菌株

    编号3

    平均产酸

    ( %)

    平均转

    化率( %)

    菌株

    编号3

    平均产

    酸( %)

    平均转

    化率( %)

    菌株

    编号3

    平均产

    酸( %)

    平均转

    化率( %)

    C03 11. 72 88. 65 AN04 12. 36 93. 49 CN02 13. 21 99. 92

    C04 12. 73 96. 29 AN05 12. 91 97. 65 CN03 12. 63 95. 53

    C05 12. 24 92. 57 AN06 13. 11 99. 17 CN04 12. 90 97. 58

    C06 10. 32 78. 06 AN07 12. 89 97. 50 CN05 13. 36 101. 06

    C07 0 0 AN08 13. 48 101. 97 CN06 13. 01 98. 41

    C08 0 0 AN09 13. 73 103. 86 CN07 12. 79 96. 75

    C09 0 0 AN10 11. 72 88. 65 CN08 12. 23 92. 51

    C10 0 0 AN11 12. 46 94. 25 CN09 12. 90 97. 58

    C11 11. 57 87. 52 AN12 10. 40 78. 67 CN10 12. 02 90. 92

    C12 11. 16 84. 42 AN13 12. 45 94. 18 CN11 12. 18 92. 13

    1 14. 42 109. 08 AN14 13. 12 99. 24 CK(Co827) 11. 51 87. 07

    3 A、 B、 C分别为60

    Co -γ辐照剂量编号;N为N+

    注入。

    从表1中可知 ,经60

    Co -γ辐照后筛选的菌株中只有 2 株

    正突变菌株。说明出发菌株 Co827对60

    Co -γ辐照具有一定的

    抗性。在斜面培养基上不生孢子的 6 个突变株 ,在其发酵液

    中检测不出柠檬酸。这暗示黑曲霉控制分生孢子分化和生长

    的基因与其柠檬酸代谢的某一种或几种关键酶基因是紧密连

    锁的 ,前者若受到损伤 ,则直接影响柠檬酸的积累。

    表2 各菌株M3代摇瓶发酵产酸

    菌株编号 平均产

    酸( %)

    平均转

    化率( %)

    菌株

    编号

    平均产

    酸( %)

    平均转

    化率( %)

    C01 11. 17 84. 49 AN09 11. 06 83. 66

    C04 11. 04 83. 51 AN14 11. 77 89. 03

    1 11. 40 86. 23 BN02 11. 31 85. 55

    2 11. 68 88. 35 BN05 12. 95 97. 96

    3 11. 29 85. 40 BN07 12. 16 91. 98

    4 12. 40 93. 80 BN09 12. 01 90. 85

    5 11. 79 89. 18 CN02 12. 34 93. 34

    6 11. 34 85. 78 CN04 12. 11 91. 60

    7 11. 27 85. 28 CN05 13. 68 103. 45

    8 11. 22 84. 87 CN06 12. 78 96. 67

    AN05 11. 12 84. 11 CN07 12. 27 92. 81

    AN07 11. 00 83. 21 CN09 12. 31 93. 12

    AN08 11. 00 83. 21 CK(Co827) 11. 55 87. 36

    出发菌株 Co827对N+

    注入较为敏感 ,M2代生物学效应显

    著 ,在 De 辅助筛选出的 9 株中 ,正突变菌株的比例高达 88.

    89 % ,其中4

    菌株产酸提高了27. 11 % ,转化率达110. 67 %(一

    水柠檬酸理论转化率为116. 7 %[3 ]) 。

    经60

    Co -γ辐照和N+

    注入复合处理 ,在 De 辅助筛选出的

    35株中 ,正突变菌株占 42. 86 % ,其中 AN09 菌株产酸提高了

    19. 28 %。

    2. 2. 2 M3代摇瓶发酵

    选择M2代摇瓶发酵产酸比出发菌株提高 10 %以上的 25

    株M3代斜面 ,将其孢子接种于摇瓶培养液中 ,发酵 72 h ,各菌

    株产酸结果见表2。

    从表 2 可知 ,CN05 菌株的 M3 代产酸比出发菌株提高了

    18. 44 % ,比其M2代的产酸和转化率略有提高 ,而其它菌株均

    有不同程度的下降。特别是 ,M2 代产酸较高的 1

    和 4

    菌株

    在M3代严重退化 ,这暗示了N+

    注入黑曲霉的当代和M2代的

    生理效应大于遗传效应。

    3 小结

    本研究所用出发菌株黑曲霉 Co827是经60

    Co -γ多次辐照

    筛选出的生产用菌株 ,对γ射线不敏感的特性在研究中得到

    进一步证实。

    尽管N+

    注入生命体是一种新型的诱变手段 ,但如何使显

    著的当代效应能稳定遗传是值得进一步探讨的问题。

    在柠檬酸发酵菌黑曲霉的诱变育种中 ,常采用溴甲酚绿

    指示性平板进行辅助筛选 ,这样可提高工作效率 ,但黄色指示

    圈大并不意味着摇瓶产酸就高。诱变是随机的 ,但选择是定

    向的。更科学、灵敏、快速的筛选检测方法还有待于进一步研

    究。

    本研究结果证明了同时使用两种核技术手段进行黑曲霉

    诱变育种的可行性 ,获得了 1 株 M3 代产酸比对照提高 18.

    44 %、转化率达103. 45 %的菌株 CN05 ,为柠檬酸发酵菌黑曲霉

    的进一步育种工作提供了复合诱变参数和高产出发菌株。这

    种复合诱变方法也可供其它微生物诱变育种时借鉴。

    参考文献:

    [1 ]袁成凌,余增亮.低能离子束在生物技术中的应用研究[J ] .中国生

    物工程杂志,2003 ,23(4) :57 - 611

    [2 ]毛培宏,金湘,曾宪贤,等.新疆离子束生物技术的研究[J ] .生物技

    术,2003 ,13(4) :50 - 511

    [3 ]王博彦,金其荣.发酵有机酸生产与应用手册[M] .北京:中国轻工

    业出版社,20001

    红花不定芽的诱导研究 易丽娟1

    ,曾幼玲1

    ,贺宾2

    ,陈友强2

    ,高燕2

    ,张富春1 3

    (11新疆生物资源基因工程重点实验室 ,新疆 乌鲁木齐 830046 ;2.新疆农科院经济作物研究所 ,新疆 乌鲁木齐 830000)

    摘要:目的:对新疆主栽红花品种新红花4号进行组织培养 ,研究了外植体、植物激素、光照强度及苗龄等因素对红花不定芽

    诱导的影响。结果:不同的外植体分化能力及对激素要求差异较大。胚根不定芽诱导率高于子叶 ,胚轴未见不定芽分化 ,胚根在

    MS + 6 - BA 2. 0mg· L - 1

    的培养基中不定芽诱导率最高 ,子叶在MS + 6 - BA 1. 5mg· L - 1

    + NAA 0. 5mg· L - 1

    激素组合中不定芽诱导率

    较好。7日龄胚根诱导不定芽优于3日龄和10日龄不定芽诱导效果 ,弱光条件对不定芽的诱导略优于强光 ......