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编号:11155476
基于金纳米粒子自组装的分光光度法测定半胱氨酸
http://www.100md.com 《分析化学》 2006年第8期
分光光度法,金纳米粒子,半胱氨酸,,分光光度法,金纳米粒子,半胱氨酸,1引言,2实验部分,3结果与讨论,References
     摘要 在pH 4.56的BrittonRobinson(BR)缓冲溶液中,半胱氨酸的SH和NH+3 分别与金纳米粒子表面进行共价结合和静电作用,导致金纳米粒子的长距离自组装,形成网状超分子结构,并使金纳米粒子的最大吸收波长从520 nm红移到660 nm。本实验对半胱氨酸引导的金纳米粒子自组装的作用机制进行了研究,建立了操作简便、高灵敏度测定半胱氨酸的分析方法。其线性范围为0.01~0.20 mg/L;检出限为2.8 μg/L (3σ, 2.3×10-8 mol/L)。在实验条件下,其它常见的氨基酸和谷胱甘肽均不干扰测定。

    关键词 分光光度法,金纳米粒子,半胱氨酸

     1 引言

    在组成蛋白质的氨基酸中,半胱氨酸是唯一具有巯基的氨基酸,它在生物体内参与细胞的还原过程及蛋白质、谷胱甘肽的合成,具有保护细胞免受毒物损害等功能。半胱氨酸的代谢失调会导致胱氨酸病等疾病的发生。半胱氨酸的分析对生物化学研究及临床诊断都有重要的意义。有关半胱氨酸分析方法的报道,有分光光度法[1]、荧光分析法[2]、电化学分析法[3]、化学发光分析法[4]、高效液相色谱法[5]及毛细管区带电泳法[6]。这些方法都基于半胱氨酸的衍生反应及氧化还原反应。近年来,基于生物分子参与的纳米粒子自组装所引起的颜色变化在生化分析中的应用已成为一个十分活跃的研究领域[7], 特别是在DNA杂交分析[8]及免疫[9]分析中的应用。Zhong等[10]报道金纳米粒子与半胱氨酸相互作用后发生聚集,使金纳米粒子的最大吸收波长发生红移,并由此研究了半胱氨酸的分析测定。本实验发现,在合适的实验条件下,半胱氨酸能引导金纳米粒子发生有效的长距离自组装,使金纳米粒子的最大吸收波长发生更大的红移,由此建立了半胱氨酸的分光光度分析方法,其灵敏度比Zhong的方法至少提高了一个数量级,并且具有良好的选择性。

     2 实验部分

    2.1 仪器与试剂

    TU1901紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司); JEM1200EX Ⅱ 透射电子显微镜 (日本Jeol公司); PHS3C数显pH计(上海伟业仪器厂); AG245电子天平(瑞士Metler Toledo公司); QL901涡旋混合器 (江苏海门市麒麟医用仪器厂)。

    L半胱氨酸(北京化工厂);氯金酸(AuCl3·HCl·4H2O 国药集团化学试剂有限公司, 上海);L胱氨酸(北京市欣经科生物技术公司);半胱氨酸配制成 100 mg/L储备液,于4 ℃冰箱中保存并且每天更新 ......

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