β_环糊精构筑模拟酶催化法测定葡萄糖.PDF
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沈静茹 雷灼霖 孙小梅 韦继争 丁志刚
β-环糊精,模拟葡萄糖氧化酶,模拟过氧化物酶,催化分析
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参见附件(130KB，4页)。
β_环糊精构筑模拟酶催化法测定葡萄糖.PDF
第29卷
2001年7月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第7期
828～831
β 2环糊精构筑模拟酶催化法测定葡萄糖
沈静茹3
雷灼霖 孙小梅 韦继争 丁志刚
(中南民族学院化学系 , 武汉 430074)
摘 要 采用β 2环糊精( β 2cyclodextrin , β 2CD)二间羧基苯磺酸酯同三氯化铁构筑模拟酶催化法 ,对葡萄糖
制剂中的葡萄糖进行测定并寻找最佳测定检测条件。方法简便 ,灵敏度和重现性理想 ,线性范围 120～
400 mg L ,检测下限为60mg L ,精密度试验 RSD为 1. 9 %( n = 8) 。
关键词 β 2环糊精 ,模拟葡萄糖氧化酶 ,模拟过氧化物酶 ,催化分析
2000208225收稿;2001202205接受
本文系湖北省自然科学基金资助项目(95J60)
1 引 言
近年来有用卟啉类化合物模拟过氧化物酶〔 1 ,2〕 测定葡萄糖的方法 ,尚需与葡萄糖氧化酶(GOD)偶联
才能测定。本文用β 2环糊精的衍生物同时模拟 GOD和过氧化物酶 ,采用邻甲苯胺法〔 3〕 测定葡萄糖。此
法对葡萄糖制剂中葡萄糖进行了测定并探索最佳检测条件:最佳pH 3. 80 ,模拟酶(mimic enzyme)与底物
最适摩尔比为1∶ 11。此法无需特殊条件 ,灵敏度、重现性较好 ,线性范围 120～400 mg L ,检测下限为 60
mgL ;精密度试验 RSD为1. 9 %( n = 8) ,回收率结果较理想 ,且模拟酶制备简便 ,费用低廉 ,易储存 ,能
循环再生使用 ,不易失活变性。此法可作为一种新的葡萄糖测定方法。
模拟酶制备反应式如下:
β 2CD + 2ClSO2
COOH
β 2CD aO SO2
COOH
]2 (简写为: β 2CD2(M) 2)
β 2CD - (M) 2 + Fe
3 +
β 2CD - (M) 2· Fe
3 +
(简称:衍生物)
β 2CD - (M) 2 + Fe
3 +
+ H2O2 β 2CD - (M) 2· Fe
3 +
· H2O2 (简称:模拟酶)
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂
UV2240紫外2可见分光光度计(日本岛津公司) ;AIC UV29100 型紫外2可见分光光度计(深圳爱克分
析仪器有限公司) ;pHS 23C数字酸度计(杭州万达仪器仪表厂) ;TG 2332A 微量分析天平(上海分析仪器
厂) 。
葡萄糖标准溶液:1. 000 g L ;衍生物β 2CD2(M) 2· Fe
3 +
(合成见文献〔 4〕 )溶液:8. 78 mmol L ;邻甲苯胺
的N ,N2二甲基甲酰胺(DMF)溶液:1. 000 mol L ;所用试剂均为分析纯。
2. 2 模拟酶的制备〔 5〕
于上述衍生物水溶液中 ,不断搅拌下加入2. 00 mL 30 %H2O2 ,复合30 min后制得模拟酶溶液。
2. 3 模拟酶的催化反应
取6. 11 mmol L 模拟酶溶液4. 00 mL 于一小烧杯中 ,加2. 00 mL 水 ,在不断搅拌下加入0. 1 mol L 的
葡萄糖溶液7. 00 mL ,将反应温度控制在60 ℃,并开始计时取样 ,每隔10 min用微量取样器抽提50μ L 反
应液 ,加50μ L 0. 4 mol L 邻甲苯胺溶液 ,混匀 ,放入80 ℃的水浴中保温10 min 后 ,用pH 3. 80 醋酸2醋酸
钠缓冲液定容至 5. 0 mL ,以缓冲液为参比 ,在波长 365 nm处测定 A1 值。对照实验:用相同量 FeCl3 +
H2O2 代替模拟酶 ,其余操作程序相同 ,测定 A2 值;空白实验:只有相同浓度的模拟酶或 FeCl3 + H2O2 ,不
加底物葡萄糖 ,其余操作程序相同 ,分别测定 A′ 1 和 A′ 2 值。以ΔA1 = A1 - A′ 1 和ΔA2 = A2 - A′ 2 为纵坐标作图1曲线1和2。
2. 4 测定葡萄糖方法
分别取2. 00 mL 的1. 000 g L 葡萄糖标准溶液和 50μ L (15. 81 mg L)上述模拟酶溶液 ,加入一定量
缓冲液于恒温(80 ℃)水浴中保温一定时间后 ,取出冷却至室温 ,加入 50μ L 的 1. 000 mol L 邻甲苯胺的
DMF溶液 ,放置一定时间后 ,用缓冲液定容至5. 0 mL ,以不加底物葡萄糖的溶液作对应空白 ,在 365 nm
波长处测定吸光度 A。
3 结果与讨论
3. 1 模拟酶催化法的确定
图1结果表明 ,反应初始模拟酶有一定的活化时间 ,20 min 后催化速率明显加快 ,反应进行完全后
出现平台 ,且模拟酶的催化速率比 FeCl3 + H2O2 快得多 ,经计算每摩尔模拟酶每分钟平均催化速率是
FeCl3 + H2O2 的74倍 ......
2001年7月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第7期
828～831
β 2环糊精构筑模拟酶催化法测定葡萄糖
沈静茹3
雷灼霖 孙小梅 韦继争 丁志刚
(中南民族学院化学系 , 武汉 430074)
摘 要 采用β 2环糊精( β 2cyclodextrin , β 2CD)二间羧基苯磺酸酯同三氯化铁构筑模拟酶催化法 ,对葡萄糖
制剂中的葡萄糖进行测定并寻找最佳测定检测条件。方法简便 ,灵敏度和重现性理想 ,线性范围 120～
400 mg L ,检测下限为60mg L ,精密度试验 RSD为 1. 9 %( n = 8) 。
关键词 β 2环糊精 ,模拟葡萄糖氧化酶 ,模拟过氧化物酶 ,催化分析
2000208225收稿;2001202205接受
本文系湖北省自然科学基金资助项目(95J60)
1 引 言
近年来有用卟啉类化合物模拟过氧化物酶〔 1 ,2〕 测定葡萄糖的方法 ,尚需与葡萄糖氧化酶(GOD)偶联
才能测定。本文用β 2环糊精的衍生物同时模拟 GOD和过氧化物酶 ,采用邻甲苯胺法〔 3〕 测定葡萄糖。此
法对葡萄糖制剂中葡萄糖进行了测定并探索最佳检测条件:最佳pH 3. 80 ,模拟酶(mimic enzyme)与底物
最适摩尔比为1∶ 11。此法无需特殊条件 ,灵敏度、重现性较好 ,线性范围 120～400 mg L ,检测下限为 60
mgL ;精密度试验 RSD为1. 9 %( n = 8) ,回收率结果较理想 ,且模拟酶制备简便 ,费用低廉 ,易储存 ,能
循环再生使用 ,不易失活变性。此法可作为一种新的葡萄糖测定方法。
模拟酶制备反应式如下:
β 2CD + 2ClSO2
COOH
β 2CD aO SO2
COOH
]2 (简写为: β 2CD2(M) 2)
β 2CD - (M) 2 + Fe
3 +
β 2CD - (M) 2· Fe
3 +
(简称:衍生物)
β 2CD - (M) 2 + Fe
3 +
+ H2O2 β 2CD - (M) 2· Fe
3 +
· H2O2 (简称:模拟酶)
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂
UV2240紫外2可见分光光度计(日本岛津公司) ;AIC UV29100 型紫外2可见分光光度计(深圳爱克分
析仪器有限公司) ;pHS 23C数字酸度计(杭州万达仪器仪表厂) ;TG 2332A 微量分析天平(上海分析仪器
厂) 。
葡萄糖标准溶液:1. 000 g L ;衍生物β 2CD2(M) 2· Fe
3 +
(合成见文献〔 4〕 )溶液:8. 78 mmol L ;邻甲苯胺
的N ,N2二甲基甲酰胺(DMF)溶液:1. 000 mol L ;所用试剂均为分析纯。
2. 2 模拟酶的制备〔 5〕
于上述衍生物水溶液中 ,不断搅拌下加入2. 00 mL 30 %H2O2 ,复合30 min后制得模拟酶溶液。
2. 3 模拟酶的催化反应
取6. 11 mmol L 模拟酶溶液4. 00 mL 于一小烧杯中 ,加2. 00 mL 水 ,在不断搅拌下加入0. 1 mol L 的
葡萄糖溶液7. 00 mL ,将反应温度控制在60 ℃,并开始计时取样 ,每隔10 min用微量取样器抽提50μ L 反
应液 ,加50μ L 0. 4 mol L 邻甲苯胺溶液 ,混匀 ,放入80 ℃的水浴中保温10 min 后 ,用pH 3. 80 醋酸2醋酸
钠缓冲液定容至 5. 0 mL ,以缓冲液为参比 ,在波长 365 nm处测定 A1 值。对照实验:用相同量 FeCl3 +
H2O2 代替模拟酶 ,其余操作程序相同 ,测定 A2 值;空白实验:只有相同浓度的模拟酶或 FeCl3 + H2O2 ,不
加底物葡萄糖 ,其余操作程序相同 ,分别测定 A′ 1 和 A′ 2 值。以ΔA1 = A1 - A′ 1 和ΔA2 = A2 - A′ 2 为纵坐标作图1曲线1和2。
2. 4 测定葡萄糖方法
分别取2. 00 mL 的1. 000 g L 葡萄糖标准溶液和 50μ L (15. 81 mg L)上述模拟酶溶液 ,加入一定量
缓冲液于恒温(80 ℃)水浴中保温一定时间后 ,取出冷却至室温 ,加入 50μ L 的 1. 000 mol L 邻甲苯胺的
DMF溶液 ,放置一定时间后 ,用缓冲液定容至5. 0 mL ,以不加底物葡萄糖的溶液作对应空白 ,在 365 nm
波长处测定吸光度 A。
3 结果与讨论
3. 1 模拟酶催化法的确定
图1结果表明 ,反应初始模拟酶有一定的活化时间 ,20 min 后催化速率明显加快 ,反应进行完全后
出现平台 ,且模拟酶的催化速率比 FeCl3 + H2O2 快得多 ,经计算每摩尔模拟酶每分钟平均催化速率是
FeCl3 + H2O2 的74倍 ......
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