金莲花提取工艺

    叶绍明, 李药兰, 杨宜婷, 岑颖洲

    (暨南大学 化学系 ,广东 广州 510632)

    长瓣金莲花是毛茛科植物金莲花 Trol l ius chi2

    nensis Bunge 的干燥花 ,为清热解毒药。现代药理研

    究表明 ,金莲花的水提液有明显的抑菌作用 ,其特点

    是抑菌谱广[1～3 ]。临床观察表明金莲花对急慢性

    扁桃体炎、咽炎及上呼吸道感染等的疗效显著 ,总有

    效率为 92. 7 %[2 ,4 ]。目前对金莲花的总黄酮的研究

    较多 ,认为总黄酮是金莲花的抑菌有效部位[5 ]。

    本文用正交法对金莲花的提取工艺进行了研究

    探讨 ,分别以总黄酮含量和体外抑菌活性为指标 ,筛

    选出总黄酮含量最高和体外抑菌活性最好的提取工

    艺。试 验 所 选 用 的 菌 种 为 金 黄 色 葡 萄 球 菌

    ATCC6538P[3 ]。比较两条最佳工艺路线所得提取

    物的总黄酮含量和体外抑菌活性 ,探讨金莲花的抑

    菌有效部位 ,初步证实除黄酮外 ,金莲花还有其他抑

    菌作用较强的有效部位。

    1 材料和仪器

    长瓣金莲花采自石家庄(中国药材公司鉴定及

    提供) ;金黄色葡萄球菌 ATCC6538P (德国先灵公

    司) ;MH肉汤(浙江省军区后勤部卫生防疫检验所 ,批号 960863) ;氯化三苯四氮唑(简称 TTC ,分析纯 ,上海试剂三厂 ,批号 971218) ;芦丁对照品(中国药

    品生物制品检定所 ,批号 760706) ;聚酰胺薄膜 ,柱

    层析用聚酰胺粉(120～200 目 ,购自浙江省台州四

    青生化材料厂) ;其他试剂均为分析纯。

    UV2260 紫外可见分光光度计(岛津) ; ZF2I 型

    三用紫外分析仪(上海) ;96 孔微量板(美国 Coster

    产品) 。

    2 实验

    2. 1 标准曲线的绘制

    精密称取在105 ℃常压干燥至恒重的芦丁对照

    品 100 mg ,置于50 mL 容量瓶中 ,加甲醇35 mL ,置

    [收稿日期] 2001204211

    [基金项目] 广东省中医药管理局资助课题(100064)

    [通讯作者] 电话: (020) 85220223 E2mali :yeshaoming @163.

    com

    水浴微热使之溶解 ,放冷 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀。

    精密量取 5 mL 置于 50 mL 容量瓶中 ,加水稀释至

    刻度 ,摇匀 ,得芦丁标准溶液(0. 2 mg·mL - 1) 。

    精密量取芦丁标准溶液0 . 0 ,1 . 0 ,2 . 0 ,3 . 0 ,4. 0 ,5. 0 ,6. 0 mL ,分别置于 25 mL 容量瓶中 ,各加

    水至 6 mL ,加 5 %亚硝酸钠溶液 1 mL ,摇匀 ,放置 6

    min ,加 10 %硝酸铝溶液 1 mL ,摇匀 ,放置 6 min ,再

    加4 %氢氧化钠溶液 10 mL ,加水至刻度 ,摇匀 ,放

    置15 min ,以第 1 管作空白对照 ,在 500 nm 处测吸

    光度。

    绘制浓度2吸收度曲线 ,求算回归方程为

    Y = 0. 0919 X + 0. 0001 , r = 0. 9994 ,对照品在 0～

    0. 048 mg· mL - 1

    呈良好线性。

    2. 2 样品总黄酮含量测定

    精密吸取样品液适量 ,减压浓缩成浸膏后 ,溶解

    于少量水中 ,过聚酰胺柱处理。聚酰胺柱先用蒸馏

    水洗脱 ,至洗脱液几近无色时 ,换甲醇洗脱 ,同时用

    聚酰胺薄层定性跟踪总黄酮的洗脱情况(展开剂乙

    酸乙酯2甲醇2水为 6∶ 3∶ 1 ,用 1 %三氯化铝乙醇溶液

    作显色剂 ,在 365 nm 紫外灯下观察薄层上斑点的

    荧光反应) ,并用盐酸2镁反应平行验证 ,将呈阳性反

    应的流分合并 ,按标准曲线项下操作 ,测定吸收度 ,计算含量 ......