柱前衍生高效液相色谱法测定猪肉中5种青霉素残留量.PDF
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王超 王星
青霉素,残留,高效液相色谱,猪肉,柱前衍生化
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参见附件(76KB，3页)。
柱前衍生高效液相色谱法测定猪肉中5种青霉素残留量.PDF
第29卷
2001年7月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第7期
779～781
柱前衍生高效液相色谱法
测定猪肉中5种青霉素残留量
王 超3
王 星
(中国进出口商品检验技术研究所 ,北京 100025)
摘 要 样品采用乙腈直接提取 ,离心分离及用液2液分配和固相萃取(C18柱)净化方式 ,经衍生后 ,用液
相色谱紫外检测器测定猪肉中5种青霉素残留量。使用的分离柱是 Nova Pak C18柱 ,流动相为乙腈和磷
酸盐混合液。方法检出限0. 02 mg kg ,回收率为70. 9 %～96. 5 % ,相对标准偏差为3. 10 %～6. 71 %。
关键词 青霉素 ,残留 ,高效液相色谱 ,猪肉 ,柱前衍生化
2000208210收稿;2001201219接受
1 引 言
青霉素作为治疗家畜疾病的抗菌剂已获得广泛应用。当食用肉食品时 ,可能会受到青霉素残留的
危害。为了保证人类食品的安全 ,欧盟对肉中青霉素最高残留限量规定为苄青霉素 0. 05 mg kg , 苯唑
青霉素、邻氯青霉素和双氯青霉素分别为0. 3 mg kg。测定猪肉中青霉素的方法已有许多报道 ,但对多
种青霉素残留的测定方法 ,都是使用离子对反相色谱进行分离测定〔 1～3〕。由于离子对试剂对色谱的分
离影响较大 ,作者报道了用反相液相色谱分离测定牛奶中多种青霉素残留量的方法〔 4〕,在此基础上 ,本
文通过增加样品脱脂净化处理 ,采用柱前衍生高效液相色谱法测定猪肉中多种青霉素残留量。并用于
实际样品分析 ,结果满意。
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂
日本岛津LC210AD高效液相色谱仪 ,RF210A 紫外检测器 ,CR27AD 数据处理机。净化柱为 Supel2
cleanTMLC218 SPE Tubes (3 mL) 。磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硫代硫酸钠、氯化汞、氯化钠、氢氧化钠和正
己烷为分析纯。乙腈为色谱纯。水为蒸馏水或相应的去离子水。青霉素标准品为 Sigma 试剂。
0.1 moL L 磷酸盐缓冲溶液 (pH 6. 5) (含 0. 015 mol L 的硫代硫酸钠) 。0. 1 moL L 磷酸盐
(Na2HPO4)缓冲萃取溶液(pH 8. 0) 。
固相净化柱淋洗液:60 mL 水加40 mL 乙腈混合均匀 ,现用现配。
衍生化试剂溶液:2 mol L 的1 ,2 ,42三噻唑(含0. 01 mol L 氯化汞) (pH 9. 0± 0. 5) 。避光保存在4 ℃
的冰箱中。
标准储备液和标准工作溶液:分别称取0. 0100 g苄青霉素、苯氧基青霉素、苯唑青霉素、邻氯青霉素
钠、双氯青霉素标准品于100 mL 容量瓶中 ,用水溶解并稀释至刻度。浓度分别为 100 mg L。用此标准
储备液配制成标准工作溶液的浓度分别为1. 0 mg L。
2. 2 合成样品的制备
在5. 0 g猪肉空白样品中加入标准工作液 ,分别制成30、 50、 100μg kg苄青霉素和50、 100、 300μg kg
其它青霉素3个添加水平的试验样品。
2. 3 样品的提取净化步骤
2. 3. 1 样品的提取与净化 准确称取5. 0 g捣碎肉样或焙制的猪肉样品于50 mL 离心管中 ,加入30 mL
乙腈 ,匀浆均质3 min。然后以8000 r min的速度离心该溶液10 min。随后把上清液转入150 mL 圆底烧瓶中 ,按上述方法再用20 mL 乙腈均质提取一次。合并提取液后 ,加入30 mL 4 %的氯化钠溶液 ,混合后
在旋转蒸发器上40 ℃减压浓缩至约30 mL。把该试液转入125 mL 分液漏斗中 ,加入20 mL 正己烷 ,振荡
3 min ,静置分层 ,弃去正己烷层(除去油脂类化合物) 。按此步骤用 20 mL 正己烷再萃取一次 ,取水相清
液。先把此试样清液以3 mL min的速度通过已经预淋洗过的SPE C18净化柱 ,然后加入1. 5 mL 淋洗液 ,浸泡1 min ,再以3 mL min的速度把被测物洗脱下来 ,收集洗脱液。
2. 3. 2 柱前衍生化 取 0. 8 mL 衍生化试剂(用前要摇匀)加入到洗脱液中 ,盖上试管塞子 ,摇匀。于
60 ℃水浴中反应10 min。然后从水浴中取出试管 ,快速浸入冷水中放置 10 min。该衍生化的青霉素在
30 ℃避光放置至少可稳定5 h。
2. 4 色谱条件
色谱柱Waters Nova2Pak C18 (150 × 3. 9 mm i . d. ) ,色谱柱温度30 ℃;检测波长325nm;流动相为乙腈加
磷酸盐缓冲溶液(pH 6. 5) (含0. 015 mol L 的硫代硫酸钠) ,梯度洗脱; 流速 1. 0 mL min ......
2001年7月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第7期
779～781
柱前衍生高效液相色谱法
测定猪肉中5种青霉素残留量
王 超3
王 星
(中国进出口商品检验技术研究所 ,北京 100025)
摘 要 样品采用乙腈直接提取 ,离心分离及用液2液分配和固相萃取(C18柱)净化方式 ,经衍生后 ,用液
相色谱紫外检测器测定猪肉中5种青霉素残留量。使用的分离柱是 Nova Pak C18柱 ,流动相为乙腈和磷
酸盐混合液。方法检出限0. 02 mg kg ,回收率为70. 9 %～96. 5 % ,相对标准偏差为3. 10 %～6. 71 %。
关键词 青霉素 ,残留 ,高效液相色谱 ,猪肉 ,柱前衍生化
2000208210收稿;2001201219接受
1 引 言
青霉素作为治疗家畜疾病的抗菌剂已获得广泛应用。当食用肉食品时 ,可能会受到青霉素残留的
危害。为了保证人类食品的安全 ,欧盟对肉中青霉素最高残留限量规定为苄青霉素 0. 05 mg kg , 苯唑
青霉素、邻氯青霉素和双氯青霉素分别为0. 3 mg kg。测定猪肉中青霉素的方法已有许多报道 ,但对多
种青霉素残留的测定方法 ,都是使用离子对反相色谱进行分离测定〔 1～3〕。由于离子对试剂对色谱的分
离影响较大 ,作者报道了用反相液相色谱分离测定牛奶中多种青霉素残留量的方法〔 4〕,在此基础上 ,本
文通过增加样品脱脂净化处理 ,采用柱前衍生高效液相色谱法测定猪肉中多种青霉素残留量。并用于
实际样品分析 ,结果满意。
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂
日本岛津LC210AD高效液相色谱仪 ,RF210A 紫外检测器 ,CR27AD 数据处理机。净化柱为 Supel2
cleanTMLC218 SPE Tubes (3 mL) 。磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硫代硫酸钠、氯化汞、氯化钠、氢氧化钠和正
己烷为分析纯。乙腈为色谱纯。水为蒸馏水或相应的去离子水。青霉素标准品为 Sigma 试剂。
0.1 moL L 磷酸盐缓冲溶液 (pH 6. 5) (含 0. 015 mol L 的硫代硫酸钠) 。0. 1 moL L 磷酸盐
(Na2HPO4)缓冲萃取溶液(pH 8. 0) 。
固相净化柱淋洗液:60 mL 水加40 mL 乙腈混合均匀 ,现用现配。
衍生化试剂溶液:2 mol L 的1 ,2 ,42三噻唑(含0. 01 mol L 氯化汞) (pH 9. 0± 0. 5) 。避光保存在4 ℃
的冰箱中。
标准储备液和标准工作溶液:分别称取0. 0100 g苄青霉素、苯氧基青霉素、苯唑青霉素、邻氯青霉素
钠、双氯青霉素标准品于100 mL 容量瓶中 ,用水溶解并稀释至刻度。浓度分别为 100 mg L。用此标准
储备液配制成标准工作溶液的浓度分别为1. 0 mg L。
2. 2 合成样品的制备
在5. 0 g猪肉空白样品中加入标准工作液 ,分别制成30、 50、 100μg kg苄青霉素和50、 100、 300μg kg
其它青霉素3个添加水平的试验样品。
2. 3 样品的提取净化步骤
2. 3. 1 样品的提取与净化 准确称取5. 0 g捣碎肉样或焙制的猪肉样品于50 mL 离心管中 ,加入30 mL
乙腈 ,匀浆均质3 min。然后以8000 r min的速度离心该溶液10 min。随后把上清液转入150 mL 圆底烧瓶中 ,按上述方法再用20 mL 乙腈均质提取一次。合并提取液后 ,加入30 mL 4 %的氯化钠溶液 ,混合后
在旋转蒸发器上40 ℃减压浓缩至约30 mL。把该试液转入125 mL 分液漏斗中 ,加入20 mL 正己烷 ,振荡
3 min ,静置分层 ,弃去正己烷层(除去油脂类化合物) 。按此步骤用 20 mL 正己烷再萃取一次 ,取水相清
液。先把此试样清液以3 mL min的速度通过已经预淋洗过的SPE C18净化柱 ,然后加入1. 5 mL 淋洗液 ,浸泡1 min ,再以3 mL min的速度把被测物洗脱下来 ,收集洗脱液。
2. 3. 2 柱前衍生化 取 0. 8 mL 衍生化试剂(用前要摇匀)加入到洗脱液中 ,盖上试管塞子 ,摇匀。于
60 ℃水浴中反应10 min。然后从水浴中取出试管 ,快速浸入冷水中放置 10 min。该衍生化的青霉素在
30 ℃避光放置至少可稳定5 h。
2. 4 色谱条件
色谱柱Waters Nova2Pak C18 (150 × 3. 9 mm i . d. ) ,色谱柱温度30 ℃;检测波长325nm;流动相为乙腈加
磷酸盐缓冲溶液(pH 6. 5) (含0. 015 mol L 的硫代硫酸钠) ,梯度洗脱; 流速 1. 0 mL min ......
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