细胞内GSH耗竭逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF7/ADM对阿霉素的耐药性
细胞,,还原型谷胱甘肽(GSH),；,马来酸二乙酯；,阿霉素,；,耐药,1引言,2材料与方法,3统计方法,4结果,参考文
摘要 目的：探讨癌细胞内GSH浓度在肿瘤细胞耐药机制中的作用。 方法：以马来酸二乙酯(DEM)处理人乳腺癌耐药细胞株MCF7/ADM 3小时，以消耗其细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)，MTT法检测DEM处理前后MCF7/ADM细胞对ADM耐药程度的变化，并采用荧光分光光度法同步检测其细胞内GSH的消耗程度，分析细胞内GSH浓度的变化与MCF7/ADM细胞对ADM耐药程度变化间的相关关系。 结果：0.1umol/L DEM使细胞内GSH浓度减少37.4%(P<0.01)；ADM亦使细胞内GSH含量呈ADM浓度依赖性的下降；DEM与ADM合用时，GSH浓度显著下降，其下降程度大于DEM和ADM单独应用之和。随着细胞内GSH数量的减少，MCF7/ADM细胞对ADM的敏感性增强、耐药性下降(P<0.01)。结论：DEM耗竭细胞内GSH的作用与ADM有协同效应，耗竭细胞内GSH可部分逆转人乳腺癌MCF7/ADM细胞对阿霉素的耐药性。关键词 还原型谷胱甘肽(GSH) ； 马来酸二乙酯； 阿霉素 ； 耐药
1 引言
肿瘤细胞耐药已成为制约肿瘤化疗效果的主要因素之一，其发生耐药性的机制有许多，其中最受人关注的是肿瘤细胞的多药耐药性(multidrug resistance，MDR)，MDR的主要机制与肿瘤细胞对抗癌药物的主动外排有关。目前认为，，细胞内GSH水平可能也与MDR密切相关，[1]GSH作为细胞内的一种主要电子供体，在谷胱甘肽S转移酶(glutathioneStransferases GST)催化下可与许多亲电性药物、毒物结合，从而促进抗癌药物的解毒与外排。本实验室的相关研究已显示，癌组织中的GSH含量明显高于癌旁组织, 显示出癌细胞GSH的高表达在MDR机制中可能也占椐着重要的地位。因此，降低癌细胞内GSH的浓度应对癌细胞的耐药性产生逆转效应。目前，根椐此种思路的GSH合成酶抑制剂BSO(丁胱亚磺酰亚胺buthionine sulfoxine)已进入临床Ⅱ期试验[2], 但BSO系酶抑制剂，毒性较大。因此，我们希望探索能与GSH结合、降低GSH细胞内浓度的耗竭剂，观察其是否确能降低耐药肿瘤细胞内的GSH浓度，以及该耗竭效应与其耐药性是否相关。马来酸二乙酯(DEM)是一种巯基耗竭剂,它可以快速而短暂地耗竭细胞内GSH,作用较BSO迅速810倍,采用DEM逆转肿瘤细胞的耐药性,目前尚未见相关报道.
2 材料与方法
2. 1 主要试剂与设备 阿霉素购自法玛西亚普强公司(批号：3Y40F4)；四氮唑蓝(MTT)、还原型谷胱甘肽、邻苯二醛购自Sigma公司；DEM、小牛血清购自北京宝兰博公司；RPMI1640培养基,Gibco公司;CO2培养箱,德国Heraeus公司；荧光分光光度计,日本岛津公司；550型酶标仪,Biorad公司 ......
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