添加引物法改善PCR-SSCP分析
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背景:PCR产物中的引物量显著影响SSCP带型。目的:探讨添加引物法改善PCR-SSCP重复性和灵敏性的机制,并确定最佳引物浓度。方法:HLA-DRB1引物或非DRB1引物与DRB1基因的PCR产物分别以摩尔数比0:1、3:1、6:1、12:1、25:1、50:1、100:1和200:1混合,变性,行聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显色。结果:HLA-DRB1引物可以明显改变相应PCR产物的SSCP带型,增加其灵敏性。当引物与PCR产物的摩尔数比达到200:1时,PCR-SSCP分析的重复性和灵敏性最佳。结论:通过添加适量引物可排除剩余引物对PCR-SSCP中间带型的干扰,明显改善其重复性和灵敏性。
背景:PCR产物中的引物量显著影响SSCP带型。目的:探讨添加引物法改善PCR-SSCP重复性和灵敏性的机制,并确定最佳引物浓度。方法:HLA-DRB1引物或非DRB1引物与DRB1基因的PCR产物分别以摩尔数比0:1、3:1、6:1、12:1、25:1、50:1、100:1和200:1混合,变性,行聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显色。结果:HLA-DRB1引物可以明显改变相应PCR产物的SSCP带型,增加其灵敏性。当引物与PCR产物的摩尔数比达到200:1时,PCR-SSCP分析的重复性和灵敏性最佳。结论:通过添加适量引物可排除剩余引物对PCR-SSCP中间带型的干扰,明显改善其重复性和灵敏性。
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