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管碟法测定抗生素效价的影响因素及对策
http://www.100md.com 2006年8月18日
    引言:抗生素微生物效价测定的主要方法是管碟法,它包括二剂量法(四点法)和三剂量法(六点法),由于其操作步骤多、复杂,影响实验结果准确度的因素较多,本文全面分析管碟法操作全过程及其结果准确度的影响因素,提供了一些解决办法,为其他药学工作者提供参考。

    管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法,利用管碟法测定抗生素效价,具有准确、直观、重复性好等优点,因而被广泛采用。但是整个试验过程中影响结果的因素很多,任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差,导致准确度下降甚至整组试验失败。根据文献资料和实践经验,对管碟法中常见影响试验结果的因素进行分析并提出解决的方法。

    1) 抑菌圈圆整的控制

    在某些情况下,抑菌圈出现破裂,呈卵圆形,等不正常形状,其原因可能如下:

    (1) 在滴加抗生素溶液至不锈钢管时,抗生素溶液从钢管口或毛细滴管口溅出落在琼脂培养基表面上,由于液滴微小,往往不易觉察。防治办法:毛细滴管内不得有气泡,毛细滴管口避免太细,毛细滴管离钢管距离不要太高,适当调节,使液滴下滴时不致溅出。此外补救方法,可以预先备好消毒小滤纸片,如已觉察有小滴溅在琼脂培养基表面时,可以用小滤纸片轻轻吸去 (将滤纸投入消毒缸中),这样在培养后,不致影响抑菌圈。

    在滴加中还有可能出现抗生素溶液滴入小钢管后,没有与琼脂培养基菌层接触,有一段空气被压在溶液与培养基之间,这样是不会产生抑菌圈的。此时可以小心的用滴管吸出小钢管内的抗生素溶液,弃去。换滴管重新滴加。抗生素溶液滴加后,液面应该与小钢管管口齐平,液面反光呈黑色。(抗生素液体加入量不能按滴计算,即使同一滴管,每滴的量也有差异。)如果抗生素溶液滴加过满,可以用无菌滤纸片小心吸去多余部分。

    (2) 钢管两端面不够平,使抗生素漏出,破坏了均匀扩散现象。不锈钢管两端面,最好是平面的;如所用的小钢管端面有圆的或平面的,则在实验时,切勿混用。必须使用加工相同的小钢管。

    (3) 玻璃双碟、小钢管、钢管放置器被微量抗生素(或其它杀菌剂,如化验室内用于消毒的新洁尔灭、煤酚皂溶液等)污染,使抑菌圈破裂,有时甚至是实验菌大部被抑制。

    在实际工作中,曾发现庆大霉素、链霉素能被吸附在双碟玻璃表面,如未经彻底清洗,往往在下次使用这些双碟时,发生抑菌圈破裂现象。对这些双碟需用清洁液浸泡,使污染的抗生素分解破坏后,再清洗干净,方可使用。小钢管使用久后,表面发乌、不亮、不光洁,经清洗干净即可使用 ......

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