高效液相色谱指纹图谱应用于地黄的研究

    曾 志3 1

    杨东晖1

    宋力飞2

    杨 挺1

    刘乡乡2

    袁 敏1

    曾和平1

    1

    (华南师范大学化学系分析测试中心 ,广州 510631) 2

    (广州市香雪制药股份有限公司 ,广州 510530)

    摘 要 利用高效液相色谱建立了地黄的色谱指纹图谱。采用反相 C18柱(5μm ,150 mm× 4. 6 mm) ,流动相甲

    醇∶水(VP V = 5∶ 95) ,检测波长为280 nm ,流速1. 0 mLP min进行实验。根据相对保留值和相对面积值对色谱指

    纹图谱进行分析对比研究 ,建立了控制地黄药材质量的新方法。该法为中药样品的鉴定提供了较全面的信

    息 ,并为 HPLC在复杂组分的样品分析领域开拓了新的应用途径。

    关键词 地黄 ,高效液相色谱 ,色谱指纹图谱 ,质量控制

    2003201211收稿;2003208211接受

    本文系广东省科技计划项目重大专项(No. A301020101) 、广东省自然科学基金项目(No. 011442) 、广东省教育厅高校自然科学研究项目

    (No. 0124)和广东省中医药局科研项目(No. 403047 ,401039)资助

    1 引 言

    地黄为玄参科(scrophulariaceae)植物( Rehmannia glutinosa libosch. )的新鲜或干燥块茎 ,前者称为“鲜

    地黄” ,后者称为“生地黄或地黄”。生地黄经炮制加工后称“熟地黄”。地黄为我国著名中药材之一。地

    黄植物的叶(地黄叶) 、花(地黄花)和种子(地黄实)亦供药用。生地黄 ,性甘、寒 ,具有清热凉血、养阴、生

    津等功效[1 ,2 ]。地黄在临床上应用十分广泛 ,除与其它中药配伍作汤剂外 ,以地黄为主的中成药品种繁

    多。它的主要化学成分为甙类 ,其中又以环烯醚萜甙类为主[3 ]

    ,如梓醇 (catalpol) 等。梓醇为地黄中的

    代表性活性成分 ,曾有报道用高效液相色谱法、薄层色谱法等对其进行分析[4 ,5 ]。我们正致力于应用色

    谱指纹图谱对中药的质量控制[6 ,7 ]

    和应用有机质谱学对中药的有效成分进行研究[8 ]。本文采用 HPLC

    法 ,利用相对保留值与相对面积值两个参数研究了生地黄药材的液相色谱指纹图谱 ,讨论了地黄的液相

    色谱指纹图谱在药材质量控制中的应用。

    2 实验部分

    2. 1 仪器、试剂与材料

    LC26A高效液相色谱仪(日本岛津公司) ;SPD26AV可调波长紫外检测器(日本岛津公司) ;8022 型离

    心沉淀机(上海手术器械厂) ;数据处理:南京千谱软件有限公司 HW色谱工作站。流动相用国产色谱纯

    甲醇 ,二次重蒸水;供试品配制用有机溶剂均为分析纯试剂。地黄药材样品的产地和采收时间见表1。

    表1 地黄药材样品

    Table 1 The samples of materia medica

    样品编号 Sample No.

    产地 Sources

    采收时间 Collection date

    备注 Notes

    1 山西临汾Linfen Shanxi 1999年秋 Autumn , 1999 饮片 Film

    2 河南嵩县 Songxian , Henan 1999年秋 Autumn , 1999 一等品,大块状 Grade No. 1 , big stem tuber

    3 陕西安康 Ankang , Shaanxi 1999年11月 Nov. , 1999 二等品,大块状 Grade No. 2 , big stem tuber

    4 安徽太和 Taihe , Anhui 1999年秋 Autumn , 1999 小块状 Small stem tuber

    5 河南三门峡 Sanmenxia , Henan 1999年秋 Autumn , 1999 大块状 Big stem tuber

    6 河南焦作Jiaozuo , Henan 1999年秋 Autumn , 1999 大块状 Big stem tuber

    7 河南焦作Jiaozuo , Henan 1999年秋 Autumn , 1999 小块状 Small stem tuber

    8a

    河南 Henan 1999年秋 Autumn , 1999 大、小块状混合 Mixture of big and small stem tuber

    9a

    河南 Henan 1999年秋 Autumn , 1999 大块状 Big stem tuber

    10a

    河南 Henan 1999年秋 Autumn , 1999 饮片 Film

    a. 8 号、 9号和10号样品购自药材公司,其产地均为河南,但确切地区不详(obtained from materica medica company)

    第31卷

    2003年12月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报

    Chinese Journal of Analytical Chemistry

    第12期

    1485～1488

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.2. 2 色谱条件

    Diamonsil C18色谱柱(5μm ,150 mm× 4. 6 mm) ;检测波长280 nm;流速 1. 0 mLP min ;流动相: 甲醇∶水

    ( VP V = 5∶ 95) ;进样量10μ L。地黄样品液的制备:分别称取不同编号的地黄药材样品50 g ,加水250 mL ,回流5 h ,过滤 ,滤液用正丁醇萃取 ,浓缩去有机溶剂后用甲醇溶解 ,配成供试液进行 HPLC分析。

    3 结果与讨论

    3. 1 指纹图谱的条件选择

    用地黄的水提液制成地黄色谱指纹图谱的供试液。地黄供试液经紫外扫描 ,在 281. 7 nm处和 230

    nm以前区域有吸收。以210 nm为检测波长进行实验 ,发现只有一个明显的特征峰(如图 1) 。据文献[4 ]

    报道该特征峰为梓醇的吸收峰。进一步研究后发现在 280 nm处出现了 3 个很明显的特征峰(如图 2) ,故选用此波长进行指纹图谱的研究。

    图1 9号样品在210 nm的液相色谱指纹图谱

    Fig. 1 High performance liquid chromatographic fingerprint of

    the sample No. 9 at 210 nm

    图2 9号样品在280 nm的液相色谱指纹图谱

    Fig. 2 High performance liquid chromatographic fingerprint of

    the sample No. 9 at 280 nm

    3. 2 指纹图谱的建立

    地黄样品在上述实验条件下其色谱峰较密集。在色谱图上选择一个特定色谱峰为参考峰 ,该峰为

    所有样品所共有 ,且位于色谱图较中心位置 ,具有较高的强度。将其指定为参考峰 ,在此基础上求出所

    有色谱峰的相对保留值。其计算公式为:α= triP trs。其中 tri为待测峰的绝对保留时间 , trs为参考峰的绝

    对保留时间。相对面积计算公式为: Sr = (待测峰i 的相对面积P 标准样品的总面积) × 100 %。

    例如:9号样品选择绝对保留值为13. 98 min的色谱峰为参考峰 trs ,它的相对保留值α为 1. 000 ,其

    对应的相对面积 Sr 为(1438431P 3008919) × 100 % = 47. 81 % ......