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编号:10969702
间隙连接研究进展
http://www.100md.com 《四川生理科学杂志》 2004年第2期
多细胞生物,1用于检测间隙连接通讯及其蛋白的方法,2间隙连接蛋白的种类,3间隙连接通道的调节机制,4间隙连接与人类疾病的联系,参考文献
     多细胞生物其本身具有很复杂的信息调控网。靠神经,激素,及其它的信号调节来构成一个正反馈和负反馈系统,精确而有序的调控着生物体的新陈代谢,生长发育等各种活动。而多细胞生物中的细胞也不是简单的堆积,而是通过细胞间隙连接通信构成了一个精密的信息网,来协调组织器官的功能。构成间隙连接的基本单位为连接子(commexon),最近的研究发现在夫脊椎动物蝗虫中 [1] 有类似connexin的蛋白家族,称为innexins。它们是构成无脊椎动物的间隙连接的蛋白亚基。连接子位于质膜上与相邻细胞上对应面上的一对构成间隙连接通道(gap junction channel)。间隙连接通道是目前已知的细胞间直接进行物质交流的唯一的膜通道结构 [2] 。有的研究显示:间隙连接通讯主要在如下几个方面作用:(1)它可以协调不同系统和组织之间的电导性或代谢来有效地调控各种信息。(2)在细胞分化和胚胎发育中起着重要的作用。(3)在调控细胞增殖,细胞凋亡方面有重要的作用。(4)与肿瘤细胞的生长抑制和转化有关。(5)一些遗传病与connexin(Cx)的突变有关。下面就目前检测间隙连接通讯的常用方法,间隙连接通道的调控机制,已检测到的Cx的种类,其基因突变与疾病的关系,及其对肿瘤细胞的影响作一论述。

    1 用于检测间隙连接通讯及其蛋白的方法

    1.1 染料划痕法 将细胞培养达饱和密度后,用刀划痕几条,用Lucifer Yellow(PBS配制0.05%)浸泡三分钟,洗去染液,在荧光显微镜下观察染料向邻近细胞移动情况。可用于检测细胞间连接通讯功能的有无 [3] 。

    1.2 微注射荧光分子法 在培养的细胞中,将荧光物质(如Lucifer Yellow)注射入细胞中,在荧光显微镜下观察荧光物质在细胞间转移情况。由此可确定细胞间间隙连接通信的功能 [4] 。

    1.3 转染connexin与荧光蛋白(green fluorescent pro-teins)融合子的方法 将connexin与荧光蛋白融合后的融合子转染到细胞中,荧光蛋白可以采用绿色荧光蛋白(green fluorescent proteins,GFP),黄色荧光蛋白(yellow fluorescent proteins,YFP),蓝色荧光蛋白(cyan fluorescent proteins,CFP)然后利用荧光显微镜进行观察,可以观察其在细胞中的定位及其动态变化 [5] 。

    1.4 激光扫描共聚焦显微成像技术 将细胞常规培养后,用荧光染料6-羧基荧光素乙酸乙酰盐(6-CF-DA)进行染色 ......

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