1●●1年第 1期

    Ne. 1， 1 9 9 1

    华 南 师 范 大 学 学 报 ( 自 然 科 学 版 )

    J OURNAL OF SOUTH C HI NA NORM AL UNI VERS I TY

    (NATURAL SCI ENCE EDI TI ON )

    金合欢根瘤蕾的生物学特性

    关■饲；金合欢’根瘤菌’菌株’代时，石蕊牛奶 _ - ● _ _ ● ‘ — I 一 - _ l _ ● _ ● _ 一 ● - _ _ ～ I - _ _ _ I ● - - _ _ -_ l _ _ 一

    中■法分类号：Q9 4 8 . 1 2 物 .

    金 合欢是一种多年生木本豆科植物 ，主要生长在热带及亚热带地区.国外金合欢根瘤菌

    的研究工作在6 O 年代巳拉开序幕.Tr i n i c k( 1 )、Dr e y f u s (2 ) 分别在澳洲和西非从金合欢

    分离到根瘤菌并鉴定分离物为快生型.金合欢引种到我国已有多年，但金合欢根瘤菌研究工

    作 尚属空 白.本实验以从 华南植物 园和华南师大生物园分离的几株金合欢根瘤菌为材料.

    ， 对

    其自生和共生特性进行了研究.

    1 材料和方法

    1 . 1 实验誓株 快生型根瘤菌。金 合欢根 瘤菌 MXAF- 、MXAF： 、MXAFs 、MXAF . 、MXAF。 及MXAF。 由作者自己分离，大豆根瘤菌US DA1 9 1 来自中国农科院土肥所，银合欢

    根瘤菌在本实 验室获取.

    慢生型 根瘤菌。大 豆根瘤菌 PR C1 1 3 — 2系中国农业科学院油 料所赠送， 台湾相思根瘤

    菌、大叶相思根瘤菌、绢毛相思根瘤菌由本实 验室提供.

    1 . 2 金合欢根瘟菌的获得 1 9 8 7 年1 1 月、1 9 8 g 年4 月分别从 华南植物 园和华南师大生物园采

    集金合欢健壮根瘤，用常规方法进行根瘤表面灭菌，划线分离纯化得单菌落 然后进行回黄

    本文1 9 9 0 年 8月收蓟.

    ●

    维普资讯 http:www.cqvip.com 实 验，待形 成根瘤后 ，按上法再次分离纯化.

    1 . 3 结瘤实验 参见曹燕珍 ( 8 ) 等的方法. 2个月后收获植 株 ，用凯氏定 氮 法 测 定 含氮

    量 ，乙炔还原法测定根瘤 固氮酶活性. ，1 . 4。 。 菌体和茵落特征观察 革兰氏染色、芽孢染色按常规法进 行.

    1 . 5 代 时及酸碱反应 参考曹燕珍 ( 8 ) 方 .

    1 . 6 ：生理生化特征

    . 6 . 1 碳源利用 以去掉甘露醇的YE MA为基本培养基，分别加入各种碳源使其终浓度为

    0 . 3 o (W V) ，灭菌后分装各试管中.以各菌株菌悬液接种， 并以不接种和不加碳源为对

    照.2 7 。 C培养 ，逐天观察至 5天为止.

    1 . 6 . 2 。 p H对生长的影响 采用YEM培养基，灭菌后调节成一系列p H梯度，然 后 分 装 试

    管.接种后置2 7 。 C 摇床振荡培养， 5 天后观察生长情况.

    1 . 6 . 3 抗菌素抗性谱 将新配制的各种抗菌素溶液分别加入到巳定量并 巳冷 却至 5 O 。 C的

    YEMA培养基 中，混匀.各种抗菌素保持如下浓度 (微克毫升 ) ：链霉素1 O 、 5、2 . 5 ，庆大 霉素3 O 、1 5 、7 . 5 ， 青霉素 1 0 0 、5 0 ) 四环素1 5 、1 O 、 5，红霉素1 O 、 5、2 . 5 ，卡峁霉

    素2 O 、1 O .将供试菌株的菌悬液接种于YEMA平板上，各菌株均设三 次 重复，以来加抗菌

    素平板作对照 ，2 8 。 C培养 6 . 天观察结果. 。

    1 . 6 . 4 石蕊牛 奶反应 。 。 按常规方 法进行.

    2 结果

    通过 初次分离纯化及回接以后的再次分离纯化 ，获得 了 6株金合欢根瘤菌 ，分别编号为

    M XAFl 、 M XAF2 、 M XAF 3 、 M XAF‘ M XAF 、 M XAF8.

    2 . 1 菌体 和菌落特征

    结果见表 . 甘露醇是根密菌培养的传统碳源物质 绝大部分根瘤菌在 YEMA培 养基

    上生长旺盛 El ' k a i 1 。 c ) 等认为‘ 粘掖的产生与培养基中碳源种类有关.我们实 验 结 果 表明

    MXAF MXAF 。 和MXAF。 的最佳碳源为甘露醇，而 MXAF . 、MXAF 和MXAF 一 最性

    碳源为果糖. . 根据菌落特征可初步将 6 株金合欢根癌菌分~MXAFl 、MXAF： 、MXAF 和

    MXAF . 、MXAF 、MXAFe 两大类群.所有菌株菌落直径在 1 1 1 1 1 1 1 以上 ，这与快生型根瘤

    菌特征梧同 . ， . 、2 . 2 代耐与酸碱反应 .

    结果见表. 2 . Tr i n i e k( - 5) 认为快生型根瘤菌代时为2 — 4小时，在YEM培养基上产酸，而慢生型根瘤菌代时在 6小肘以上，在YE M培养基上产碱.我们实验结果表明， t 金 合 欢根

    瘤菌代时均在 3— 4 小 时之间 ，代谢产 酸.

    2 . 3 生理生化特征

    2 . 3 . 1 碳源利 用 结果见表 3.Gr a h a m(6 ) 认为快生型根瘤菌利用碳 源 范 围 比 慢 生型

    8 3

    维普资讯 http:www.cqvip.com 广 ，El k a n(4 ) 等进一 步报导快生型根瘤菌能利用蔗糖、麦芽糖、乳糖等双糖 ，而慢生型根

    瘤菌不能.我们的实验结果表明所试 6株金合欢根瘤菌能利用所试1 8 种碳源的大部分.值得

    注意} 勺是：菌株MXAF . 、MXAF 和MXAF。 不雒 利用' 般快生型根瘤菌能利用的蔗糖.

    2 . 3 . 2 温度对生长的影响 根瘤菌正常生长温 受是2 6 。 C一2 8。 C.我们实验表明金合欢根瘤

    嚣在4 2 。 C不能生长 ，即使转至2 8 。 C培养仍不生长 ，说 明4 2 。 C为 致死温度.所有金 合欢根瘤

    菌均能在3 7 。 C 生长且菌株MXAF. 、MXAF 和MXAF。 在4 0 。 C能 生 长 ，而对照菌1 9 1 却在

    3 7 。 C条件下不能生长 ，这 与金 合欢生长在高温的热带地 区有关.金合欢根瘤菌 在 2 O 。 C以下

    生长缓慢 ， 4。 C 下不生长.

    2 . 3 . 3 p H对 苌 l I j 结果见表4 .金合欢根瘤菌生长 辩褪 4 . 5 —9 . 0 ，在中性偏

    碱性条件下生长更旺.

    2 . 3 . 4 抗萄素抗性水平 结果见表 5.根瘤菌对各种抗菌素的自然抗性水平 是 可以作为菌

    株间存在差异的标记，在细微的识别鉴定上是有用处的.实验结果表明所有金合欢根瘤菌对

    庆大霉素、链霉素、四环素敏感 ，对青霉素均有一定抗性.

    2 . 3 . 5 石蕊牛奶反应 结果见表 6.菌株 MXAF. 、MXAF 2 和MXAF3 培养后产酸并形成

    乳清环而菌株MXAF . 、MXAF 和MXAF。 培养后产碱无乳清环出现.

    2 . ● 共生特性 结果见表 7.接种 根瘤菌的金合欢生长明显优于对照组 ......