凝胶过滤色谱法测定泥鳅多糖的组成及分子量.PDF
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钦传光 黄开勋 徐辉碧
凝胶渗透色谱,泥鳅多糖,分子量,组成分析
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参见附件(137KB，3页)。
凝胶过滤色谱法测定泥鳅多糖的组成及分子量.PDF
研 究 简 报
凝胶过滤色谱法测定泥鳅多糖的组成及分子量
钦传光 黄开勋 徐辉碧3
(华中科技大学药物研究所 ,武汉 430074)
摘 要 从泥鳅粘液中分离提取到中性的粗多糖 ,采用凝胶过滤色谱柱在高效液相色谱仪上进行分离和测
定 ,结果表明 ,该多糖由一个高聚糖(MAP ,1911 %) 和一个寡糖(MAO ,8019 %) 组成。用标准的 Pullulan ( P 2
112000 ,P 247300 ,P 222800 ,P 25900 ,P 22700)作标准曲线 ,测得其重均分子量分别为 130252 (约 723 个糖基)和 1539
(约9个糖基) 。粗多糖经 Sephadex G 2100凝胶柱(1 cm× 50 cm)过滤 ,分离得到纯化的MAP和MAO。
关键词 凝胶渗透色谱 ,泥鳅多糖 ,分子量 ,组成分析
2001205230收稿;2001210209接受
1 引 言
泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus cantor)系鳅科动物 ,肉或全体入药 ,收载于《中药大辞典》,也是人们
常食的鱼类。其体表的皮肤能够分泌出丰富的粘液 ,具有重要的生理功能1。目前 ,人们从泥鳅粘液中
已经分离到多种生物活性物质 ,如糖蛋白2
、凝集素3
、抗菌肽4
等 ,我们从泥鳅粘液中提取到一种游离
的中性多糖 ,并观察了其消除活性氧自由基的活性及对DNA链的保护作用5。本文报道采用凝胶过滤
色谱柱在高效液相色谱仪上分离和测定泥鳅多糖的组成及其分子量 ,以及用 Sephadex G 2100 凝胶过滤 ,分离纯化泥鳅多糖。
2 实验部分
211 主要仪器
Lambda Bio 40型紫外2可见分光光度计(美国 Perkin2Elmer公司) ;Waters 510型高效液相色谱仪、 TSK
G 23000 SW凝胶过滤柱(300 mm× 7. 5 mm)及410型示差检测器(美国 Waters公司) ;RS 220 Ⅲ型高速离心
机(日本 Tomy Seiko 公司) ;超低温冰箱;冷冻干燥器;BT012100 型恒流蠕动泵;BSZ 2160 型自动部分收集
器。
212 药品试剂
标准葡萄糖 Pullulan (P2112000 ,P247300 ,P 222800 ,P 211800 , P 25900 ,P22700) (日本化学株式会社) ;L2
岩藻糖、 Amberlite IR2118 (H+)和 IR A2410 (OH-)树脂(美国 Sigma 化学公司) ;其余生化试剂分析纯试剂
均为国产。
213 实验方法
21311 泥鳅多糖的提取 将鲜活泥鳅用蒸馏水浸养 ,每隔 24 h过滤一次 ,收集滤液。将滤液真空浓缩
至体积的1P 4后 ,加4倍体积的无水乙醇 ,静置过夜。在温度为5 ℃,转速为7000 rP min的条件下 ,离心 5
min ,倾出上清液。将沉淀用无水乙醇洗涤 2～3 次 ,每次再离心分出上清液。用少量蒸馏水将沉淀溶
解 ,加萃取剂氯仿2正丁醇(1∶ 4)萃取除去游离蛋白质5
后 ,再将水相对水透析 2 天。将透析后透析袋内
的溶液经冷冻干燥得白色絮状粉末 ,用硫酸苯酚法测得总糖含量为9615 %。
21312 泥鳅多糖的凝胶过滤色谱( GFC)分析 采用 TSK G 23000SW凝胶过滤柱(300 × 7. 5 mm)在Waters
HPLC仪上进行分离 ,检测器为410型示差检测器 ,并用标准葡萄糖 Pullulan (P2112000 ,P247300 ,P 222800 ,第30卷
2002年4月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第4期
411～413P211800 ,P 25900 , P22700)作标准曲线 ,数据处理为Millennium232 工作站。色谱条件为:柱温 ,21℃(自动
柱温控制系统) ;柱压 ,5 MPa (600 型恒压泵) ;进样器 50μ L ;进样量 ,20μ L ;流动相 ,HAc2NaAc 缓冲溶液
(pH = 5) ;流速 ,110 mLP min ;洗脱时间 ,40 min。
21313 泥鳅多糖的凝胶色谱分离纯化 Sephadex G 2100凝胶柱(1 cm× 50 cm)用0. 05 molP L NaCl 溶液平
衡3 h。将粗泥鳅多糖(200 mg)溶于2 mL 蒸馏水后 ,转入色谱柱 ,并用 0105 molP L NaCl 溶液淋洗 ,流速
0. 1 mLP min (用BT012100型恒流蠕动泵控制) ,洗脱液用BSZ 2160自动部分收集器收集 ,215 mLP 管 ......
凝胶过滤色谱法测定泥鳅多糖的组成及分子量
钦传光 黄开勋 徐辉碧3
(华中科技大学药物研究所 ,武汉 430074)
摘 要 从泥鳅粘液中分离提取到中性的粗多糖 ,采用凝胶过滤色谱柱在高效液相色谱仪上进行分离和测
定 ,结果表明 ,该多糖由一个高聚糖(MAP ,1911 %) 和一个寡糖(MAO ,8019 %) 组成。用标准的 Pullulan ( P 2
112000 ,P 247300 ,P 222800 ,P 25900 ,P 22700)作标准曲线 ,测得其重均分子量分别为 130252 (约 723 个糖基)和 1539
(约9个糖基) 。粗多糖经 Sephadex G 2100凝胶柱(1 cm× 50 cm)过滤 ,分离得到纯化的MAP和MAO。
关键词 凝胶渗透色谱 ,泥鳅多糖 ,分子量 ,组成分析
2001205230收稿;2001210209接受
1 引 言
泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus cantor)系鳅科动物 ,肉或全体入药 ,收载于《中药大辞典》,也是人们
常食的鱼类。其体表的皮肤能够分泌出丰富的粘液 ,具有重要的生理功能1。目前 ,人们从泥鳅粘液中
已经分离到多种生物活性物质 ,如糖蛋白2
、凝集素3
、抗菌肽4
等 ,我们从泥鳅粘液中提取到一种游离
的中性多糖 ,并观察了其消除活性氧自由基的活性及对DNA链的保护作用5。本文报道采用凝胶过滤
色谱柱在高效液相色谱仪上分离和测定泥鳅多糖的组成及其分子量 ,以及用 Sephadex G 2100 凝胶过滤 ,分离纯化泥鳅多糖。
2 实验部分
211 主要仪器
Lambda Bio 40型紫外2可见分光光度计(美国 Perkin2Elmer公司) ;Waters 510型高效液相色谱仪、 TSK
G 23000 SW凝胶过滤柱(300 mm× 7. 5 mm)及410型示差检测器(美国 Waters公司) ;RS 220 Ⅲ型高速离心
机(日本 Tomy Seiko 公司) ;超低温冰箱;冷冻干燥器;BT012100 型恒流蠕动泵;BSZ 2160 型自动部分收集
器。
212 药品试剂
标准葡萄糖 Pullulan (P2112000 ,P247300 ,P 222800 ,P 211800 , P 25900 ,P22700) (日本化学株式会社) ;L2
岩藻糖、 Amberlite IR2118 (H+)和 IR A2410 (OH-)树脂(美国 Sigma 化学公司) ;其余生化试剂分析纯试剂
均为国产。
213 实验方法
21311 泥鳅多糖的提取 将鲜活泥鳅用蒸馏水浸养 ,每隔 24 h过滤一次 ,收集滤液。将滤液真空浓缩
至体积的1P 4后 ,加4倍体积的无水乙醇 ,静置过夜。在温度为5 ℃,转速为7000 rP min的条件下 ,离心 5
min ,倾出上清液。将沉淀用无水乙醇洗涤 2～3 次 ,每次再离心分出上清液。用少量蒸馏水将沉淀溶
解 ,加萃取剂氯仿2正丁醇(1∶ 4)萃取除去游离蛋白质5
后 ,再将水相对水透析 2 天。将透析后透析袋内
的溶液经冷冻干燥得白色絮状粉末 ,用硫酸苯酚法测得总糖含量为9615 %。
21312 泥鳅多糖的凝胶过滤色谱( GFC)分析 采用 TSK G 23000SW凝胶过滤柱(300 × 7. 5 mm)在Waters
HPLC仪上进行分离 ,检测器为410型示差检测器 ,并用标准葡萄糖 Pullulan (P2112000 ,P247300 ,P 222800 ,第30卷
2002年4月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第4期
411～413P211800 ,P 25900 , P22700)作标准曲线 ,数据处理为Millennium232 工作站。色谱条件为:柱温 ,21℃(自动
柱温控制系统) ;柱压 ,5 MPa (600 型恒压泵) ;进样器 50μ L ;进样量 ,20μ L ;流动相 ,HAc2NaAc 缓冲溶液
(pH = 5) ;流速 ,110 mLP min ;洗脱时间 ,40 min。
21313 泥鳅多糖的凝胶色谱分离纯化 Sephadex G 2100凝胶柱(1 cm× 50 cm)用0. 05 molP L NaCl 溶液平
衡3 h。将粗泥鳅多糖(200 mg)溶于2 mL 蒸馏水后 ,转入色谱柱 ,并用 0105 molP L NaCl 溶液淋洗 ,流速
0. 1 mLP min (用BT012100型恒流蠕动泵控制) ,洗脱液用BSZ 2160自动部分收集器收集 ,215 mLP 管 ......
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