补脾清肠活血汤对溃疡性结肠炎患者淋巴细胞功能的影响
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董文毅, 胡刚正, 郑长青
溃疡性结肠炎;中药;淋巴细胞;免疫耐受;IL-2;IFN-γ;IL-10;IL-4,董文毅,胡刚正,郑长青,通讯作者:,电话:,传真:,收稿日期
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董文毅, 中国医科大学附属第二医院(盛京医院)中医科 辽宁省沈阳市 110004
胡刚正, 郑长青, 中国医科大学附属第二医院(盛京医院)消化内科 辽宁省沈阳市 110004
通讯作者: 董文毅, 110004, 辽宁省沈阳市和平区三好街36号, 中国医科大学附属第二医院(盛京医院)中医科. Dong_wen_yi@tom.com
电话: 024-82680280 传真: 024-83956682
收稿日期: 2006-02-06 接受日期: 2006-02-09
摘要
目的: 探讨补脾清肠活血汤、复合灌肠液及环孢素A对溃疡性结肠炎的治疗作用是否通过影响淋巴细胞的增殖或细胞因子表达谱来实现.
方法: 体外培养中用植物凝集素刺激溃疡性结肠炎患者外周血淋巴细胞, 分组加入一定剂量的补脾清肠活血汤、复合灌肠液、环孢素A及空白对照剂, 检测增殖程度及细胞因子表达谱.
结果: 复合灌肠液和环孢素A能显著抑制淋巴细胞的增殖及细胞因子IL-2、IL-4及IFN-γ的分泌, 同时也抑制了免疫抑制性细胞因子IL-10的分泌, 而补脾清肠活血汤抑制增殖及促炎细胞因子的作用较弱, 但能促进IL-10的分泌.
结论: 补脾清肠活血汤、复合灌肠液及环孢素A均可通过影响T细胞来促进免疫耐受的形成, 但其作用的具体途径有差别, 这些途径很可能产生协同作用.
关键词: 溃疡性结肠炎; 中药; 淋巴细胞; 免疫耐受; IL-2; IFN-γ; IL-10; IL-4
董文毅, 胡刚正, 郑长青. 补脾清肠活血汤对溃疡性结肠炎患者淋巴细胞功能的影响. 世界华人消化杂志 2006;14(11):1124-1127
0 引言
溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)在我国很常见, 且发病率有上升趋势, 而临床治疗常很棘手, 有效控制复发及诱导重度患者临床缓解还很具挑战性. 氨基水杨酸类及环孢素A等西药有一定的疗效, 但有长期应用副作用较大等不足. UC在我国很早就被认识, 中医药积累了丰富的治疗经验, 近几十年来, 国内也大量地报道了中西药结合治疗UC的临床实验, 疗效一般高于单纯西药, 而且副作用较小[1-4]. 本科室根据中医理论及大量的临床实验结果, 自拟出补脾清肠活血汤口服剂及复合灌肠液(锡类散加三黄汤), 应用于临床10多年, 疗效比较满意, 尤其是联合西药诱导重度患者缓解和缓解期应用以预防复发.
补脾清肠活血汤及复合灌肠液临床疗效显著, 且副作用很小, 但其在现代医学理论中的作用机制尚未深入研究. 近年来, 越来越多的研究者认为溃疡性结肠炎由肠道局部持续、过强的免疫反应所诱发, T淋巴细胞在此免疫反应的激发和维持中起中心作用[5-8]. T淋巴细胞在正常人体肠道局部免疫耐受的形成中发挥关键作用, 而UC中这种耐受被打破[9-10]. 已经很明确, T细胞的活化/增殖调控及主动免疫抑制(调节性T细胞的分化及其免疫抑制性细胞因子的产生)是免疫耐受形成的主要机制[11-13]. 补脾清肠活血汤及复合灌肠液均为中药复方制剂, 药理作用很复杂, 推测其可能主要是通过诱导T细胞介导的免疫耐受的形成来发挥作用. 本研究在体外培养中用多克隆刺激剂活化人外周血淋巴细胞, 分组加入一定剂量的补脾清肠活血汤、复合灌肠液、环孢素A及空白对照剂, 检测增殖程度及细胞因子分泌谱后发现, 补脾清肠活血汤能诱导免疫抑制性细胞因子的产生, 复合灌肠液和环孢素A能抑制淋巴细胞的活化/增殖及促炎细胞因子的分泌.
1 材料和方法
1.1 材料 Lymphocyte-H购于Cedarlane, 胎牛血清及RPMI-1640购于Hyclone, Percoll购于Amersham, 中药均为无菌袋装免煎中药(10 g/袋), 锡类散为北京同仁堂产品(1 g/袋), 环孢素A由Sandoz生产, 植物凝集素购于Sigma, [3H]TdR购于中国原子能研究院, ELISA试剂盒购于eBioscience.
1.2 方法
1.2.1 淋巴细胞的分离 先后从10名溃疡性结肠炎患者(均为病程3 a以上的慢性复发型患者, 符合2000年成都诊断标准)采外周血6 mL, 立即注入肝素抗凝管, 30 min内与4 mL含1 mmol/L EDTA的PBS混合, 加入至15 mL离心管, 用接6号加长针头的一次性注射器抽4 mL Lymphocyte-H, 缓慢地铺在抗凝血下面, 室温、2000 r/min离心20 min, 取灰白层, 用PBS洗两遍以去除血小板, 加10 mL含100 mL/L胎牛血清、100 U/mL青霉素和链霉素、pH7 ......
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