摘要 目的: 克隆、表达结核分枝杆菌PPE家族蛋白PPE68的编码基因Rv3873，并初步探索PPE68诱导Balb/c小鼠脾淋巴细胞的增殖活性，为进一步研究PPE68的免疫功能提供实验依据。 方法: 以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板，PCR扩增Rv3873基因编码序列，定向克隆入融合蛋白原核表达载体pET32a(+)，获得重组表达质粒，转化大肠杆菌后用IPTG进行诱导表达，纯化表达产物，通过XTT比色法检测重组蛋白PPE68诱导脾淋巴细胞的增殖活性。 结果: 重组质粒pETRv3873构建成功，57kDa的His-PPE68融合蛋白在大肠杆菌中稳定表达，并具有刺激Balb/c小鼠脾淋巴细胞增殖的功能。 结论: PPE68蛋白具有较强的免疫原性，其免疫学功能具有进一步研究的价值。

    关键词 PPE68;免疫相关蛋白;免疫原性;结核分枝杆菌

    1998年，结核分枝杆菌全基因组测序完成，并发现了PE和PPE两大富含甘氨酸的蛋白家族，推测其功能可能与结核分枝杆菌抗原变异和干扰、抑制抗原提呈过程相关，具有极为重要的免疫学意义 [1] 。由此，PE和PPE蛋白家族日益得到研究人员的关注。PPE68为PPE蛋白家族成员，由RD1区Rv3873基因所编码。目前研究表明，PPE68主要定位于细胞膜和细胞壁 [2] ，可以在结核杆菌感染病人体内激发强烈的特异性细胞免疫反应，促进释放γ-干扰素，由此推测其可能为一种免疫优势抗原，对结核感染具有免疫保护性 [3] 。本研究通过将结核分枝杆菌PPE68的编码基因Rv3873克隆入原核表达载体pET32a(+)中，并在大肠杆菌中诱导表达。以纯化表达蛋白诱导Balb/c小鼠脾淋巴细胞增殖，检测其增殖活性，为进一步研究PPE68的免疫学功能奠定了基础。

     1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 结核分枝杆菌、质粒及宿主菌 结核分枝杆菌H37Rv国际标准株由中国药品生物制品检定所提供;质粒pET32a(+)及大肠杆菌BL21(DE3)均由本室保存。

    1.1.2 实验动物 Balb/c雌性小鼠，4～6周龄，由四川大学华西医学动物中心提供。

    1.1.3 主要试剂 DNA限制性内切酶BamHI、HindⅢ，T4DNA连接酶、牛小肠碱性磷酸酶、MassRulerTM DNA Lad-der、蛋白质分子量标准(MBI);dNTP、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)、丙烯酰胺、N，N′-亚甲双丙烯酰胺(上海生工生物工程有限公司);DNA Marker DL2000、LA Taq酶(TakaRa);PCR清洁试剂盒(维特洁);DNA回收试剂盒(华舜);HisTrap亲和层析柱(Amersham);RPMI1640培养基、Penicillin-Streptomycin(GIBCOL BRL);新生小牛血清;XTT(BBI);维生素K3(Sig-ma) ......