淫羊藿药材HPLC指纹图谱的研究.PDF
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2006年2月23日
| 第1页 |
参见附件(139KB，4页)。
【收稿日期】 2003203225
【基金项目】 国家“十五”重大科技专项“创新药物与中药现代
化” (No. 2002AA2Z3214)基金资助项目。
【3
通讯作者】 赵陆华:中国药科大学副研究员,Tel :02523271560
淫羊藿药材 HPLC指纹图谱的研究
黄朝瑜1
,赵陆华1 3
,梅玲华2
,付 洪2
1
中国药科大学分析测试中心 , 南京 210009 ;
2
汇仁集团有限公司 , 南昌 330052
【摘 要】 目的:采用高效液相色谱法建立淫羊藿药材的指纹图谱。方法:用 Alltech C18 (416 ×250 mm ,5μm)色谱柱 ,015 %冰醋酸溶液和乙腈为流动相 ,采用梯度洗脱 ,流速110 ml min ,检测波长272 nm。结果:淫羊
藿药材指纹图谱共检出7个峰 ,峰面积之和大于总峰面积的 90 % ,其精密度、稳定性、重复性均符合《中药注射
剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》中的有关规定。结论:本方法可作为控制淫羊藿药材内在质量的标准。
【关键词】 淫羊藿; HPLC; 指纹图谱
【中图分类号】 R94419 ;R945 ;R97915 【文献标识码】 A 【文章编号】 167223651 (2003) 0320146204
淫羊藿为常用中药 ,为小檗科Berberidaceae 淫
羊藿属 Epimedium 多种植物的干燥地上部分 ,其性
辛味甘 ,具有补肾阳 ,强筋骨 ,祛风湿之功效 ,主要
成分为黄酮类 (淫羊藿苷、朝藿定 B、朝藿定 C
等) 、木脂素等[1 ]
,其中黄酮类化合物为其主要活
性成分。由于受品种、产地、气候和生态环境等因
素的影响 ,不同种、不同产地淫羊藿药材所含黄酮
类成分差异甚大 ,仅针对中药材或中成药的某个
有效成分或指标成分进行定性、定量分析 ,并不能
有效地控制其质量。本文根据指纹图谱技术要
求 ,采用 HPLC法建立淫羊藿药材的指纹图谱 ,可
作为其内在质量控制标准。
1 仪器与试剂
111 仪 器
岛津LC210AD VP 高效液相色谱仪 ,岛津 SPD2
10A VP检测器 ,浙大N2000型色谱工作站。
112 试 剂
乙腈为 HPLC级 ,水为纯净水 ,冰醋酸为分析
纯。
113 药 品
淫羊藿苷对照品(由中国药品生物制品检定
所提供) ,淫羊藿药材(由江西汇仁制药有限公司
提供 ,产地:东北 ,经中国药科大学生药学教研室
张勉博士鉴定为淫羊藿 Epimedium brevicornum
Maxim1)
2 实验部分
211 色谱条件
色谱柱:Alltech C18 (416× 25 cm ,5μm) ;流动相:
A1015 %冰醋酸溶液,B1乙腈;B 相浓度梯度洗脱:0
～35 min (25 % B) ,35 min (25 %～30 % B) ,40～55
min(30 %～47 % B) ,55 min (47 %～70 % B) ;流速:
110 ml min ;检测波长:272 nm;进样量:20μl。
212 对照品溶液的制备
精密称取淫羊藿苷适量 ,甲醇溶解 ,制成每
1 ml中含淫羊藿苷40μg的溶液,作为对照品溶液。
213 供试品溶液的制备
取淫羊藿粉末(过三号筛)约012 g ,精密称定,置50 ml 具塞锥形瓶中,精密加入 70 %乙醇 20 ml ,密塞,摇匀,称定重量,超声处理 30 min ,放冷,称定
重量,用70 %乙醇补足失重,摇匀、滤过(0145μm微
孔滤膜) ,取续滤液,作为供试品溶液。
214 测定方法
分别吸取参照物溶液和供试品溶液各 20μl ,注入高效液相色谱仪 ,结果见图1 (A ,B) 。
另吸取溶剂 20μl 作为空白溶液注入高效液
相色谱仪 ,结果表明 ,溶剂对淫羊藿指纹图谱中共
有峰检出无干扰。
215 方法学考察
21511 精密度试验 取供试品溶液(批号 Ⅰ) ,连
续进样6次 ,测得各共有峰相对峰面积的 RSD 小
于3 % ,表明进样的精密度良好。
146 Chin J Nat Med Sep 2003 Vol . 1 No. 3 中国天然药物 2003年9月 第1卷 第3期
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.Fig 1 Chromatograms of HPLC standard ( A) , sample ( B)
21512 重复性试验 取供试品(批号 Ⅰ) 6 份 ,精
密称定 ,按“213 项”下方法制备供试品溶液 ,分别
进样 ,测得各共有峰相对峰面积的 RSD 小于 3 % ,表明方法重复性较好。
21513 稳定性试验 取供试品溶液(批号Ⅰ ) ,分别
在0 ,2 ,4 ,6 ,8 ,12 h进样,测得各共有峰相对峰面积
的 RSD小于3 %,表明样品溶液在24 h内稳定。
216 指纹图谱及各项技术参数
通过对淫羊藿药材10批供试品溶液 HPLC的
分析 ,参照《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求
(暂行)》,表明其中 7 个峰是各批供试品所共有 ,因此确定这7个峰为共有指纹峰。用二极管阵列
检测器做峰纯度检查 ,匹配度均达 999 ,表明该七
个峰为纯的色谱峰。在共有峰中 ,以 5 号峰的峰
面积作为1 , 1、 3、 4、 5号峰的峰面积接近或大于总
峰面积的10 % ,计算峰面积比值 , 2、 6 号峰按其相
对保留时间定性。
技术参数:
共有峰的峰号(相对保留时间) : 1 (01658) ,2
(01725) , 3 (01805) , 4 (01868) , 5 (1) , 6 (11924) , 7
(21016) 。
峰面积比值范围: 1 (01257～01379) ; 3 (01277
～01415) ;4 (01645～01968) 。
10批供试品溶液检测结果见表1、表2。
Tab 1 Relative retention times of common peaks for ten batchs of E. brevicornum Maxim. ......
【基金项目】 国家“十五”重大科技专项“创新药物与中药现代
化” (No. 2002AA2Z3214)基金资助项目。
【3
通讯作者】 赵陆华:中国药科大学副研究员,Tel :02523271560
淫羊藿药材 HPLC指纹图谱的研究
黄朝瑜1
,赵陆华1 3
,梅玲华2
,付 洪2
1
中国药科大学分析测试中心 , 南京 210009 ;
2
汇仁集团有限公司 , 南昌 330052
【摘 要】 目的:采用高效液相色谱法建立淫羊藿药材的指纹图谱。方法:用 Alltech C18 (416 ×250 mm ,5μm)色谱柱 ,015 %冰醋酸溶液和乙腈为流动相 ,采用梯度洗脱 ,流速110 ml min ,检测波长272 nm。结果:淫羊
藿药材指纹图谱共检出7个峰 ,峰面积之和大于总峰面积的 90 % ,其精密度、稳定性、重复性均符合《中药注射
剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》中的有关规定。结论:本方法可作为控制淫羊藿药材内在质量的标准。
【关键词】 淫羊藿; HPLC; 指纹图谱
【中图分类号】 R94419 ;R945 ;R97915 【文献标识码】 A 【文章编号】 167223651 (2003) 0320146204
淫羊藿为常用中药 ,为小檗科Berberidaceae 淫
羊藿属 Epimedium 多种植物的干燥地上部分 ,其性
辛味甘 ,具有补肾阳 ,强筋骨 ,祛风湿之功效 ,主要
成分为黄酮类 (淫羊藿苷、朝藿定 B、朝藿定 C
等) 、木脂素等[1 ]
,其中黄酮类化合物为其主要活
性成分。由于受品种、产地、气候和生态环境等因
素的影响 ,不同种、不同产地淫羊藿药材所含黄酮
类成分差异甚大 ,仅针对中药材或中成药的某个
有效成分或指标成分进行定性、定量分析 ,并不能
有效地控制其质量。本文根据指纹图谱技术要
求 ,采用 HPLC法建立淫羊藿药材的指纹图谱 ,可
作为其内在质量控制标准。
1 仪器与试剂
111 仪 器
岛津LC210AD VP 高效液相色谱仪 ,岛津 SPD2
10A VP检测器 ,浙大N2000型色谱工作站。
112 试 剂
乙腈为 HPLC级 ,水为纯净水 ,冰醋酸为分析
纯。
113 药 品
淫羊藿苷对照品(由中国药品生物制品检定
所提供) ,淫羊藿药材(由江西汇仁制药有限公司
提供 ,产地:东北 ,经中国药科大学生药学教研室
张勉博士鉴定为淫羊藿 Epimedium brevicornum
Maxim1)
2 实验部分
211 色谱条件
色谱柱:Alltech C18 (416× 25 cm ,5μm) ;流动相:
A1015 %冰醋酸溶液,B1乙腈;B 相浓度梯度洗脱:0
～35 min (25 % B) ,35 min (25 %～30 % B) ,40～55
min(30 %～47 % B) ,55 min (47 %～70 % B) ;流速:
110 ml min ;检测波长:272 nm;进样量:20μl。
212 对照品溶液的制备
精密称取淫羊藿苷适量 ,甲醇溶解 ,制成每
1 ml中含淫羊藿苷40μg的溶液,作为对照品溶液。
213 供试品溶液的制备
取淫羊藿粉末(过三号筛)约012 g ,精密称定,置50 ml 具塞锥形瓶中,精密加入 70 %乙醇 20 ml ,密塞,摇匀,称定重量,超声处理 30 min ,放冷,称定
重量,用70 %乙醇补足失重,摇匀、滤过(0145μm微
孔滤膜) ,取续滤液,作为供试品溶液。
214 测定方法
分别吸取参照物溶液和供试品溶液各 20μl ,注入高效液相色谱仪 ,结果见图1 (A ,B) 。
另吸取溶剂 20μl 作为空白溶液注入高效液
相色谱仪 ,结果表明 ,溶剂对淫羊藿指纹图谱中共
有峰检出无干扰。
215 方法学考察
21511 精密度试验 取供试品溶液(批号 Ⅰ) ,连
续进样6次 ,测得各共有峰相对峰面积的 RSD 小
于3 % ,表明进样的精密度良好。
146 Chin J Nat Med Sep 2003 Vol . 1 No. 3 中国天然药物 2003年9月 第1卷 第3期
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.Fig 1 Chromatograms of HPLC standard ( A) , sample ( B)
21512 重复性试验 取供试品(批号 Ⅰ) 6 份 ,精
密称定 ,按“213 项”下方法制备供试品溶液 ,分别
进样 ,测得各共有峰相对峰面积的 RSD 小于 3 % ,表明方法重复性较好。
21513 稳定性试验 取供试品溶液(批号Ⅰ ) ,分别
在0 ,2 ,4 ,6 ,8 ,12 h进样,测得各共有峰相对峰面积
的 RSD小于3 %,表明样品溶液在24 h内稳定。
216 指纹图谱及各项技术参数
通过对淫羊藿药材10批供试品溶液 HPLC的
分析 ,参照《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求
(暂行)》,表明其中 7 个峰是各批供试品所共有 ,因此确定这7个峰为共有指纹峰。用二极管阵列
检测器做峰纯度检查 ,匹配度均达 999 ,表明该七
个峰为纯的色谱峰。在共有峰中 ,以 5 号峰的峰
面积作为1 , 1、 3、 4、 5号峰的峰面积接近或大于总
峰面积的10 % ,计算峰面积比值 , 2、 6 号峰按其相
对保留时间定性。
技术参数:
共有峰的峰号(相对保留时间) : 1 (01658) ,2
(01725) , 3 (01805) , 4 (01868) , 5 (1) , 6 (11924) , 7
(21016) 。
峰面积比值范围: 1 (01257～01379) ; 3 (01277
～01415) ;4 (01645～01968) 。
10批供试品溶液检测结果见表1、表2。
Tab 1 Relative retention times of common peaks for ten batchs of E. brevicornum Maxim. ......
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