何首乌茎段快速繁殖技术的研究.PDF
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2006年2月23日
| 第1页 |
参见附件(79KB，3页)。
何首乌茎段快速繁殖技术的研究
王凌晖1 ,2
曹福亮1
汪贵斌1
(1 南京林业大学森林资源与环境学院 2 广西大学林学院)
摘 要:对何首乌茎段快繁技术进行了研究。结果表明:何首乌最佳诱导培养基为 MS + 6- BA 110 mg L + NAA
0105 mg L或MS + 6- BA110 mg L + NAA 0102 mg L ,对于芽增殖 ,以MS + 6- BA 110 mg L + NAA 0105 mg L 培养基较
好 ,培养30d后芽增殖率可达到4102。诱导生根培养基以1 2MS + 6- BA 110 mg L + NAA 011 mg L或MS + 6- BA 015
mg L + NAA 0105 mg L较好 ,培养20 d后生根率分别可达9117 %和9613 %。
关键词:何首乌;茎段;快速繁殖;植物激素
收稿日期:2004- 10- 08
基金项目:江苏省高技术研究基金项目(BG2004314)资助。
作者简介:王凌晖(1968 - ) ,男,广西桂林人,广西大学林学院副教
授,现为南京林业大学森林资源与环境学院博士生,从事森林培育
学、园林苗圃学和园林树木栽培养护学教学研究工作。
何首乌 ( Polygonum multilorum Thunb1)为蓼科的多
年生缠绕草本植物,其块根及茎叶均为名贵的中药材,其主要成分有:大黄酚,大黄素,大黄酸,大黄素甲醚,大黄酚蒽酮,二苯乙烯苷,芪类化合物,磷脂类及淀粉
类成分[1]。我国对何首乌的药理研究较多,一般认为
何首乌能降血脂,缓泻,润肠通便,抗菌,促进血细胞的
新生和发育,阻止胆固醇在肝内沉积以及减轻血管粥
样硬化等作用[1]。也有一些药理研究表明,何首乌具
有增强免疫功能[2]
、抗氧化作用[3]
、延缓大脑衰老[4]
、延长寿命、抗动脉粥样硬化[2]
等抗衰老作用,还可治疗
老年性便秘[5]
和眩晕[6]
等。何首乌作为我国一种名贵
的大宗中草药材,除了应用于中药外,还可用于制取洗
发水,首乌酒,保健品,食品和饲料添加剂等,开发前景
十分广阔。但是,近几年来对野生何首乌掠夺性采挖
现象非常严重,亟需进行人工栽培。本文的主要目的
是摸索何首乌茎段快繁技术,为加快何首乌良种选育、苗木培育及降低育苗成本提供依据。
1 材料与方法
111 外植体的准备
材料采自广东高州市。取何首乌带侧芽茎段 ,用
洗衣粉溶液浸泡并用柔软毛刷轻轻涮洗表面 5 min ,然后用自来水冲洗干净 ,再在超净工作台内进行无菌
操作 ,用 011 %氯化汞消毒 4～5 min ,无菌水冲洗 5
次 ,无菌滤纸吸干水分 ,最后将其切成 1～2 cm长的
带侧芽小段 ,接种入培养基中。
112 培养条件
以MS为培养基 , 附加不同激素水平的 6- BA 及
NAA , 蔗糖用量为 3 % ,琼脂 017 % ,pH值 518。分别
配制成诱导培养基、分化培养基、生根培养基
(1 2MS) 。培养基分装后在 121 ℃下灭菌 17 min。培
养温度25 ±2 ℃,光照强度1 000～2 000 lx 的日光灯
照明 ,光照时间10～14 h d。
2 结果与分析
211 茎段腋芽的诱导
将带腋芽的茎段接种在初代培养基(MS + 6- BA
110～310 mg L + NAA 0105～011 mg L)上培养 1 周
后 ,腋芽开始萌动生长 ,到 15 d 左右 ,伸长的腋芽再
在其节处抽生出芽 ,整个培养物在培养 30～35 d 后
形成丛生芽。接种1周后 ,每个茎段接触培养基一端
切口均开始膨大形成愈伤组织。愈伤组织在分化培
养基(MS + 6 - BA 310 mg L + NAA 011 mg L)上未能
诱导其分化。在初代培养过程中 ,培养物不同程度地
出现枯梢现象。其中以芽抽生较多者较严重。受害
的芽苗顶部1～2节先是变成黄白色 ,以后逐渐发黑、枯死。
212 芽的继代增殖培养
将初代培养得到的不定芽条切成 1～2 cm 长的
带侧芽小段 ,接种在以MS为基本培养基附加不同激
素的分化培养基 (见表 1)中进行继代培养 ,7 d 以后
腋芽明显膨大 ,2 周以后腋芽伸长到 015～1 cm。到
20 d 时 ,抽生的芽增高较明显。到 30 d 时抽生的芽
条平均增长 1190 cm ,此时平均增殖率为 3121 (见表
1) 。在外观上 ,刚抽生芽及嫩叶略带紫红色 ,但叶伸
展长大后逐渐变绿。培养材料继代第2代后 ,仍有少
量枯梢现象发生。在继代培养的过程中 ,虽然仍然产
生愈伤组织 ,但体积较初代培养时所产生的愈伤组织
小得多 ,在培养15 d时 ,切口处诱生的愈伤组织体积
最大也不超过015 cm3
,培养至30 d时 ,其体积平均大
技术开发
52 林业科技开发 2005年第19卷第1期
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.小也只是接近 016 cm3
,愈伤组织在此培养基中也未
见有分化。可见 ,增大培养基中 6 - BA 的浓度 ,在一
定程度上可以抑制愈伤组织的产生与增殖 ,而随着
NAA浓度的增大 ,愈伤组织体积呈增大趋势。从表 1
可见 ,BA 110 mg L + NAA 0105 mg L 和BA 015 mg L
+NAA 0102 mg L 两组培养基对芽增殖较佳 ,同时前
者对高生长效果最佳。
表 1 植物激素对何首乌茎段培养的影响(培养25 d)
试验
号
植物激素 mg· L - 1
BA NAA
原始平均
高 cm
平均高度
cm
△H
cm 增殖率
1
2
3
4
5
6
7
8
9
0
110
110
110
110
015
015
015
015
0
015
011
0105
0102
015
011
0105
0102
1. 96
1193
1186
2101
1189
1192
1188
1195
1187
1. 96
3164
3176
4115
3192
3157
3161
3189
3196
0
1171
1190
2114
2103
1165
1173
1194
2109
0
2193
3129
4102
3107
2176
2188
3115
3157
213 根的诱导
芽苗长至 4～5 cm 时 ,接于不同激素浓度的1 2
MS培养基上 ,每一处理接 5 瓶 ,每瓶接入 3 个单芽 ......
王凌晖1 ,2
曹福亮1
汪贵斌1
(1 南京林业大学森林资源与环境学院 2 广西大学林学院)
摘 要:对何首乌茎段快繁技术进行了研究。结果表明:何首乌最佳诱导培养基为 MS + 6- BA 110 mg L + NAA
0105 mg L或MS + 6- BA110 mg L + NAA 0102 mg L ,对于芽增殖 ,以MS + 6- BA 110 mg L + NAA 0105 mg L 培养基较
好 ,培养30d后芽增殖率可达到4102。诱导生根培养基以1 2MS + 6- BA 110 mg L + NAA 011 mg L或MS + 6- BA 015
mg L + NAA 0105 mg L较好 ,培养20 d后生根率分别可达9117 %和9613 %。
关键词:何首乌;茎段;快速繁殖;植物激素
收稿日期:2004- 10- 08
基金项目:江苏省高技术研究基金项目(BG2004314)资助。
作者简介:王凌晖(1968 - ) ,男,广西桂林人,广西大学林学院副教
授,现为南京林业大学森林资源与环境学院博士生,从事森林培育
学、园林苗圃学和园林树木栽培养护学教学研究工作。
何首乌 ( Polygonum multilorum Thunb1)为蓼科的多
年生缠绕草本植物,其块根及茎叶均为名贵的中药材,其主要成分有:大黄酚,大黄素,大黄酸,大黄素甲醚,大黄酚蒽酮,二苯乙烯苷,芪类化合物,磷脂类及淀粉
类成分[1]。我国对何首乌的药理研究较多,一般认为
何首乌能降血脂,缓泻,润肠通便,抗菌,促进血细胞的
新生和发育,阻止胆固醇在肝内沉积以及减轻血管粥
样硬化等作用[1]。也有一些药理研究表明,何首乌具
有增强免疫功能[2]
、抗氧化作用[3]
、延缓大脑衰老[4]
、延长寿命、抗动脉粥样硬化[2]
等抗衰老作用,还可治疗
老年性便秘[5]
和眩晕[6]
等。何首乌作为我国一种名贵
的大宗中草药材,除了应用于中药外,还可用于制取洗
发水,首乌酒,保健品,食品和饲料添加剂等,开发前景
十分广阔。但是,近几年来对野生何首乌掠夺性采挖
现象非常严重,亟需进行人工栽培。本文的主要目的
是摸索何首乌茎段快繁技术,为加快何首乌良种选育、苗木培育及降低育苗成本提供依据。
1 材料与方法
111 外植体的准备
材料采自广东高州市。取何首乌带侧芽茎段 ,用
洗衣粉溶液浸泡并用柔软毛刷轻轻涮洗表面 5 min ,然后用自来水冲洗干净 ,再在超净工作台内进行无菌
操作 ,用 011 %氯化汞消毒 4～5 min ,无菌水冲洗 5
次 ,无菌滤纸吸干水分 ,最后将其切成 1～2 cm长的
带侧芽小段 ,接种入培养基中。
112 培养条件
以MS为培养基 , 附加不同激素水平的 6- BA 及
NAA , 蔗糖用量为 3 % ,琼脂 017 % ,pH值 518。分别
配制成诱导培养基、分化培养基、生根培养基
(1 2MS) 。培养基分装后在 121 ℃下灭菌 17 min。培
养温度25 ±2 ℃,光照强度1 000～2 000 lx 的日光灯
照明 ,光照时间10～14 h d。
2 结果与分析
211 茎段腋芽的诱导
将带腋芽的茎段接种在初代培养基(MS + 6- BA
110～310 mg L + NAA 0105～011 mg L)上培养 1 周
后 ,腋芽开始萌动生长 ,到 15 d 左右 ,伸长的腋芽再
在其节处抽生出芽 ,整个培养物在培养 30～35 d 后
形成丛生芽。接种1周后 ,每个茎段接触培养基一端
切口均开始膨大形成愈伤组织。愈伤组织在分化培
养基(MS + 6 - BA 310 mg L + NAA 011 mg L)上未能
诱导其分化。在初代培养过程中 ,培养物不同程度地
出现枯梢现象。其中以芽抽生较多者较严重。受害
的芽苗顶部1～2节先是变成黄白色 ,以后逐渐发黑、枯死。
212 芽的继代增殖培养
将初代培养得到的不定芽条切成 1～2 cm 长的
带侧芽小段 ,接种在以MS为基本培养基附加不同激
素的分化培养基 (见表 1)中进行继代培养 ,7 d 以后
腋芽明显膨大 ,2 周以后腋芽伸长到 015～1 cm。到
20 d 时 ,抽生的芽增高较明显。到 30 d 时抽生的芽
条平均增长 1190 cm ,此时平均增殖率为 3121 (见表
1) 。在外观上 ,刚抽生芽及嫩叶略带紫红色 ,但叶伸
展长大后逐渐变绿。培养材料继代第2代后 ,仍有少
量枯梢现象发生。在继代培养的过程中 ,虽然仍然产
生愈伤组织 ,但体积较初代培养时所产生的愈伤组织
小得多 ,在培养15 d时 ,切口处诱生的愈伤组织体积
最大也不超过015 cm3
,培养至30 d时 ,其体积平均大
技术开发
52 林业科技开发 2005年第19卷第1期
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.小也只是接近 016 cm3
,愈伤组织在此培养基中也未
见有分化。可见 ,增大培养基中 6 - BA 的浓度 ,在一
定程度上可以抑制愈伤组织的产生与增殖 ,而随着
NAA浓度的增大 ,愈伤组织体积呈增大趋势。从表 1
可见 ,BA 110 mg L + NAA 0105 mg L 和BA 015 mg L
+NAA 0102 mg L 两组培养基对芽增殖较佳 ,同时前
者对高生长效果最佳。
表 1 植物激素对何首乌茎段培养的影响(培养25 d)
试验
号
植物激素 mg· L - 1
BA NAA
原始平均
高 cm
平均高度
cm
△H
cm 增殖率
1
2
3
4
5
6
7
8
9
0
110
110
110
110
015
015
015
015
0
015
011
0105
0102
015
011
0105
0102
1. 96
1193
1186
2101
1189
1192
1188
1195
1187
1. 96
3164
3176
4115
3192
3157
3161
3189
3196
0
1171
1190
2114
2103
1165
1173
1194
2109
0
2193
3129
4102
3107
2176
2188
3115
3157
213 根的诱导
芽苗长至 4～5 cm 时 ,接于不同激素浓度的1 2
MS培养基上 ,每一处理接 5 瓶 ,每瓶接入 3 个单芽 ......
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