凤尾菇子实体多糖的提取及其部分性质.PDF
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2006年2月23日
| 第1页 |
参见附件(84KB，3页)。
凤尾菇子实体多糖的提取及其部分性质
方幼兰1
, 刘艳如2
(1. 福建师范大学高分子研究所生物大分子研究室 福州 350007 , 2. 福建师范大学生物工程学院 福州 350007)
摘要: 从凤尾菇子实体提取水溶性多糖粗品A , 经分离
纯化, 得到多糖纯品B、C两个组分。B、C的平均分子量为
1819×104
、4511 ×104。用 HPLC色谱、IR色谱测定其结构,表明凤尾菇多糖B是由半乳糖、木糖、树胶醛糖等糖基组成
的, 摩尔比为半乳糖∶木糖∶树胶醛糖= 110∶ 0174∶ 20193。
关键词: 凤尾菇; 多糖; 提取
中图分类号: O626112 文献标识码: A
文章编号: 1003 - 8310 (2003) 05 - 0043 - 03
食用菌多糖在国际上被称为‘生物应达效应
物’ (Biological Resporse modifier , 简称 BRM) , 它对
肿瘤的生长具有一定的抑制作用 , 能够恢复和提高
人体免疫活性[1 ]
, 已有数种多糖如香菇多糖、银耳
多糖作为癌症的免疫治疗剂用于临床[2 ]。随着生物
工程、生物大分子新技术的不断发展 , 使国内外对
食用菌多糖的研究成为分子生物学、医学等领域的
关注热点。金静君等发现凤尾菇提取物 (PSF) 具
有一定的抗癌活性[3 ]。有关凤尾菇多糖的提取纯化
及其理化性质未见文献报道。本文以凤尾菇子实体
为原料 , 提取水溶性多糖 , 并对凤尾菇子实体多糖
的分离纯化及其部分性质进行一系列研究。
1 材料与方法
111 材料与试剂 实验用的新鲜凤尾菇子实体系福
建省福州地区栽培, 实验前将原材料洗净, 凉干备
用。Spehaden G 75由上海医药采购站供应; 其它试剂均
为分析纯试剂。
112 实验方法
11211 工艺流程 (见图1)
凤尾菇子实体 粉碎 提取 过滤 浓缩 脱除蛋白 沉淀
过滤 多糖粗品 柱层析分离 多糖精制品
图1 工艺流程示意图
提取方法: 称取一定量的凤尾菇子实体 , 经粉
碎后加入适量的蒸馏水 , 加热提取数小时 , 冷却后
过滤 , 滤渣再加入适量蒸馏水按上述方法提取一
次 , 合并两次滤液。将滤液浓缩并用三氯乙酸脱除
其中的蛋白质 , 再用自制沉淀剂使多糖沉淀 , 过滤
后将滤饼置于40～50℃烘箱中烘干、研碎 , 得到黄
白色的凤尾菇多糖粗品 A , 计算出从 100g 新鲜凤
尾菇子实体的多糖提取率 , 在探索实验的基础上 ,采用正交实验法[3 ]
筛选出最佳工艺条件。
11212 柱层析分离 将多糖粗品A用011mol L Na2
Cl溶液配制成 1 %溶解液 , 在 Sephadex G 75层析柱
(40cm× 116cm) 上进行层析分离 , 用011mol L NaCl
溶液洗脱 , 部分收集器分部收集 , 流速 014mL
min , 每10min收集1管 , 用苯酚 —硫酸法比色测定
糖含量。
11213 纯度鉴定与样品分析: 将上述精制品B、C
配制成一定浓度的水溶液 , 描绘 HPLC色谱图 , 色
谱条件: 岛津 LC - 6A 高效液相色谱仪配 Waters
柱 , 流动相为二次蒸馏水 , 流速 1mL min , 由示差
折光仪检测 , 以葡聚糖为标样 , 计算机自动打印出
数据。计算出峰宽指数和平均相对分子质量。
11214 糖基组成与摩尔比的测定 凤尾菇多糖 B
加适量稀盐酸水解 , 加热至 70℃, 抽真空除酸 ,制成进样液 , 进样描绘色谱图 , 色谱条件: 岛津
LC - 6A高效液相色谱仪和 NH2 柱 , 流动相为重蒸
乙睛 , 流速1mL min , 示差折光仪检测 , 以八种标
准单糖为标样 , 用外标法由计算机自动打印出数
据。
11215 红外光谱分析 将少量的多糖样品B 干燥
后, 与150mg的 KBr混合均匀, 并在玻璃研钵中充分
研磨, 压制成凌园片, 然后置于 PE - 577型红外分光
光度计上进行测试, 扫描范围4 000～200cm- 1。
2 结果与讨论
211 提取工艺 表1是正交实验的结果 , 凤尾菇
子实体多糖提取的最佳工艺条件是: 提取温度为
90℃、提取时间为2h、料液比 (w v) 为1 112。从
R值可以看出 , 三因素中 , 提取温度对凤尾菇子实
体多糖提取率的影响最大。
收稿日期: 2003 - 01 - 27
34 第22卷 第5期 中国食用菌 EDIBLE FUNGI OF CHINA
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. 表1 正交实验的设计与结果
序号 温度
( ℃)
时间
(h)
料液比
(w v)
提取率( %)
1 80 2 112 01052
2 80 3 114 01068
3 90 2 112 01086
4 90 3 114 01086
K1 01120 01138 01138
K2 01172 01154 01154
R 01052 01016 01016
212 凤尾菇子实体多糖的分离纯化 凤尾菇子实
体多糖 A 在 Sephade G 75层析柱上的洗脱情况见图
2 , 分离得到 B、C 两个洗脱峰 ......
方幼兰1
, 刘艳如2
(1. 福建师范大学高分子研究所生物大分子研究室 福州 350007 , 2. 福建师范大学生物工程学院 福州 350007)
摘要: 从凤尾菇子实体提取水溶性多糖粗品A , 经分离
纯化, 得到多糖纯品B、C两个组分。B、C的平均分子量为
1819×104
、4511 ×104。用 HPLC色谱、IR色谱测定其结构,表明凤尾菇多糖B是由半乳糖、木糖、树胶醛糖等糖基组成
的, 摩尔比为半乳糖∶木糖∶树胶醛糖= 110∶ 0174∶ 20193。
关键词: 凤尾菇; 多糖; 提取
中图分类号: O626112 文献标识码: A
文章编号: 1003 - 8310 (2003) 05 - 0043 - 03
食用菌多糖在国际上被称为‘生物应达效应
物’ (Biological Resporse modifier , 简称 BRM) , 它对
肿瘤的生长具有一定的抑制作用 , 能够恢复和提高
人体免疫活性[1 ]
, 已有数种多糖如香菇多糖、银耳
多糖作为癌症的免疫治疗剂用于临床[2 ]。随着生物
工程、生物大分子新技术的不断发展 , 使国内外对
食用菌多糖的研究成为分子生物学、医学等领域的
关注热点。金静君等发现凤尾菇提取物 (PSF) 具
有一定的抗癌活性[3 ]。有关凤尾菇多糖的提取纯化
及其理化性质未见文献报道。本文以凤尾菇子实体
为原料 , 提取水溶性多糖 , 并对凤尾菇子实体多糖
的分离纯化及其部分性质进行一系列研究。
1 材料与方法
111 材料与试剂 实验用的新鲜凤尾菇子实体系福
建省福州地区栽培, 实验前将原材料洗净, 凉干备
用。Spehaden G 75由上海医药采购站供应; 其它试剂均
为分析纯试剂。
112 实验方法
11211 工艺流程 (见图1)
凤尾菇子实体 粉碎 提取 过滤 浓缩 脱除蛋白 沉淀
过滤 多糖粗品 柱层析分离 多糖精制品
图1 工艺流程示意图
提取方法: 称取一定量的凤尾菇子实体 , 经粉
碎后加入适量的蒸馏水 , 加热提取数小时 , 冷却后
过滤 , 滤渣再加入适量蒸馏水按上述方法提取一
次 , 合并两次滤液。将滤液浓缩并用三氯乙酸脱除
其中的蛋白质 , 再用自制沉淀剂使多糖沉淀 , 过滤
后将滤饼置于40～50℃烘箱中烘干、研碎 , 得到黄
白色的凤尾菇多糖粗品 A , 计算出从 100g 新鲜凤
尾菇子实体的多糖提取率 , 在探索实验的基础上 ,采用正交实验法[3 ]
筛选出最佳工艺条件。
11212 柱层析分离 将多糖粗品A用011mol L Na2
Cl溶液配制成 1 %溶解液 , 在 Sephadex G 75层析柱
(40cm× 116cm) 上进行层析分离 , 用011mol L NaCl
溶液洗脱 , 部分收集器分部收集 , 流速 014mL
min , 每10min收集1管 , 用苯酚 —硫酸法比色测定
糖含量。
11213 纯度鉴定与样品分析: 将上述精制品B、C
配制成一定浓度的水溶液 , 描绘 HPLC色谱图 , 色
谱条件: 岛津 LC - 6A 高效液相色谱仪配 Waters
柱 , 流动相为二次蒸馏水 , 流速 1mL min , 由示差
折光仪检测 , 以葡聚糖为标样 , 计算机自动打印出
数据。计算出峰宽指数和平均相对分子质量。
11214 糖基组成与摩尔比的测定 凤尾菇多糖 B
加适量稀盐酸水解 , 加热至 70℃, 抽真空除酸 ,制成进样液 , 进样描绘色谱图 , 色谱条件: 岛津
LC - 6A高效液相色谱仪和 NH2 柱 , 流动相为重蒸
乙睛 , 流速1mL min , 示差折光仪检测 , 以八种标
准单糖为标样 , 用外标法由计算机自动打印出数
据。
11215 红外光谱分析 将少量的多糖样品B 干燥
后, 与150mg的 KBr混合均匀, 并在玻璃研钵中充分
研磨, 压制成凌园片, 然后置于 PE - 577型红外分光
光度计上进行测试, 扫描范围4 000～200cm- 1。
2 结果与讨论
211 提取工艺 表1是正交实验的结果 , 凤尾菇
子实体多糖提取的最佳工艺条件是: 提取温度为
90℃、提取时间为2h、料液比 (w v) 为1 112。从
R值可以看出 , 三因素中 , 提取温度对凤尾菇子实
体多糖提取率的影响最大。
收稿日期: 2003 - 01 - 27
34 第22卷 第5期 中国食用菌 EDIBLE FUNGI OF CHINA
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. 表1 正交实验的设计与结果
序号 温度
( ℃)
时间
(h)
料液比
(w v)
提取率( %)
1 80 2 112 01052
2 80 3 114 01068
3 90 2 112 01086
4 90 3 114 01086
K1 01120 01138 01138
K2 01172 01154 01154
R 01052 01016 01016
212 凤尾菇子实体多糖的分离纯化 凤尾菇子实
体多糖 A 在 Sephade G 75层析柱上的洗脱情况见图
2 , 分离得到 B、C 两个洗脱峰 ......
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