第 32 卷

    2004年 7 月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告

    Chinese Journal of Analytical Chemist ry

    第 7 期

    875～878

    栀子药材的指纹图谱整体性分析

    曹 进 徐 燕 张永知 王义明 罗国安3

    (清华大学药物研究所 ,北京 100084)

    摘 要 建立了药材栀子水提部分的高效液相色谱指纹图谱 ,脂溶性成分和挥发油的气相色谱2质谱联用指

    纹图谱 ,并分别计算了此 3 部分指纹图谱的相似系数和总体相似系数 ,同产地结果 RSD ≤5 %。通过比较不

    同产地栀子相似系数的关系 ,以及对 9 个主要药效成分定量结果的分析 ,对不同产地栀子的指纹图谱做了整

    体性评价 ,结果表明 ,只有全面测定成分及整体性评价后 ,药材的质量才能得到有效评价。

    关键词 栀子 ,指纹图谱 ,高效液相色谱 ,气相色谱2质谱联用

    2003205226 收稿;2004202206 接受

    本文系国家 973 重点基础研究项目资助 (No. G1999054404) 、科技部基础专项 (No. 2002DEA 2002123 及重要技术标准研究)

    (No. 2002BA906A2923)资助

    1 引 言

    栀子是茜草科植物山栀( gardenia jasminoides , Ellis)的成熟干燥果实 ,用作药物。通常 ,水提部分

    是栀子的主要药用部位;药理研究表明:栀子挥发油部分有治疗带状疱疹的作用 ,醇提物的乙酸乙酯(脂

    溶性)部分有明显的抗炎作用[1 ]。对栀子各部分的分析研究已很多 ,绝大部分是采用薄层色谱和高效

    液相色谱法对栀子苷进行定量分析[2～4 ];也有采用质谱研究包括栀子苷在内的17 种苷类化合物的裂解

    方式[5 ];对该种药材的全面质量分析尚没有完善的报道。本实验运用高效液相色谱(HPLC)法建立了

    栀子中水提部分的液相指纹图谱 ,运用气相色谱质谱联用法( GC MS)建立了栀子中脂溶性成分和挥

    发油的气相指纹图谱;运用中药指纹图谱相似度软件 ,分别计算出 3 个部位指纹图谱的相似系数;对 3

    个部位的各色谱峰分别配以适当的加权系数 ,用以计算得到总体相似系数。通过对不同产地栀子相似

    系数的关系的研究 ,以及对 9 个主要药效成分的定量结果分析 ,综合评价不同产地栀子的质量 ,为中药

    材质量的评价提供了新的方法模式。

    2 实验部分

    2. 1 仪器和试剂

    1100 型高效液相色谱仪 ,含DAD二极管阵列检测器(美国Agilent 公司) ;SZ 293 自动双重纯水蒸馏

    器(上海亚荣生化仪器厂) ;6890GC 5973MS(四级杆)气相色谱2质谱联用仪器(美国 Agilent 公司) ;离

    心机(LD522A型 ,北京医用离心机厂) ,中药指纹图谱相似度软件由国家药典委员会推荐。

    栀子果实购于安国市 ,分别产于江西、广西、浙江、湖南和海南;95 %医用乙醇 ,乙腈、甲醇( Fisher 公

    司 ,色谱纯) ;甲酸、乙酸乙酯、乙醚(北京化工二厂 ,分析纯) ,二次蒸馏水。

    标准品:栀子苷、异栀子苷、栀子酸、京尼平龙胆二糖苷购于 Yoneyama 公司;绿原酸、藏红花酸购于

    Sigma 公司; 藏红花素 1、藏红花素 2、藏红花素 3 由本实验室从藏红花中提取 ,经波谱分析确定结构。

    2. 2 样品制备

    2. 2. 1 栀子水提部分的制备 取粉碎的栀子 100 g ,加水 800 mL ,浸泡 12 h 加热回流 1 h ,过滤 ,取滤

    渣 ,加水600 mL ,加热回流1 h ,过滤 ,合并滤液;滤液中加95 %乙醇并使醇含量大约为60 % ,冷藏24 h ;

    抽滤 ,滤液减压蒸馏回收乙醇 ,得到的澄清栀子提取液在约 60 ℃下挥干 ,得到棕红色浸膏 m1。取浸膏

    0102 g ,用甲醇定容到 25 mL ;离心 10 min ,取上清液即可进行 HPLC分析。

    2. 2. 2 栀子挥发油的制备 取粉碎后的栀子 100 g ,加水 300 mL 浸泡 12 h 后 ,进行水蒸汽蒸馏 10 h ,得到黄色油滴 m2 ;取油滴 0. 01 g溶解于 5 mL 乙醚中;离心 10 min ,取上清液即可进 GC MS仪器。

    2. 2. 3 栀子脂溶性部分的制备 取粉碎的栀子 100 g ,加甲醇 500 mL 浸泡 12 h ,加热回流 1 h ,过滤 ,? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.滤渣中加 400 mL 甲醇加热回流 1 h ,过滤 ,滤液合并后在约 60 ℃下挥干;得到棕红色浸膏溶于 400 mL

    蒸馏水中 ,用同体积的乙酸乙酯萃取 3 次 ,合并有机相 ,约 50 ℃下挥干 ,得到固体物 m3 ;取 0. 01 g 该固

    图 1 3 个检测波长下栀子水提部分的 HPLC色谱图

    Fig. 1 High performance liquid chromatogram of water2

    soluble part under 3 detective wavelengths

    1. 栀子酸(geniposidic acid) ;2. 异栀子苷(gardenoside) ;3. 京

    尼平龙胆二糖苷( genipin gentiobioside) ; 4. 栀子苷 ( genipo2

    side) ;5. 绿原酸(chlorogenic acid) ;6. 藏红花素 1 (crocin 1) ;

    7. 藏红花素2 (crocin 2) ;8. 藏红花素3 (crocin 3) ;9. 藏红花

    酸(crocetin) 。

    体物溶解于 5 mL 乙醚中;离心 10 min ,取上清待测。

    2. 2. 4 含量测定用试品的制备 取粉碎后的栀子

    100 g ,准确称取 0. 1 g ,加甲醇 25 mL ,超声处理 20

    min ,放冷 ,过滤 ,滤液离心 10 min ,取上清液即得。

    2. 2. 5 对照品溶液的制备 准确称取各标准品 ,分

    别溶于甲醇中配制 5 个浓度水平对照品溶液。

    2. 3 色谱条件

    HPLC条件:色谱柱为 Phenomenex Luna C18色

    谱柱(250 mm ×4. 6 mm ,5 μm) ;流动相:A 相为 0.

    3 %甲酸水溶液 ,B 相为甲醇和乙腈(9∶ 1) ;流速: 0. 8

    mL min ;柱温:35 ℃;检测波长:240、 330 和 440 nm ;

    进样量:20μL。线性梯度洗脱时间程序如下:开始

    时10 %B ,15 min 时 40 %B ,保持 3 min ,35 min 时

    100 %B ,保持 5 min ,45 min时 10 %B ......