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编号:11122104
压滴法观察细菌动力实验结果的影响因素及对策
http://www.100md.com 《中华首席医学网》 2006年第3期
     细菌形态学观察包括细菌染色标本检查法和不染色标本检查法。压滴法属于最常用的不染色标本检查法,主要用于检查细菌的动力,但在实际的操作过程中由于受到活菌生理特性及其他因素的影响,不容易明显观察到细菌的定向运动。在近几年的实验教学过程中,我们对影响本检查方法结果的因素进行了分析,总结出解决方法,经实施后效果良好,现介绍如下。

     1 菌种的选择

    由于压滴法主要用于观察细菌的动力,实验菌必须选用有鞭毛的细菌,如大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌等。由于绿脓杆菌为丛鞭毛,而大肠杆菌和变形杆菌为周鞭毛,因此绿脓杆菌的自主定向运动较其他菌更易在镜下被观察。所以压滴法实验可首选绿脓杆菌为实验菌。

     2 细菌的培养

    虽然本实验的目的在于观察细菌的定向运动,但如果细菌前期培养不当或细菌生长条件(营养、pH、气体等)变化较大时,则有可能出现细菌的HO变异从而使细菌失去鞭毛,导致细菌无法作定向运动,因此应考虑到细菌的生长繁殖条件对细菌动力的影响。若选用绿脓杆菌做实验菌,最好在转种后16~18h取出使用,此时细菌正处于对数生长期,其形态、生理活动典型,细菌运动活泼易于观察。在冬季环境温度较低时,细菌的自主定向运动会很快停止,预先将菌液置于35℃恒温箱中可避免出现上述情况。

     3 菌液量的影响

    菌液量过少时,标本易干,影响细菌运动;菌液量过多时,菌液溢出造成污染,而且菌体随液体流动干扰结果。在操作中可用接种环取1~2环菌液或用毛细吸管滴1小滴菌液置于玻片中央。

     4 显微镜的影响

    压滴法只需用高倍镜和低倍镜观察。由于活菌菌体是具有折光性的半透明体,因此可先用低倍镜找到标本,再以高倍镜观察,否则无法在镜下发现菌体。

     5 细菌运动方式的影响

    有鞭毛细菌的运动特点是作自主的定向运动,即细菌能在液体中定向地从一处泳动至另一处,可作直线、波浪或翻浪运动;无鞭毛细菌虽然无动力,但可表现为布朗运动,既呈左右前后位置变更不大的颤动,属分子运动。对于初次观察者而言,必须区分清楚这两种运动。在观察有鞭毛菌的定向运动同时,我们可用葡萄球菌(无鞭毛)作压滴法与之对比,以帮助区分细菌两种性质的运动。

    (咸宁学院医学院微生物学教研室,湖北 咸宁 437100), 百拇医药(孙剑刚)