摘 要 目的: 探讨体外分离培养、纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)的方法，明确增殖及生长特征。 方法: 从骨髓中提取间充质干细胞，加入淋巴分离液后用密度梯度离心培养法和静止贴壁培养法，分离纯化大鼠骨髓MSCs，对其进行传代扩增和形态学观察，细胞计数，绘制生长曲线。 结果: (1)通过离体培养，可使体内环境下低丰度的骨髓间充质干细胞实现数目扩增;(2)体外单层培养条件下贴壁生长的骨髓间充质干细胞大多数具有成纤维细胞生长特性。 结论: 对比两种分离方法可知淋巴分离法更有利于骨髓间充质干细胞的纯化，体外培养成功为今后进一步利用体内间充质干细胞研究细胞衰老，并建立衰老模型奠定了基础。

    关键词 间充质干细胞;骨髓;SD大鼠

    骨髓中存在着多潜能的间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC)，易于分离，能在体外大量扩增，并具有较强的可塑性 [1] 。除能在体内、外被诱导分化形成骨、软骨、脂肪、神经胶 质等细胞以外，还能分化形成包括血液、皮肤、肝实质细胞、胰腺细胞以及视网膜等不同类型的细胞。由于间充质干细胞跨越了人胚胎干细胞所面临的伦理问题，使得间充质干细胞在细胞治疗及组织工程等应用方面具有其他组织干细胞不可比拟的优势。

     1 材料和方法

    1.1 动物 SD大鼠(四川大学实验动物中心)。

    1.2 试剂 淋巴细胞分离液(上海试剂二厂)，各种常规试剂;培养液:DMEM培养基(GIBICO);小牛血清(华西哈里生化试剂公司生产);胎牛血清(GIBICO公司产品)。

    1.3 试剂配制

    1.3.1 含20%血清DMEM培养液配制 成分:碳酸氢钠1.5g;DMEM培养基10.4g ......