免疫磁珠联合定量RT-PCR技术 外周血中微量消化系统癌细胞即显原形
本报讯 (驻地记者陈茂梁 通讯员王彬)由宁波大学医学院郭俊明教授主持的“外周血中微量消化系统恶性肿瘤细胞的分析”科研组,经过3年研究,建立了一种联用阴性与阳性免疫磁珠筛选和定时定量RT-PCR检测外周血中恶性肿瘤细胞的新方法,为发现消化系统恶性肿瘤的早期转移、诊断治疗、疗效和预后判断提供了依据。该成果于日前获得浙江省医药卫生科技创新奖一等奖。
研究人员将不同浓度的人胃腺癌细胞系MGC-803细胞加入到健康人血中,经淋巴细胞分离液收集单核细胞后,等分4份。其中,1份直接用于提取RNA(方法Ⅰ)、其他分别用阴性磁珠(方法Ⅱ)、阳性磁珠(方法Ⅲ)及RT-PCR联用阴性和阳性磁珠(方法Ⅳ)富集癌细胞。然后,以癌胚抗原(CEA)mRNA作为分子标志物进行荧光定量RT-PCR检测其相对拷贝数,并检测45例胃癌(均经病理确诊)、30例胃溃疡患者和30名健康人的外周血CEA mRNA。结果显示,方法Ⅱ、方法Ⅲ和方法Ⅳ测得的CEA mRNA相对拷贝数与癌细胞数间有良好的相关性(方法Ⅱ和Ⅲ 均P<0.05,方法Ⅳ P<0.01),尤以方法Ⅳ为佳。方法Ⅰ~Ⅳ检测胃癌的阳性率分别为42.22%、53.33%、51.11%和64.44%;方法Ⅳ与方法Ⅰ比较,差异有显著意义(P<0.05)。用方法Ⅳ检测30例胃溃疡患者均为阴性,而其他3种方法检出2例阳性。30名健康人中,4种方法均未检出扩增产物。可见,联合使用免疫磁珠阴性、阳性筛选和荧光定量RT-PCR,可提高胃癌患者外周血微转移的检出率。
此外,在结直肠癌的研究中,研究者发现CEA mRNA的阳性检测率与Dukes’分期呈正相关;B期患者也有25%的阳性率。
研究者以细胞角蛋白20(CK20)mRNA作为分子标志,用结肠癌细胞系LS174T作为阳性对照,分析了结肠癌患者外周血中的癌细胞,发现CK20 mRNA的阳性检测率与肿瘤大小、淋巴结及肝转移相关,但与癌细胞的分化程度无关。, http://www.100md.com
研究人员将不同浓度的人胃腺癌细胞系MGC-803细胞加入到健康人血中,经淋巴细胞分离液收集单核细胞后,等分4份。其中,1份直接用于提取RNA(方法Ⅰ)、其他分别用阴性磁珠(方法Ⅱ)、阳性磁珠(方法Ⅲ)及RT-PCR联用阴性和阳性磁珠(方法Ⅳ)富集癌细胞。然后,以癌胚抗原(CEA)mRNA作为分子标志物进行荧光定量RT-PCR检测其相对拷贝数,并检测45例胃癌(均经病理确诊)、30例胃溃疡患者和30名健康人的外周血CEA mRNA。结果显示,方法Ⅱ、方法Ⅲ和方法Ⅳ测得的CEA mRNA相对拷贝数与癌细胞数间有良好的相关性(方法Ⅱ和Ⅲ 均P<0.05,方法Ⅳ P<0.01),尤以方法Ⅳ为佳。方法Ⅰ~Ⅳ检测胃癌的阳性率分别为42.22%、53.33%、51.11%和64.44%;方法Ⅳ与方法Ⅰ比较,差异有显著意义(P<0.05)。用方法Ⅳ检测30例胃溃疡患者均为阴性,而其他3种方法检出2例阳性。30名健康人中,4种方法均未检出扩增产物。可见,联合使用免疫磁珠阴性、阳性筛选和荧光定量RT-PCR,可提高胃癌患者外周血微转移的检出率。
此外,在结直肠癌的研究中,研究者发现CEA mRNA的阳性检测率与Dukes’分期呈正相关;B期患者也有25%的阳性率。
研究者以细胞角蛋白20(CK20)mRNA作为分子标志,用结肠癌细胞系LS174T作为阳性对照,分析了结肠癌患者外周血中的癌细胞,发现CK20 mRNA的阳性检测率与肿瘤大小、淋巴结及肝转移相关,但与癌细胞的分化程度无关。, http://www.100md.com