KX21血细胞计数仪测定机采血小板
血小板输注是现代医学治疗的一种有效措施，近年来已广泛用于临床，特别是在白血病、出血性疾病、肿瘤治疗及心脏外科手术等领域，我院的输注比例正逐年显著提高。而临床上机采血小板的止血效果与输注血小板的数量有直接的关系，而浓缩血小板产品的浓度可达4×1012/L，高出正常值的数倍，直接测定势必有偏差。为此，笔者设计了下述试验，以期找出测定高浓度机采血小板的试验方案。现将我化验室的检测方法与各位专家共同探讨。
1 材料与方法
1.1 仪器
12Sysmax kx21血球计数仪(日本Sysmax株式会社)；CS3000 Plus血细胞分离机及配套耗材(美国百特公司)。
1.2 样本
将CS3000 Plus血细胞分离机所采集的浓缩血小板产品充分摇匀，使之无肉眼可辨的血小板聚集物，然后用滚轮钳连续推挤5次与产品袋连接的连接管，使连接管中的成分与袋中成分一致，热合封闭一段连接管，约含产品1 ml，作为检测标本。
1.3 血小板计数及平均血小板体积(MPV)检测
浓缩血小板采集后，立即取标本作如下检测：(均采用血细胞计数仪的稀释样本检测模式)用稀释液把10 μl标本按1∶2稀释后检测；用稀释液把10 μl标本按1∶4稀释后检测；用稀释液把10 μl标本按1∶8稀释后检测；将浓缩血小板产品震荡1 h后取样本按1∶4稀释后检测。
2 结果
2.1 按不同的稀释浓度的平均血小板浓度检测结果比较情况
见表1。表1 不同稀释浓度的浓缩血小板检测结果比较(略)
2.2 浓缩血小板样本按1∶2稀释和1∶4稀释后检测其MPV 结果比较见表2。表2 不同稀释浓度的浓缩血小板MPV检测结果比较(略)
2.3 浓缩血小板采集后立即取样检测与震荡1 h后取样检测的结果比较 见表3。表3 不同时间采集的浓缩血小板对检测结果的影响(略)
3 讨论
3.1 不同稀释度的血小板浓度检测差异
Sysmax kx21血球计数仪有两种检测模式，一种为全血法，一种为稀释法。由于机采浓缩血小板的浓度一般在(1~2)×1012/L，血小板浓度超出血细胞计数仪测量范围，直接测量所得结果不可信，必须对血小板样本进行稀释后再检测。血细胞计数仪其检测原理属电极阻抗法，是通过一恒定负压，是颗粒依次通过一个小孔，由此而引发的瞬间电阻变化来感知颗粒的大小和数量。血细胞计数仪分红细胞、白细胞两个计数池分析，红细胞和血小板同在红细胞计数池分析。其中>36 fl的颗粒被计数为红细胞，血小板的计数范围为2 fl~20 fl。如果细胞太多,不间断地通过电极间的微电流变化无间断性,造成脉冲叠加,于是造成机器无法识别或错误识别。因血小板浓度过高造成的计数偏差,用稀释的法可以克服,但稀释倍数并不是越高越好,稀释倍数越大,误差越大，故要寻找一个合适的稀释度。有表1可知，对机采浓缩血小板，样本以1∶2稀释和1∶4稀释结果差异有显著性；而以1∶4稀释和1∶8稀释结果差异无显著性，故样本应按1∶4稀释后再检测。故血细胞计数仪有一个最佳线性范围,一般都在人体正常值左右,血小板的计数范围一般为(0~999)×109/L，超出此范围，计数误差较大，可信度降低[1]。
3.2 不同稀释度标本的MPV的差异
浓缩血小板经分离机分离后，易发生聚集，且浓度越大发生聚集的几率越大。当血小板聚集形成的多聚体体积增大到>36 fl时，会被认为是红细胞，导致红细胞浓度假性增高和血小板浓度假性降低；当两个或两个以上的细胞重叠在一起通过计数孔时，也会导致细胞数假性下降，体积数假性增高。如表2所示，浓缩血小板按1∶2稀释稀释后的标本的MPV的检测结果显著高于1∶4稀释稀释后的标本，而以1∶4稀释和1∶8稀释结果差异较小，但是稀释倍数越高相对误差越大，故样本应按1∶4稀释后再检测[2]。
3.3 采样时间的选择
对机采浓缩血小板采集后立即检测和震荡后检测对检测结果的影响，有表3可看出两种检测差异无显著性，说明机采浓缩血小板可以在采集后1 h内任意时间取样检测。
综上所述，笔者认为在用血细胞计数仪进行机采血小板计数时,应将样品作适当稀释,稀释倍数与血细胞分离机性能、样品浓度等有关,而应使稀释后血小板尽可能接近人体正常值高限为宜。在同等情况下,稀释倍数越小越好。Sysmax kx21血球计数仪适宜1∶4稀释后的标本进行测量。
参考文献：
[1]施仲赋,高歌.实用卫生管理统计[M].合肥:中国科技大学出版社,1991：34.
[2]卢品勉.有关血细胞分析仪的若干问答[J].临床检验杂志,1995，13(4)∶221.
(东营市胜利油田中心医院，山东 东营 257034), http://www.100md.com(赵骥)
1 材料与方法
1.1 仪器
12Sysmax kx21血球计数仪(日本Sysmax株式会社)；CS3000 Plus血细胞分离机及配套耗材(美国百特公司)。
1.2 样本
将CS3000 Plus血细胞分离机所采集的浓缩血小板产品充分摇匀，使之无肉眼可辨的血小板聚集物，然后用滚轮钳连续推挤5次与产品袋连接的连接管，使连接管中的成分与袋中成分一致，热合封闭一段连接管，约含产品1 ml，作为检测标本。
1.3 血小板计数及平均血小板体积(MPV)检测
浓缩血小板采集后，立即取标本作如下检测：(均采用血细胞计数仪的稀释样本检测模式)用稀释液把10 μl标本按1∶2稀释后检测；用稀释液把10 μl标本按1∶4稀释后检测；用稀释液把10 μl标本按1∶8稀释后检测；将浓缩血小板产品震荡1 h后取样本按1∶4稀释后检测。
2 结果
2.1 按不同的稀释浓度的平均血小板浓度检测结果比较情况
见表1。表1 不同稀释浓度的浓缩血小板检测结果比较(略)
2.2 浓缩血小板样本按1∶2稀释和1∶4稀释后检测其MPV 结果比较见表2。表2 不同稀释浓度的浓缩血小板MPV检测结果比较(略)
2.3 浓缩血小板采集后立即取样检测与震荡1 h后取样检测的结果比较 见表3。表3 不同时间采集的浓缩血小板对检测结果的影响(略)
3 讨论
3.1 不同稀释度的血小板浓度检测差异
Sysmax kx21血球计数仪有两种检测模式，一种为全血法，一种为稀释法。由于机采浓缩血小板的浓度一般在(1~2)×1012/L，血小板浓度超出血细胞计数仪测量范围，直接测量所得结果不可信，必须对血小板样本进行稀释后再检测。血细胞计数仪其检测原理属电极阻抗法，是通过一恒定负压，是颗粒依次通过一个小孔，由此而引发的瞬间电阻变化来感知颗粒的大小和数量。血细胞计数仪分红细胞、白细胞两个计数池分析，红细胞和血小板同在红细胞计数池分析。其中>36 fl的颗粒被计数为红细胞，血小板的计数范围为2 fl~20 fl。如果细胞太多,不间断地通过电极间的微电流变化无间断性,造成脉冲叠加,于是造成机器无法识别或错误识别。因血小板浓度过高造成的计数偏差,用稀释的法可以克服,但稀释倍数并不是越高越好,稀释倍数越大,误差越大，故要寻找一个合适的稀释度。有表1可知，对机采浓缩血小板，样本以1∶2稀释和1∶4稀释结果差异有显著性；而以1∶4稀释和1∶8稀释结果差异无显著性，故样本应按1∶4稀释后再检测。故血细胞计数仪有一个最佳线性范围,一般都在人体正常值左右,血小板的计数范围一般为(0~999)×109/L，超出此范围，计数误差较大，可信度降低[1]。
3.2 不同稀释度标本的MPV的差异
浓缩血小板经分离机分离后，易发生聚集，且浓度越大发生聚集的几率越大。当血小板聚集形成的多聚体体积增大到>36 fl时，会被认为是红细胞，导致红细胞浓度假性增高和血小板浓度假性降低；当两个或两个以上的细胞重叠在一起通过计数孔时，也会导致细胞数假性下降，体积数假性增高。如表2所示，浓缩血小板按1∶2稀释稀释后的标本的MPV的检测结果显著高于1∶4稀释稀释后的标本，而以1∶4稀释和1∶8稀释结果差异较小，但是稀释倍数越高相对误差越大，故样本应按1∶4稀释后再检测[2]。
3.3 采样时间的选择
对机采浓缩血小板采集后立即检测和震荡后检测对检测结果的影响，有表3可看出两种检测差异无显著性，说明机采浓缩血小板可以在采集后1 h内任意时间取样检测。
综上所述，笔者认为在用血细胞计数仪进行机采血小板计数时,应将样品作适当稀释,稀释倍数与血细胞分离机性能、样品浓度等有关,而应使稀释后血小板尽可能接近人体正常值高限为宜。在同等情况下,稀释倍数越小越好。Sysmax kx21血球计数仪适宜1∶4稀释后的标本进行测量。
参考文献：
[1]施仲赋,高歌.实用卫生管理统计[M].合肥:中国科技大学出版社,1991：34.
[2]卢品勉.有关血细胞分析仪的若干问答[J].临床检验杂志,1995，13(4)∶221.
(东营市胜利油田中心医院，山东 东营 257034), http://www.100md.com(赵骥)