5%声振人血白蛋白注射液的细菌内毒素检测方法的研究
摘 要 目的:建立测定声振人血白蛋白注射液细菌内毒素检查的方法。方法:确定合理的声振人血白蛋白注射液的内毒素限值，利用不同厂家的鲎试剂对不同批号的声振人血白蛋白注射液进行干扰试验，以确定最大稀释倍数。结果:声振人血白蛋白注射液稀释60倍，对细菌内毒素检查鲎试剂反应没有干扰作用。结论：方法简便、快速、准确。用本法检测声振人血白蛋白注射液中的细菌内毒素是可行的。
关键词 声振人血白蛋白注射液；细菌内毒素试验；干扰试验；限值
Experimental studies on bacterial endotoaln test of 5% sonicated human albumin
YAN Yuan, ZHENG Ping,CHEN Zhiliang
(Pharmacy Department of Nanfang Hospital, the First Military Medical University, Guangzhou, Guangdong 510515 )
Abstract Objective: To establish a method for the determination of bacterial endotoxin in 5% Sonicated Human Albumin. Methods: Set up a reasonable limit of bacterial endotoxin for 5% sonicated human albumin. The interference test was conducted by using TAL reagent from the different factories in order to establish the maxinum times of diluted liquid. Result: Sonicated Human Albumin diluted 60 times showed no interfere in bacterial endotoxin in test with Sonicated Human Albumin. Conclusion: This method was found to be simple,quick, accurate and is suitable for the determination of bacterial endotoxin in sonicated human albumin.
Key words sonicated human albumin; bacterial endotoxin test; interfering test; limit
5%声振人血白蛋白注射液是我院成功研制的一个二类新药。由5%的白蛋白生理盐水溶液特殊处理后，形成包裹空气的白蛋白微球制剂，通过外周静脉注射经肺循环的左心室超声造影剂，可显著增强左心室内膜的分辨效果。我们对5%声振人血白蛋白注射液的细菌内毒素检查进行研究，探讨以细菌内毒素检查法替代热原检查法检测5%声振人血白蛋白注射液的可行性。
1 材料
1.1 试剂
5%声振人血白蛋白注射液：第一军医大学南方医院提供，规格10 mL，不同批号若干；弃G因子鲎试剂(TAL)：批号010604，标示灵敏度025 EU/mL，每支0.1 mL(厦门鲎试剂厂)；鲎试剂(TAL)：批号0203111，标示灵敏度0.25 EU/mL，每支0.1 mL(湛江安度斯生物有限公司)；细菌内毒素国家标准品：批号981，效价9000 EU/支(中国药品生物制品检定所)；细菌内毒素检查用水(以下简称BET水)，批号000509，湛江安度斯生物有限公司。
1.2 仪器
旋涡混合器，恒温水浴锅，吸管、试管等经除热原处理(250 ℃干烤至少1 h)。
2 方法与结果
2.1 TAL标示灵敏度复核
用BET水将细菌内毒素标准品稀释成2，1，0.5，0.25λb的标准内毒素溶液，按细菌内毒素检查法[1]进行实验，结果见表1。
两批TAL的灵敏度复核结果λc与λ一致，符合使用要求。表1 TAL灵敏度复核试验
2.2 细菌内毒素限值的计算和最大稀释倍数的确定
药品、生物制品的细菌内毒素限值(L)一般按以下公式确立L=K/M[2]。按规定给药途径，本品静脉注射其内毒素阈值(K)为5.0 EU/(kg·h-1)；M为人用每公斤体重每小时最大剂量，本品第1次注射剂量为0.8 mL/kg，若显影效果不行，则第2次注射剂量为0.22 mL/kg，所以本品M定为0.3 mL/kg。
2.3 样品的干扰试验
考虑66.7倍不好稀释，我们用BET水将样品稀释60倍，按细菌内毒素检测法[1]作检品的干扰试验，结果见表2。表2 样品干扰试验结果(略)
当0.5λ≤λc,λs≤2λ时，可以认为样品在该浓度不干扰试验。试验结果表明：对两个不同厂家的鲎试剂，二批样品稀释60倍对BET检测没有增强抑制作用，勿需再做更多灵敏度更大稀释倍数的干扰试验。也就是说：用细菌内毒素检查法对5%声振人血白蛋白注射液的半成品及成品进行热原检查是可行的。检查方法：取本品用BET水稀秆60倍后，依法检查，每1 mL样品中内毒素不超过16.7 EU。
3 讨论
3.1 本法与传统家兔法比较
灵敏度高，无个体差异，受外界影响小，重现性好，设备简单，费用低廉，适合厂家对生产全过程的热原监控和中间产品检测，及时发现出毒素污染程度，提高产品质量，具有指导生产的意义。
3.2 内毒素法检测人血白蛋白，国外药典未收载，国内报道[4]全鲎试剂检测人血白蛋白，测得值比实际含量高，易造成假阳性。本法选择两个不同厂家的弃G因子TAL和普通TAL进行干扰实验，当样品稀释60倍时，两者均能消除干扰，得到满意的试验结果，这可能与白蛋白浓度低有关。
参考文献
[1]中和国药典.2000版二部[S].附录XIE.86-87.
[2]同上.附录.204.
[3]李治安，龚培力，吕清,等.5%声振人血白蛋白注射液左心声学造影增强左室内膜的Ⅱ期多中心临床研究报告[J].中国医学影像技术,2000，16(5)：361.
[4]干剑平，张雅莉，蔡磊,等.细菌内毒素试验用于人血白蛋白生产中的热原检测[1].中国输血杂志,1998,1(3)：149.
(第一军医大学附属南方医院 药学部，广东 广州510515), http://www.100md.com(晏媛 郑萍 陈志良)
关键词 声振人血白蛋白注射液；细菌内毒素试验；干扰试验；限值
Experimental studies on bacterial endotoaln test of 5% sonicated human albumin
YAN Yuan, ZHENG Ping,CHEN Zhiliang
(Pharmacy Department of Nanfang Hospital, the First Military Medical University, Guangzhou, Guangdong 510515 )
Abstract Objective: To establish a method for the determination of bacterial endotoxin in 5% Sonicated Human Albumin. Methods: Set up a reasonable limit of bacterial endotoxin for 5% sonicated human albumin. The interference test was conducted by using TAL reagent from the different factories in order to establish the maxinum times of diluted liquid. Result: Sonicated Human Albumin diluted 60 times showed no interfere in bacterial endotoxin in test with Sonicated Human Albumin. Conclusion: This method was found to be simple,quick, accurate and is suitable for the determination of bacterial endotoxin in sonicated human albumin.
Key words sonicated human albumin; bacterial endotoxin test; interfering test; limit
5%声振人血白蛋白注射液是我院成功研制的一个二类新药。由5%的白蛋白生理盐水溶液特殊处理后，形成包裹空气的白蛋白微球制剂，通过外周静脉注射经肺循环的左心室超声造影剂，可显著增强左心室内膜的分辨效果。我们对5%声振人血白蛋白注射液的细菌内毒素检查进行研究，探讨以细菌内毒素检查法替代热原检查法检测5%声振人血白蛋白注射液的可行性。
1 材料
1.1 试剂
5%声振人血白蛋白注射液：第一军医大学南方医院提供，规格10 mL，不同批号若干；弃G因子鲎试剂(TAL)：批号010604，标示灵敏度025 EU/mL，每支0.1 mL(厦门鲎试剂厂)；鲎试剂(TAL)：批号0203111，标示灵敏度0.25 EU/mL，每支0.1 mL(湛江安度斯生物有限公司)；细菌内毒素国家标准品：批号981，效价9000 EU/支(中国药品生物制品检定所)；细菌内毒素检查用水(以下简称BET水)，批号000509，湛江安度斯生物有限公司。
1.2 仪器
旋涡混合器，恒温水浴锅，吸管、试管等经除热原处理(250 ℃干烤至少1 h)。
2 方法与结果
2.1 TAL标示灵敏度复核
用BET水将细菌内毒素标准品稀释成2，1，0.5，0.25λb的标准内毒素溶液，按细菌内毒素检查法[1]进行实验，结果见表1。
两批TAL的灵敏度复核结果λc与λ一致，符合使用要求。表1 TAL灵敏度复核试验
2.2 细菌内毒素限值的计算和最大稀释倍数的确定
药品、生物制品的细菌内毒素限值(L)一般按以下公式确立L=K/M[2]。按规定给药途径，本品静脉注射其内毒素阈值(K)为5.0 EU/(kg·h-1)；M为人用每公斤体重每小时最大剂量，本品第1次注射剂量为0.8 mL/kg，若显影效果不行，则第2次注射剂量为0.22 mL/kg，所以本品M定为0.3 mL/kg。
2.3 样品的干扰试验
考虑66.7倍不好稀释，我们用BET水将样品稀释60倍，按细菌内毒素检测法[1]作检品的干扰试验，结果见表2。表2 样品干扰试验结果(略)
当0.5λ≤λc,λs≤2λ时，可以认为样品在该浓度不干扰试验。试验结果表明：对两个不同厂家的鲎试剂，二批样品稀释60倍对BET检测没有增强抑制作用，勿需再做更多灵敏度更大稀释倍数的干扰试验。也就是说：用细菌内毒素检查法对5%声振人血白蛋白注射液的半成品及成品进行热原检查是可行的。检查方法：取本品用BET水稀秆60倍后，依法检查，每1 mL样品中内毒素不超过16.7 EU。
3 讨论
3.1 本法与传统家兔法比较
灵敏度高，无个体差异，受外界影响小，重现性好，设备简单，费用低廉，适合厂家对生产全过程的热原监控和中间产品检测，及时发现出毒素污染程度，提高产品质量，具有指导生产的意义。
3.2 内毒素法检测人血白蛋白，国外药典未收载，国内报道[4]全鲎试剂检测人血白蛋白，测得值比实际含量高，易造成假阳性。本法选择两个不同厂家的弃G因子TAL和普通TAL进行干扰实验，当样品稀释60倍时，两者均能消除干扰，得到满意的试验结果，这可能与白蛋白浓度低有关。
参考文献
[1]中和国药典.2000版二部[S].附录XIE.86-87.
[2]同上.附录.204.
[3]李治安，龚培力，吕清,等.5%声振人血白蛋白注射液左心声学造影增强左室内膜的Ⅱ期多中心临床研究报告[J].中国医学影像技术,2000，16(5)：361.
[4]干剑平，张雅莉，蔡磊,等.细菌内毒素试验用于人血白蛋白生产中的热原检测[1].中国输血杂志,1998,1(3)：149.
(第一军医大学附属南方医院 药学部，广东 广州510515), http://www.100md.com(晏媛 郑萍 陈志良)