敬 生 物 学 通 报

    . 菌丝体培养物 中咆外 CMC 酶和 HC酶的活性

    I 有明显的影响。在侧耳 ( P l e u r o t u o s t r e a t u s )

    的研究中都发现了类似 的现象 。 但是关于 这

    一

    现象发生 的生 理生化机制 尚不 清楚 ，很 可能

    . 子实体发育与纤维分解酶的活性增加的生理生

    化调节程序存在蓿密切的内在联系。因此，深

    弓 <

    人研 究下去 ，可为探讨 子实体发 育的生 理生化

    艇律和纤维分解酶合成的调节机制等方面提供

    新的资辩翱研究思路。

    参 考 文 献

    1 .壬玉万 、 王云 ： 融生物 学通报 ， l 8 ( 1 ) ：9 一 l l ， l 9 9 L 。

    金合欢根瘤菌的几种酶活特性

    摘要 金合欢根瘤菌 R h i z o b i u m r a 一 f c r n c s i a n a )的 氧化酶、过氧化氧酶、腮酶、青霉

    素酶和 一 半乳糖昔酶均呈阳性。 经过酶话性定量铡定表明金合欢根籀萄有葡萄糖醢 6 一 磷酸 脱氢 酶

    ( 6 P G D)和 一 半乳培苷酶的酶活性 ， 而慢生型大豆撮庙箧未测到上述两种酶活性。硪据聚丙烯酰胺凝

    胶电泳酯酶图诺 ， 6群金 合欢撮瘤菌可分威两群 ：菌株 AF 1 、 A F 2和 A F 3的酯酶图谱 中有 A带 ， A F 4 、AF 5和 A F6的酯酶图谱中没有 A带。

    关键词 垒鱼壅堡塑鱼； j D j 丘当丑越童盏j 酯酶图谱

    国外曾对金台欢根瘤菌 R h i z o b i u m s p . ( .

    f a r n e s i a n a )的共生特性 、 培 养特 性、碳源利用

    及石蕊牛奶反应等方面作了初步的研究 。 但

    对金台欢根瘤菌的葡萄糖 酸 一 6一 磷 酸 聪氢 酶

    ( 6 P GD) 、 葡萄糖一 6 一 磷酸 脱氢酶 ( G6 P D)和 一

    半乳 糖苷酶 的定量 飒 ! 】 定及酯酶分析 等方面研究

    尚未 见报道。我们在对本 地区分离的 几株金 合

    欢根瘤菌E 性 和共生的某些特性研究基础上，又对金合欢根瘤菌及大豆快、慢生型根瘤菌的

    几种酶的酶学特性进行 了研究。 并比较了金合

    欢根瘤菌各菌株间及与大豆快.慢生型根瘤菌

    之间在酶学方面的异同，从而探求不同根瘤菌

    在生长速度、营养物质利用等生理生化特性方

    面存在差异的原因。

    ，材 料 和 方 法

    ( 一)实验菌株

    1 . 快 生 型 根 瘤 菌： 6株 金 台 欢根 瘤 菌

    Rh i z o b i u m s p . ( .[ a r n e s i a n a ) ：A F1 、A F 2 、AF 3 、 AF 4、 AF 5 、 AF 6和一株大 豆根瘤菌 ( R h i —

    n o b i u m f r e d i i ) U S D A1 9 1 ，均由本实 验 室 提

    供。

    2 . 慢生型根瘤菌：大豆根瘤菌 ( B r a d y r h L

    z o b i u r a ] a p o n i c u m)P RC1 1 3 — 2 由中 国科学院

    油料研究所赠送。

    ( - - )培养基

    1 .PA培养基： Mg s o. · 7 O 0 . 4 9 2 g ，胰

    蛋 白胨 4 0 g ，水 1 0 0 0 ml ， o H6 . 8 o

    2 .TY 培 养基：酵母粉 2 g ，胰蛋 白胨 3 g ，水 1 0 0 0 ml ， 琼脂 1 8 g ，p H 6 . 8 。

    ( 三)五 酶的酶活性定性测定

    脲酶、氧化酶和过氧 化氢酶 的定性测定参

    见《 一般细 菌常 用鉴 定方法》 。 一 半乳糖苷 酶

    定性测定参见 周德庆 的方法 ，青霉素酶定 性

    测定参见 F o l e y c ~ 的方法o

    ( 四)葡萄糖一 6 一 磷酸脱氢酶 ( G6 PD) 、 葡

    萄糖酸一 6 一 磷酸脱氢酶 ( 6 PGD)和 卢一 半乳糖

    苷酶酶活性定量测定

    年

    ～

    ，I . ●

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    1 .G6 P D、6 P GD 的酶 活 性 测 定：参 考

    S a d o ws k y 的方法进行。

    酶粗 提液制备：接种 根瘤 菌到 酵 母 膏一 葡

    萄 糖培养 基中 ，2 7 0 C摇床振 荡 培 养 7 2小 时 ，4 o C， 6 0 0 0 g 离心 l O分钟收 集菌 体 ，0 . 0 5 mo l l L

    磷酸缓冲液 ( p H7 . 4 )冲洗菌体两次 ， 并制成一

    定浓度 的菌悬液。 超声波处理 l 0分钟破碎细

    胞 ， 4 ~ C，1 4 0 0 0 g离心 3 0分钟得酶粗提 液 ，于

    一

    2 0 ~ C保 存备用。

    反应液总体积为 3 ml 。 包括 ： p H8 . 5 0 . 2 t oo l

    L Tr i s缓冲液 0 . 5 ml ，0 . 1 mo l L 氯化 镁 溶 液

    0 . 3 m! ，辅酶 I I溶液( 每毫升溶液含辅酶 I I 4 . 0

    mg )O 3 ml ，重蒸水 1 . 7 ml ， O . 1 mo i L葡萄糖酸

    钠一 6 一 磷酸 ( 或葡 萄糖 一 6 一 磷酸)0 . 1 ml ，酶溶液

    0. 1 ml 。另设三 种对照处理：

    ④ 以重蒸水代 替上述 底物 葡萄糖酸钠一 6 一

    磷酸( 或葡萄糖- 6 - 磷酸)作为空 白对照；③同

    时 加快、慢生型根 瘤菌 酶溶 液到上述 反应体 系

    中；@上述反应液申加入还原型辅酶 I I ，并去

    掉 底物葡萄糖 酸 钠一 6 一 磷 酸 ( 或 葡 萄 糖一 6 一 磷

    酸) o蛋白质含量测定用 L o wr y t ~等的方法进

    行。

    2 . 一 半乳糖菅酶活性测定：酶液基本按上

    法获得， 只改用台 0 . 5 %( w V)乳糖的 TY 液

    体 培养基。

    反应液总体积为 4 . 8 ml 。 包括：④ 2 . 7 ml 酶

    反应缓冲液 ， 0 . 1 mo l l L磷酸钠缓冲液 ( p H7 . 0 ) .

    1 0 ～t oo l L Mg S OI · 7 H2 O，2× 1 0 一 t oo l L M口 一

    S O . · H： O。③ I . 8 ml底物溶液 ， O . 1 mo l L 磷酸

    钠缓冲液 ( p H7 0 ) ，l 3× 1 0 - z mo l L 邻一 硝基

    苯酚一 一 D一 半乳糖营 ......