收稿日期: 2004 —03 —20

    修订日期: 2004 —04 —14

    作者简介: 韩文军(1970 —) ,男,讲师,硕士,主要从事植物生

    理学教学及科研工作。

    毛竹愈伤组织培养中褐变现象的研究

    韩文军1

    , 周 宏2

    , 何 钢1

    (1.中南林学院生命科学与技术学院, 湖南 株洲 412006 ; 2.韶关九曲水林杨, 广东 韶关 512600)

    摘 要: 在毛竹组织培养过程中 ,愈伤组织褐变非常严重 ,直接影响愈伤组织的继代及分化。通过对激素种类、温

    度、光照及褐变抑制剂等影响毛竹愈伤组织褐变因素的研究 ,找到最大限度避免或减轻毛竹愈伤组织褐变的方法。

    关键词: 毛竹; 愈伤组织; 褐变

    中图分类号: S 795. 7 文献标识码: B 文章编号: 1003—5710 (2004) 03—0004—02

    毛竹( Phyllostachys heterocycla. var. pubescens)是禾本

    科竹亚科刚竹属植物 ,为我国分布最广、面积最大、蓄积

    量最多、用途最广的经济竹种[1]。在毛竹组织培养过程

    中,愈伤组织褐变非常严重 ,直接影响愈伤组织的继代

    及分化。一般认为褐变是由于多酚类物质被多酚氧化

    酶氧化为醌类物质所致 ,这些醌类物质呈现红褐色 ,能

    抑制很多代谢酶的活性 ,从而影响培养材料的生长与分

    化,严重时甚至导致死亡[2～5]。这是毛竹组织难以成功

    的重要原因之一。本文通过调节培养基中激素组成、添

    加适量褐变抑制剂、改变培养温度及光照条件等 ,研究

    了它们与褐变程度和生长状态之间的关系 ,以期为今后

    寻找减轻或消除褐变的途径提供实验依据。

    1 材料与方法

    1. 1 试验材料

    毛竹采自中南林学院标本园。

    1. 2 方法

    1. 2. 1 消毒与接种 在春季 3～5 月份挖取刚出土的健

    壮毛竹笋为外植体 ,用流水洗净,去掉笋箨,置超净台,用75 %乙醇擦拭外表皮,在无菌条件下 ,将已消毒的竹

    笋外表皮用解剖刀削去 ,并取中上部位切成2 mm×2 mm

    × 2 mm颗粒。

    1. 2. 2 不同激素组合对褐化的影响 以 MS为基本培养

    基 ,按表1补加不同浓度、不同组合的激素和 3 %蔗糖 ,0. 9 %

    琼脂 ,灭菌前调节 pH至 5. 8 ,121 ℃下灭菌 15 min ,将已准备

    好的材料接种于固体培养基中 ,作者在25 ℃、光周期12 h 12

    h下进行培养 ,20 d后统计已诱导出愈伤组织的材料的褐变

    情况。

    1. 2. 3 培养温度对褐变情况的影响 以MS为基本培养基 ,添加 3 mg L 2 , 4 — D + 1 mg L 6 — BA 和 3 %蔗糖 ,0. 9 %琼脂 ,灭菌前调节pH至5 . 8 , 121 ℃下灭菌15 min ,表1 诱导愈伤组织的不同激素组合

    培养基编号 2 ,4 —D(mg L) NAA(mg L) 6 —BA(mg L)

    1 0 0 0

    2 0 1 0. 5

    3 0 5 1

    4 0 10 5

    5 0. 5 0 0. 5

    6 0. 5 1 0

    7 0. 5 5 5

    8 0. 5 10 1

    9 3 0 1

    10 3 1 5

    11 3 5 0

    12 3 10 0. 5

    13 5 0 5

    14 5 1 1

    15 5 5 0. 5

    16 5 10 0

    将已准备好的材料接种于固体培养基中 ,调节光周期为

    12 h 12 h ,分别置于15、 20、 25 ℃进行培养,20 d 后统计已

    诱导出愈伤组织的材料的褐变情况 ......