六味地黄丸指纹图谱的研究.PDF
http://www.100md.com
2006年2月23日
| 第1页 |
参见附件(78KB，2页)。
六味地黄丸指纹图谱的研究
王喜军1 3
, 张 宁, 孙 晖
(黑龙江中医药大学 药学院 ,黑龙江 哈尔滨 150040)
六味地黄丸是中医“滋补肾阴”的经典代表名方 ,由宋·
钱乙在《小儿药证直诀》中首创 ,现广泛应用于临床。2000年
版药典中明确规定 ,六味地黄丸仅以丹皮酚和熊果酸的含量
作为质量控制指标 ,虽然此方法简单易行 ,但尚不能全面控
制六味地黄丸的内在质量。为此 ,作者采用 RP 2HPLC法建
立六味地黄丸的指纹图谱 ,确定各共有峰的归属 ,以便实现
从多药物、多成分的系统化角度控制六味地黄丸的质量。
1 实验仪器及材料
Waters高效液相色谱仪 (600 Controller , 600 Pump , 996
Photodiode Array Detector) ;80 - 2 型离心机;H66MC型超声震
荡仪。马钱素(loganin)对照品由南京中医药大学提供;熟地
黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻均购于哈尔滨药材市
场 ,经鉴定为正品;乙腈 ,HPLC级 ,美国迪马(DIKMA)试剂公
司;其余试剂为分析纯。
2 实验方法与结果
2. 1 色谱条件
Water Symmetry ShieldTMRP18色谱柱(3. 9 mm ×150 mm ,5
μm) ;Nova2Pak C18 Guard2PakTM保护柱 ;柱温30 ℃;流速 ,1 mL· min ;检测波长 238 nm;乙腈20. 15 %磷酸梯度洗脱:洗
脱时间为130 min ,60 min之内乙腈浓度由零升至 12 % ,后 70
min乙腈浓度由12 %升至30 %。
2. 2 检测波长的选择
本实验采用二极管阵列检测器 ,在分析时进行全波长紫
外扫描 ,并在不同波长下获取数据 ,经比较后表明 238 nm色
谱图峰形最好 ,出峰数目适中 ,各色谱峰相互之间分离度较
好 ,故检测波长定为238 nm。
2. 3 HPLC供试品溶液的制备
按药典六味地黄丸处方称取药材 ,采用 2000 年版药典
方法分别制成六味地黄丸、缺味六味地黄丸及单味丸 ,各称
取1 g ,用10 mL 甲醇超声提取 15 min (2 次) ,滤过 ,合并滤
液 ,滤液干燥后用甲醇定容至10 mL ,溶液过0. 45μm微孔滤
膜即得;另精密称取马钱素对照品 1 mg左右 ,置 25 mL 容量
瓶 ,加甲醇溶解并稀释至刻度摇匀得马钱素对照品溶液;上
述样品备 HPLC分析使用。
[收稿日期] 2004207205
[基金项目] 国家留学归国人员科研基金(9901034)
[通讯作者] 3
王喜军,Tel : (0451) 82110818 ,E 2mail :wxj @hlju
cm. net
2. 4 指纹图谱测定的方法学考察
2. 4. 1 精密度实验 按样品制备方法制备六味地黄丸供试
品溶液 ,连续进样5次 ,测定 HPLC色谱图 ,结果各共有峰相
对峰面积的 RSD 小于 1 % ,相对保留时间的 RSD 小于 1 %。
表明仪器精密度良好。
2. 4. 2 稳定性实验 按样品制备方法制备六味地黄丸供试
品溶液 ,每6 h进样分析 ,测定 HPLC色谱图 ,结果各共有峰
相对峰面积的RSD小于2 % ,相对保留时间的RSD小于2 %。
表明样品在24 h内稳定性良好。
2. 4. 3 重复性实验 按样品制备方法平行操作制备 5 份六
味地黄丸供试品溶液 ,测定 HPLC色谱图 ,结果各共有峰相
对峰面积的 RSD 小于 3 % ,相对保留时间的 RSD 小于 3 %。
表明方法重复性良好。
2. 5 六味地黄丸指纹图谱的测定及技术参数
2. 5. 1 指纹图谱的测定 取10批六味地黄丸供试样品 ,按
2. 1项下条件进行 HPLC分析 ,实现了峰与峰之间的良好分
离 ,确定了10个共有峰(图 1) 。并取六味地黄丸、缺味地黄
丸及单味丸样品 ,按相同条件进行 HPLC分析认定峰来源。
通过对照分析 ,认定共有峰1来源于熟地;共有峰 2 ,4 ,6 ,7 ,8
来源于山茱萸;共有峰3 ,5 ,9 ,10来源于牡丹皮;山药和茯苓
对指纹图谱的共有峰没有贡献。
2. 5. 2 参照物的选择 在 HPLC图谱中选择峰面积较大、出峰时间适中且稳定的色谱峰作为参照峰 ,结果41. 5 min的
色谱峰符合此条件 ,经对照品对照认定为马钱素的吸收峰 ,故选择马钱素作为参照物 ......
王喜军1 3
, 张 宁, 孙 晖
(黑龙江中医药大学 药学院 ,黑龙江 哈尔滨 150040)
六味地黄丸是中医“滋补肾阴”的经典代表名方 ,由宋·
钱乙在《小儿药证直诀》中首创 ,现广泛应用于临床。2000年
版药典中明确规定 ,六味地黄丸仅以丹皮酚和熊果酸的含量
作为质量控制指标 ,虽然此方法简单易行 ,但尚不能全面控
制六味地黄丸的内在质量。为此 ,作者采用 RP 2HPLC法建
立六味地黄丸的指纹图谱 ,确定各共有峰的归属 ,以便实现
从多药物、多成分的系统化角度控制六味地黄丸的质量。
1 实验仪器及材料
Waters高效液相色谱仪 (600 Controller , 600 Pump , 996
Photodiode Array Detector) ;80 - 2 型离心机;H66MC型超声震
荡仪。马钱素(loganin)对照品由南京中医药大学提供;熟地
黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻均购于哈尔滨药材市
场 ,经鉴定为正品;乙腈 ,HPLC级 ,美国迪马(DIKMA)试剂公
司;其余试剂为分析纯。
2 实验方法与结果
2. 1 色谱条件
Water Symmetry ShieldTMRP18色谱柱(3. 9 mm ×150 mm ,5
μm) ;Nova2Pak C18 Guard2PakTM保护柱 ;柱温30 ℃;流速 ,1 mL· min ;检测波长 238 nm;乙腈20. 15 %磷酸梯度洗脱:洗
脱时间为130 min ,60 min之内乙腈浓度由零升至 12 % ,后 70
min乙腈浓度由12 %升至30 %。
2. 2 检测波长的选择
本实验采用二极管阵列检测器 ,在分析时进行全波长紫
外扫描 ,并在不同波长下获取数据 ,经比较后表明 238 nm色
谱图峰形最好 ,出峰数目适中 ,各色谱峰相互之间分离度较
好 ,故检测波长定为238 nm。
2. 3 HPLC供试品溶液的制备
按药典六味地黄丸处方称取药材 ,采用 2000 年版药典
方法分别制成六味地黄丸、缺味六味地黄丸及单味丸 ,各称
取1 g ,用10 mL 甲醇超声提取 15 min (2 次) ,滤过 ,合并滤
液 ,滤液干燥后用甲醇定容至10 mL ,溶液过0. 45μm微孔滤
膜即得;另精密称取马钱素对照品 1 mg左右 ,置 25 mL 容量
瓶 ,加甲醇溶解并稀释至刻度摇匀得马钱素对照品溶液;上
述样品备 HPLC分析使用。
[收稿日期] 2004207205
[基金项目] 国家留学归国人员科研基金(9901034)
[通讯作者] 3
王喜军,Tel : (0451) 82110818 ,E 2mail :wxj @hlju
cm. net
2. 4 指纹图谱测定的方法学考察
2. 4. 1 精密度实验 按样品制备方法制备六味地黄丸供试
品溶液 ,连续进样5次 ,测定 HPLC色谱图 ,结果各共有峰相
对峰面积的 RSD 小于 1 % ,相对保留时间的 RSD 小于 1 %。
表明仪器精密度良好。
2. 4. 2 稳定性实验 按样品制备方法制备六味地黄丸供试
品溶液 ,每6 h进样分析 ,测定 HPLC色谱图 ,结果各共有峰
相对峰面积的RSD小于2 % ,相对保留时间的RSD小于2 %。
表明样品在24 h内稳定性良好。
2. 4. 3 重复性实验 按样品制备方法平行操作制备 5 份六
味地黄丸供试品溶液 ,测定 HPLC色谱图 ,结果各共有峰相
对峰面积的 RSD 小于 3 % ,相对保留时间的 RSD 小于 3 %。
表明方法重复性良好。
2. 5 六味地黄丸指纹图谱的测定及技术参数
2. 5. 1 指纹图谱的测定 取10批六味地黄丸供试样品 ,按
2. 1项下条件进行 HPLC分析 ,实现了峰与峰之间的良好分
离 ,确定了10个共有峰(图 1) 。并取六味地黄丸、缺味地黄
丸及单味丸样品 ,按相同条件进行 HPLC分析认定峰来源。
通过对照分析 ,认定共有峰1来源于熟地;共有峰 2 ,4 ,6 ,7 ,8
来源于山茱萸;共有峰3 ,5 ,9 ,10来源于牡丹皮;山药和茯苓
对指纹图谱的共有峰没有贡献。
2. 5. 2 参照物的选择 在 HPLC图谱中选择峰面积较大、出峰时间适中且稳定的色谱峰作为参照峰 ,结果41. 5 min的
色谱峰符合此条件 ,经对照品对照认定为马钱素的吸收峰 ,故选择马钱素作为参照物 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(78KB，2页)。