关键词 轮状病毒；腹泻；聚丙烯酰胺凝胶电泳；儿童

     1 对象与方法

    1.1 研究对象

    本组研究对象为唐山市中心区四所综合医院2003年1月1日—2005年12月31日因患腹泻住院的社区感染儿童以及住院期间患腹泻病的院内感染儿童,共计1 122例。分别从每例患儿采集粪便标本1份,置标本于-20℃冰箱保存。采样时间为腹泻病症状出现后1~14d,99.2%的标本在腹泻发病后5d内收集。儿童腹泻病的诊断标准为大便次数增多,呈水样、蛋花汤样或稀糊样。

    1.2 患儿年龄与性别

    1 122例儿童中,除20例未查找到有关疾病的详细资料外,其余1 102例患儿均有详细病史记载,年龄为2d~13岁。

    1.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测

    1 122份标本冻融后,挑取少许粪渣或水样便加Tris2 CaCl2缓冲液稀释至400L,加40L的10%十二烷基磺酸钠,56℃水浴30min,用1∶1酚/氯仿抽提RNA。采用垂直板状聚丙烯酰胺凝胶电泳,Laemili不连续缓冲系统,浓缩胶质量分数为3%,分离胶质量分数为10%,硝酸银染色,根据病毒核酸条带的不同特征来区分A、B、C组轮状病毒 ......