佳提取工艺

    王筱亮, 张玉杰3

    , 陈明霞, 王泽凤

    (北京中医药大学 中药学院 , 北京 100102)

    [摘要] 目的:分别以酸枣仁中总皂苷量、酸枣仁皂苷 A ,B总量、总黄酮量为检测指标对酸枣仁进行提取工艺

    优选。方法:采用单因素考察和正交试验相结合的方法 ,正交试验中以乙醇含量( A ) 、提取次数( B) 、提取时间( C) 、溶剂用量( D) 4个因素,每个因素选取 3 个水平进行试验。结果:因素 A , B 对检测指标均有显著性影响,因素 C, D

    为不显著因素,可结合生产实际进行选择。结论:以60 %乙醇,8倍量提取3次,每次115 h为最佳提取工艺。

    [关键词] 酸枣仁;总皂苷;酸枣仁皂苷 A ,B ;总黄酮;正交试验;提取工艺

    [中图分类号] R 283 [文献标识码] A [文章编号] 100125302 (2005) 1020753203

    [收稿日期] 2004209202

    [通讯作者] 3

    张玉杰, Tel : ( 010 ) 6471119926027 , E2mail :

    ZHYJ227 @1261com

    酸枣仁为鼠李科植物酸枣 Ziz i phus jujuba

    Mill. var . spinosa (Bunge) Hu ex H. F. Chou 的干

    燥成熟种子。具有补肝、宁心、敛汗、生津的功效 ,主

    要用于虚烦不眠、惊悸多梦、体虚多汗、津伤口

    渴[1 ]。皂苷类和黄酮类是酸枣仁的主要活性成分。

    本试验选取总皂苷量、酸枣仁皂苷 A ,B 总量、总黄

    酮量为指标 , 首先单因素考察确定了适宜的提取方

    法 , 后采用L9 (34)正交试验优选了提取条件 ,可给

    酸枣仁有效部位制备和生产提供参考。

    1 仪器与试药

    CS - 9000 型薄层扫描仪(日本岛津公司) 、 U -

    2000型紫外分光光度计 (日本日立公司) 、 ER -

    182A型分析天平(日本A D公司) ,CS101 - AB 型

    电热鼓风干燥箱(重庆试验设备厂) ,硅胶 G板(青

    岛海洋化工厂) 。

    酸枣仁皂苷A ,B 对照品(中国药品生物制品检

    定所) ;酸枣仁药材购自江苏华康医药股份有限公

    司 ,经本校生药教研室张贵君教授鉴定为鼠李科植

    物酸枣 Z1 jujuba var1spinosa 的干燥成熟种子;其

    他试剂均为分析纯。

    2 方法与结果

    211 酸枣仁总皂苷和酸枣仁皂苷 A ,B 测定方法的

    建立[2 ]

    21111 对照品溶液的配制 精密称取酸枣仁皂苷

    A ,B 对照品适量 ,加甲醇配成 1 mg· mL - 1

    的溶液。

    21112 样品的提取 取酸枣仁药材50 g ,捣碎 ,分

    别按水煮、水煮醇沉及 60 %乙醇回流提取法处理

    (加溶媒量 8 倍 ,提取时间 2 h ,提取 2 次) ,浓缩至

    50 mL。

    取酸枣仁药材18 份 ,每份50 g ,捣碎 ,正交条件

    进行正交试验 ,回流液回收乙醇浓缩至 50 mL。

    21113 供试品的制备及含量测定 取样品浓缩液

    2 份 ,每份 10 mL 分别置分液漏斗中 ,用石油醚萃取

    3 次 ,每次 20 mL ,弃去醚层 ,合并水层后加入 5 %的

    氢氧化钾 30 mL ,用水饱和的正丁醇提取 4 次 ,每次

    20 mL ,合并正丁醇提取液 ,用正丁醇饱和的水洗涤

    3次 ,每次 10 mL ,洗液弃去 ,正丁醇层水浴蒸干 ,一

    份加甲醇溶解 ,过滤 ,将甲醇液蒸干 ,得酸枣仁总皂

    苷 ,于105 ℃恒重 ,称定;另一份加甲醇溶解 ,定容至

    10 mL ,作为供试品溶液。分别取对照品溶液 1 ,2

    μL ,供试品溶液2 ,4μL ,交叉点于硅胶 G薄层板上 ,以正丁醇2冰醋酸2水(4∶ 1∶ 5 ,上层)上行展开 ,展距

    为8～9 cm ,取出晾干 ,喷 2 %香草醛硫酸乙醇液于

    100 ℃烘2～3 min ,至酸枣仁皂苷 A ,B 显色清晰,取

    出,稍凉,盖上洁净玻璃板,用胶带封固。单波长反射

    法锯齿扫描,λs = 620 nm , SX = 3 ,狭缝 1125 mm ×

    1125 mm ,计算含量,结果见表1及正交试验结果。

    212 酸枣仁总黄酮测定方法的建立[3 ]

    21211 标准曲线的制备 精密称取黄芩苷对照品

    适量 ,加甲醇配成 011 mg· mL - 1

    的溶液。精密吸取

    对照品溶液 0 ,012 ,015 ,1 ,115 ,2 mL ,分别置 10 mL

    量瓶中 ,用甲醇定容 ,随行试剂空白 ,在 32510 nm

    处测定吸光度 ,以含量( C)与吸光度( A )进行直线

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    第30 卷第10 期

    2005 年5 月 中 国 中 药 杂 志

    China Journal of Chinese Materia Medica

    Vol130 , Issue 10

    May ,2005

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.回归 ,得回归方程为 A = - 01054 7 + 331745 9 C , r

    = 01999 7。在 0～0102 mg· mL - 1

    线性关系良好。

    21212 总黄酮含量测定 精密取 21112 中浓缩液

    2 mL 置蒸发皿中蒸干 ,用甲醇定容至 50 mL 量瓶

    中 ,取 1 mL 置 10 mL 量瓶中 ,用甲醇定容至刻度 ,摇匀 ,作为供试品溶液。按标准曲线制备项下操作 ,测定黄酮含量 ,结果见正交试验结果表。

    213 酸枣仁提取方法的选择

    取21112 中样品 ,以总皂苷量、酸枣仁皂苷A ,B

    总量、总黄酮含量为指标测定 ,按上述测定方法测

    定 ,结果见表 1。

    表 1 酸枣仁不同提取方法的比较

    提取方法 总皂苷量

    mg

    皂苷A ,B总含量

    ( ×10 - 2) %

    总黄酮含量

    ( ×10 - 2) %

    水煮 13713 41036 13112

    水煮醇沉 15615 41271 19187

    60 %乙醇回流 33119 101102 45138

    从表 1 可知 ,上述 3 种提取方法中以 60 %乙醇

    回流提取各项指标性成分提取效率明显高于其他 2

    种方法 ,故选择用 60 %乙醇回流提取 ......