蕨菜愈伤组织高效再生体系的建立.PDF
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2006年2月23日
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参见附件(76KB，3页)。
园 艺 学 报 2003 , 30 (3) : 343～345
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期: 2002 - 10 - 31 ; 修回日期: 2003 - 02 - 11
蕨菜愈伤组织高效再生体系的建立
姜长阳 宁淑香 于 淼 王 宇 宋立秀
(辽宁师范大学生命科学学院 , 大连116029)
摘 要: 报告了蕨菜不同外植体在含有不同激素的培养基上诱导、分化及生根情况 , 建立起高效再生
体系。诱导愈伤组织的最适培养基为1 2 MS + BA 0. 2 mg L + IBA 0. 4 mg L + NH4H2PO4 200 mg L ; 诱导愈伤
组织芽分化的最适培养基为1 2 MS , 芽分化率为 100 %; 不定苗在 1 2 MS + IAA 0. 2 mg L 培养基上生根率
为100 % , 同时可以形成健壮根茎; 具有根茎的试管苗移栽成活率达94 %。
关键词: 蕨菜; 组织培养; 植株再生
中图分类号: S 647 文献标识码: A 文章编号: 05132353X (2003) 0320343203
1 目的、材料与方法
蕨菜 〔Pteridium aquilinum (L. ) Kuhn.〕具有重要的经济价值。目前 , 已有关于蕨类植物组织培
养的报告〔 1～3〕, 但未见愈伤组织诱导及分化的报道。作者以采自大连旅顺山地的蕨菜根茎生长点、叶
柄、叶片为试材进行离体培养 , 以期建立蕨菜愈伤组织的高效再生体系。将采集的试材用清水冲洗
15 min , 剪成约5 cm的小段装到500 mL 磨口广口瓶中 , 先用 0. 05 %的安利洗涤液振荡洗涤 3 次 , 再
用无菌水洗涤 2 次 , 将材料移至超净工作台上 , 在无菌条件下用 70 %乙醇灭菌 30 s后 , 加入无菌水
冲洗1次 , 再倒入0. 05 %的 HgCl2 溶液振荡灭菌10 min , 最后用无菌水振荡洗涤4～5次。基本培养基
为1 2 MS , 琼脂6 g L , pH 5. 8 , 诱导培养基含蔗糖 30 g L , 生根培养基含蔗糖 15 g L , 光照强度
2 000～3 000 lx、光照时间10～13 h d , 培养温度16～26 ℃。
2 结果分析与讨论
2. 1 愈伤组织的诱导
将无菌材料剪成约0. 5 cm切段后 , 接种到附加NH4H2PO4 200 mg L、不同激素不同浓度的1 2 MS
培养基中进行愈伤组织的诱导。接种 20 d 左右 , 部分培养基上的外植体开始形成愈伤组织 , 初始为
直径约1 mm、黄绿色颗粒状 , 随后逐渐长成鲜绿色较大颗粒状。由于培养基激素组合与浓度配比不
同 , 对根茎生长点愈伤组织的诱导效果有较大差异。
由表1可见 , 培养基中单独使用BA 0. 2 mg L 或 0. 5 mg L , 不能诱导根茎生长点形成愈伤组织。
用浓度为0. 2 mg L 或0. 8 mg L 的 IBA、IAA、NAA、2 ,42D , 以及浓度为0. 4 mg L 的 IAA、NAA、2 ,42
D , 与上述浓度的BA配合使用 , 有的不能诱导出愈伤组织 , 有的虽能诱导出愈伤组织 , 但诱导率低 ,生长差。当 IBA 0. 4 mg L 与BA 0. 2 mg L 配合使用时 , 根茎生长点愈伤组织诱导率为 56 % , 并且长
势良好。这说明 , 诱导蕨菜根茎生长点愈伤组织的最适培养基是1 2 MS +BA 0. 2 mg L + IBA 0. 4 mg
L + NH4H2PO4 200 mg L。在该培养基上再分别以根茎生长点、叶片和叶柄为外植体进行愈伤组织的诱
导 , 诱导率分别为 59. 5 %、24. 6 %和 26. 7 %。这说明蕨菜孢子体的不同器官都能诱导形成愈伤组织 ,但以根茎生长点为外植体愈伤组织诱导率高。
2. 2 愈伤组织的分化
把在上述培养基中形成的愈伤组织在同一培养基上进行继代培养 , 愈伤组织迅速增殖 , 20 d可增
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.殖15～20倍。增殖后的愈伤组织由许多0. 1～0. 3 cm、外观质地光滑疏松、颜色嫩绿的颗粒组成。
将这种愈伤组织接种到附加不同激素的 1 2 MS培养基上 , 进行芽分化培养 , 20 d 后可见 (表
2) , 不同激素及不同浓度对芽分化影响很大。单独添加 BA 0. 5 mg L , 芽不分化; 单独添加 ZT
0. 5 mg L , 芽分化率为98. 6 %。分别单独添加 0. 2 mg L 的 IAA、IBA、NAA 和 2 ,42D 时 , 愈伤组织均
有芽分化 , 其中添加 IAA的 , 芽分化率达95. 9 %; 分别单独添加0. 6 mg L 的 IAA、IBA、NAA和2 ,42
D时 , 芽分化率分别为0、4. 3 %、0、0 , 这说明高浓度的生长素有抑制分化作用。相反 , 在不加任何
激素的1 2 MS培养基上芽分化率达100 % (插页1图版 , A) 。由此说明 , 在1 2 MS + BA 0. 2 mg L +
IBA 0. 4 mg L + NH4H2PO4 200 mg L 培养基上诱导的愈伤组织具有分化能力 , 并且分化率高于添加激
素的培养基 ......
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期: 2002 - 10 - 31 ; 修回日期: 2003 - 02 - 11
蕨菜愈伤组织高效再生体系的建立
姜长阳 宁淑香 于 淼 王 宇 宋立秀
(辽宁师范大学生命科学学院 , 大连116029)
摘 要: 报告了蕨菜不同外植体在含有不同激素的培养基上诱导、分化及生根情况 , 建立起高效再生
体系。诱导愈伤组织的最适培养基为1 2 MS + BA 0. 2 mg L + IBA 0. 4 mg L + NH4H2PO4 200 mg L ; 诱导愈伤
组织芽分化的最适培养基为1 2 MS , 芽分化率为 100 %; 不定苗在 1 2 MS + IAA 0. 2 mg L 培养基上生根率
为100 % , 同时可以形成健壮根茎; 具有根茎的试管苗移栽成活率达94 %。
关键词: 蕨菜; 组织培养; 植株再生
中图分类号: S 647 文献标识码: A 文章编号: 05132353X (2003) 0320343203
1 目的、材料与方法
蕨菜 〔Pteridium aquilinum (L. ) Kuhn.〕具有重要的经济价值。目前 , 已有关于蕨类植物组织培
养的报告〔 1～3〕, 但未见愈伤组织诱导及分化的报道。作者以采自大连旅顺山地的蕨菜根茎生长点、叶
柄、叶片为试材进行离体培养 , 以期建立蕨菜愈伤组织的高效再生体系。将采集的试材用清水冲洗
15 min , 剪成约5 cm的小段装到500 mL 磨口广口瓶中 , 先用 0. 05 %的安利洗涤液振荡洗涤 3 次 , 再
用无菌水洗涤 2 次 , 将材料移至超净工作台上 , 在无菌条件下用 70 %乙醇灭菌 30 s后 , 加入无菌水
冲洗1次 , 再倒入0. 05 %的 HgCl2 溶液振荡灭菌10 min , 最后用无菌水振荡洗涤4～5次。基本培养基
为1 2 MS , 琼脂6 g L , pH 5. 8 , 诱导培养基含蔗糖 30 g L , 生根培养基含蔗糖 15 g L , 光照强度
2 000～3 000 lx、光照时间10～13 h d , 培养温度16～26 ℃。
2 结果分析与讨论
2. 1 愈伤组织的诱导
将无菌材料剪成约0. 5 cm切段后 , 接种到附加NH4H2PO4 200 mg L、不同激素不同浓度的1 2 MS
培养基中进行愈伤组织的诱导。接种 20 d 左右 , 部分培养基上的外植体开始形成愈伤组织 , 初始为
直径约1 mm、黄绿色颗粒状 , 随后逐渐长成鲜绿色较大颗粒状。由于培养基激素组合与浓度配比不
同 , 对根茎生长点愈伤组织的诱导效果有较大差异。
由表1可见 , 培养基中单独使用BA 0. 2 mg L 或 0. 5 mg L , 不能诱导根茎生长点形成愈伤组织。
用浓度为0. 2 mg L 或0. 8 mg L 的 IBA、IAA、NAA、2 ,42D , 以及浓度为0. 4 mg L 的 IAA、NAA、2 ,42
D , 与上述浓度的BA配合使用 , 有的不能诱导出愈伤组织 , 有的虽能诱导出愈伤组织 , 但诱导率低 ,生长差。当 IBA 0. 4 mg L 与BA 0. 2 mg L 配合使用时 , 根茎生长点愈伤组织诱导率为 56 % , 并且长
势良好。这说明 , 诱导蕨菜根茎生长点愈伤组织的最适培养基是1 2 MS +BA 0. 2 mg L + IBA 0. 4 mg
L + NH4H2PO4 200 mg L。在该培养基上再分别以根茎生长点、叶片和叶柄为外植体进行愈伤组织的诱
导 , 诱导率分别为 59. 5 %、24. 6 %和 26. 7 %。这说明蕨菜孢子体的不同器官都能诱导形成愈伤组织 ,但以根茎生长点为外植体愈伤组织诱导率高。
2. 2 愈伤组织的分化
把在上述培养基中形成的愈伤组织在同一培养基上进行继代培养 , 愈伤组织迅速增殖 , 20 d可增
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.殖15～20倍。增殖后的愈伤组织由许多0. 1～0. 3 cm、外观质地光滑疏松、颜色嫩绿的颗粒组成。
将这种愈伤组织接种到附加不同激素的 1 2 MS培养基上 , 进行芽分化培养 , 20 d 后可见 (表
2) , 不同激素及不同浓度对芽分化影响很大。单独添加 BA 0. 5 mg L , 芽不分化; 单独添加 ZT
0. 5 mg L , 芽分化率为98. 6 %。分别单独添加 0. 2 mg L 的 IAA、IBA、NAA 和 2 ,42D 时 , 愈伤组织均
有芽分化 , 其中添加 IAA的 , 芽分化率达95. 9 %; 分别单独添加0. 6 mg L 的 IAA、IBA、NAA和2 ,42
D时 , 芽分化率分别为0、4. 3 %、0、0 , 这说明高浓度的生长素有抑制分化作用。相反 , 在不加任何
激素的1 2 MS培养基上芽分化率达100 % (插页1图版 , A) 。由此说明 , 在1 2 MS + BA 0. 2 mg L +
IBA 0. 4 mg L + NH4H2PO4 200 mg L 培养基上诱导的愈伤组织具有分化能力 , 并且分化率高于添加激
素的培养基 ......
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