河南农业科学

    烟草花粉管通道导入外源 DNA研究初探

    邓明军， 崔 红

    ( 国家烟草栽培生理生化研究基地， 河南 郑州 4 5 0 0 0 2 )

    摘要： 以不同浓度的p l G1 2 1 Hm质粒D N A为供体， 在烟草授粉后不同时期， 采用不同的方法经花

    粉管通道导入， 收获的种子经卡那霉素( K m) 抗性筛选。结果表明， 在授粉后 1 0 h ， D NA浓度为

    5 0 0肚 g ml ， 采用注射的方法可得到最大转化率( 2 3 、 5 %) 。

    关键词： 烟草； 花粉管通道； 质粒； 卡那霉素抗性

    中图分类号： 5 7 2 文献标识码： A’ 文章编号： 1 0 0 4—3 2 6 8 ( 2 0 0 5 ) 0 1 —0 0 2 2—0 3

    Pr i ma r y S t u d y o n Ex o g e n o u s DNA I n t r o d u c t i o n

    i n t o To b a c c o Vi a t h e Po l l e n — t u b e Pa t h wa y

    DE NG Mi n g — J u n ， C UI Ho n g

    ( Na t i o n a l T o b a c c o C u l t i v a t i o n a n d P h y s i o l o g i c a l a n d B i o c h e mi c al Re s e a r c h C e n t r e ， Z h e n g z h o u 4 5 0 0 0 2 ， C h i n a )

    Ab s t r a c t ： P l a s mi d p l G1 21 Hr n c o n t a i n i n g r e p o r t g e n e g u s A a n d p l a n t — s e l e c t e d g e n e n p t — I 1 wa s i n t m—

    d u c e d i n t o t o b a c c o‘ B a s ma v i a t h e p o l l e n . t u b e p a t h wa y a t d i f f e r e n t t i me wi t h d i f f e r e n t c on c e n t r a t i o n b y

    d i f f e r e n t wa y s .S e e d s we r e h a r v e s t e d a n d s c r e e n e d i n 5 0 0~ t g ml k a n a my c i n e s o l u t i o n . Hi g h e s t r a t i o

    ( 2 3 5 %)o f g e n e t r a n s f o r ma t i o n wa s d i s c o v e r e d wh e n 5 0 0~ g ml p l a s mi d p l G1 2 1 Hm DNA wa s i n t r o —

    d u c e d i n t o o v a r y f o r 1 0 h o u r s a f t e r p ol l i n a t i o n b y i n j e c t i o n

    Ke y wo r d s ： To b a c c o； P o l l e n — t u b e p a t h wa y； P l a s mi d； Ka n a my c i n e r e s i s t a n c e

    由于烟草品种间遗传背景狭窄， 利用野生种和

    异种、 属的基因资源进行远缘杂交已成为烟草育种

    的发展趋势， 而花粉管通道法是实现野生种优良基

    因向栽培种转移的首选途径。但该技术本身存在着

    转化效率不高的问题， 加之烟草种子数量较多， 给转

    化后代的检测筛选带来更大困难。我们利用含有检

    测标记基因和抗性基因的质粒 DNA， 对影响烟草花

    粉管通道导人外源 D N A的诸多因素进行研究， 旨

    在建立高效的转化系统， 为烟草外源总 D N A的导

    人奠定基础。

    1 材料与方法

    1 . 1 材料

    供体： 质粒 p l G1 2 1 Hm ， 含有 NP T—I I 和 GUS

    基因； 受体： 香料烟品种 B a s ma

    1 2 方 法

    1 2 1 D N A导人 于不同花期， 采用不同的方法

    导人不同浓度的p I G1 2 1 Hm质粒溶液。

    所选时间分别为 ( 授粉开始期) ， T 1 ( 授粉后

    5 h ) ， T 2 ( 授粉后 1 0 h ) ， T 3 ( 授粉后 2 4 h ) 。

    所用导人方法分别为： W1 ( 液滴法) ——在子房

    上端 5 r f l l T l 处剪去花柱， 在切 口处滴加 p l G1 2 1 H r n

    质粒溶液， 重复滴液 3次； W2 ( 注射法) ——在子房

    上端 5 r n l T l 处剪去花柱， 用微量注射器从切口处插

    入约 8 r n l T l ， 注入 p I G1 2 1 Hm质粒溶液。

    所用质粒浓度分别为 D1 ： 1 0 0 u g r n l ......