落 叶 果 树 DEC I DUOUS FRUITS 2005 ( 2)

    猕猴桃实生苗组织培养体系建立的研究

    朱道圩 ,王静毅 ,吕宗强

    (河南农业大学林学园艺学院 ,郑州 450002)

    摘 要:以饱满成熟的猕猴桃种子为起始材料 ,用 2 . 5g·L - 1

    赤霉素处理 5小时 ,再用次氯酸钠灭菌消毒

    后 ,将萌芽的种子接种到 MS +蔗糖 20g·L - 1

    +肌醇 100mg·L - 1

    和 0 . 75%琼脂的培养基上 ,根、 茎、 叶生长表

    现良好 ,初步建立了猕猴桃实生苗组织培养体系。猕猴桃实生苗组织培养同利用茎段、 茎尖组织培养一样 ,培

    养基中无须附加任何激素。

    关键词:猕猴桃;实生苗;组织培养

    中图分类号: S663 . 4 文献标识码: A 文章编号: 1002 - 2910 (2005) 02 - 0005 - 03

    收稿日期: 2004 - 11 - 03

    基金项目:河南省自然科学基金项目 (0111011700)

    作者简介:朱道圩 (1943 - ) ,男,河南兰考人,教授,从事果树遗传育种研究工作。

    猕猴桃种类繁多 ,某些种类的果实品质仍

    需改进[ 1 ]。细胞工程、 基因工程可作为改进猕

    猴桃果实品质的手段 ,而组织培养及植株再生

    系统[ 2～4 ]

    是实施细胞工程和基因工程的重要基

    础。

    许多研究表明,用实生苗作起始材料诱导

    愈伤组织 ,植株再生效应较好[ 5, 6 ]。从遗传学

    角度讲 ,一株实生苗一种基因型 ,也有利于扩大

    基因型研究范围 ,对植株再生体系建立有一定

    帮助。因此 ,很有必要开展实生苗组织培养体

    系建立的研究,但这方面的研究尚无人报道。

    为此 ,笔者以猕猴桃种子为起始材料 ,研究用赤

    霉素处理种子和灭菌消毒方法 ,以及培养基配

    方对组培实生苗生长的影响 ,以期初步建立高

    效的猕猴桃实生苗培养体系。

    1 材料与方法

    试验在河南省农科院农作物新品种重点开

    放实验室进行。试材为美味猕猴桃 (Actinidia

    deliciosa)的饱满完熟种子。

    将种子洗净后 ,用 2 . 5g·L - 1

    的赤霉素 (赤

    霉素配制时用少量酒精助溶 )分别处理 5小时

    和 24小时 ,观察种子萌芽状况 ,统计萌芽率 ,比

    较两种处理对种子的破眠效果。

    将经赤霉素处理过的种子分别用次氯酸钠

    和升汞进行灭菌消毒。前者在超净工作台上用

    13%的次氯酸钠消毒 20分钟 ,灭菌水冲洗 10

    ～20分钟 ,然后将种子用镊子接种到铺有滤纸

    的灭菌皿上 ,滤纸上洒有无菌水 ,确保湿度 ,再

    用封口膜封口 ,暗箱培养。后者用 011%的升

    汞水灭菌消毒 ,操作程序同上。观察两种处理

    对种子萌芽的影响 ,比较其灭菌消毒效果。

    将萌芽的种子接种到培养基上。培养基为

    MS培养基和 1 2MS (大量元素减半 )为培养

    基 ,均加入不同浓度的蔗糖 ,共设 6个处理: ①

    MS +蔗糖 10g·L - 1; ②MS +蔗糖 20g·L - 1; ③

    MS +蔗糖 30g·L - 1; ④1 2MS +蔗糖 10g·

    L - 1; ⑤1 2MS +蔗糖 20g·L - 1; ⑥1 2MS +蔗

    糖 30g·L - 1。上述培养基中均加入肌醇 100mg

    ·L - 1

    和 0 . 75%琼脂。每瓶培养基 30ml,每种

    培养基 5瓶。置于温度 26℃、 光照强度 1500 lx

    的条件下培养 12小时 天 ,观察不同培养基上

    幼苗的生长状况。

    5

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.2 结果与分析

    2 . 1 赤霉素处理时间长短对破眠的效果

    用 2 . 5g·L - 1

    的赤霉素处理种子 5小时和

    24小时破眠效果相同 ,种子发芽率均达 95%以

    上 ,可见种子用赤霉素处理 5小时即可。

    2 . 2 两种灭菌消毒法的效果

    用次氯酸钠处理 9天后 ,种子在培养皿中

    的萌芽率为 65%,两周后可达 95%以上;而用

    011%升汞消毒的种子 ,萌芽率仅 10%左右。

    2 . 3 不同培养基对猕猴桃组培苗生长的影响

    种子在培养皿中萌发后及时转入 6种培养

    基中培养 , 8天后幼苗开始生根 , 12天后开始出

    现真叶 , 50天后观察 , 6种配方培养基上最大苗

    的生长情况 ,结果见表 1。

    表 1 不同培养基对猕猴桃组培苗生长的影响

    处理 培养基 蔗糖浓度

    ( g·L - 1)

    实生苗鲜

    重 ( g)

    真叶

    数

    生根

    数

    小侧

    根数

    最长根长度

    ( cm)

    最长根小

    侧根数

    最大叶片纵

    径 ( cm)

    最大叶片

    横径 ( cm)

    叶形

    指数3

    茎粗

    ( cm)

    黄化程

    度3 3

    1 MS 10 0. 49 8 7 14 5. 90 8 3. 10 2. 40 1. 29 0. 30 3

    2 MS 20 0. 57 6 6 44 13. 80 16 3. 50 2. 40 1. 46 0. 23 0

    3 MS 30 0. 30 5 3 12 2. 10 5 2. 30 1. 40 1. 64 0. 22 0

    4 1 2MS 10 0. 39 12 4 16 6. 30 12 2. 50 1. 60 1. 56 0. 17 1

    5 1 2MS 20 0. 66 7 8 34 13. 40 4 4. 00 3. 20 1. 25 0. 18 0

    6 1 2MS 30 0. 35 7 7 29 6. 30 8 2. 30 1. 70 1. 35 0. 20 0

    3 叶形指数为最大叶片纵横径比

    3 3黄化程度分为 4级,分别以 0, 1, 2, 3表示 ......