第五章 第二节 三、增强机体细胞免疫功能
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《灵芝的现代研究》
Nakashima等(1979)观察了树舌多糖对细胞免疫反应的影响。给ddy/s小鼠皮下注射甲基化的细胞α-淀粉酶和不完全的Freund's佐剂(M-BaA-IFA)后，仅产生微弱的足爪肿胀反应；但注射甲基化细菌α-淀粉酶和完全的Freund's佐剂(M-BaA-CFA)则引起明显的足爪肿胀反应。预先给小鼠腹腔注射树舌多糖30mg/kg，则能显著增加(M-BaA-IFA)引起的这种迟发型过敏反应，使其反应程度可达M-BaA-CFA所致程度。但剂量增至60 mg/kg时，这种增强作用反减弱。树舌多糖增强M-BaA-IFA诱发的迟发型过敏反应是由于激活非特异性的有扩大细胞免疫反应的T细胞(amplifier T-cells)所致。
我们发现，灌胃松杉树芝多糖(50～200mg/kg)可显著增强二硝基氯苯(DNCB)所致小鼠迟发型皮肤过敏反应(DCH)，拮抗环磷酰胺对DCH的抑制作用。每日强迫小鼠在冷水中游泳5min，共10d，即出现明显的应激性免疫功能抑制，DCH反应可降低50%左右。在应激同时，每日灌胃松杉树芝多糖(50mg/kg，100mg/kg)可使DCH反应维持在接近正常的水平。表明松杉树芝多糖可拮抗应激所致细胞免疫功能抑制。从松杉树芝菌丝体和发酵液中所获多糖亦有类似的增强细胞免疫效应作用。
, 百拇医药
我们还证明，灵芝多糖BN3A，BN3B和BN3C(1μg/ml，5μg/ml)均可显著促进刀豆素A(ConA)诱导的C57BL/6j小鼠的脾淋巴细胞增殖反应。在浓度为30μg/ml时，BN3A和BN3C还可部分拮抗氢化可的松对淋巴细胞增殖反应的抑制作用。我们还发现，与3月龄小鼠相比，14月龄小鼠的ConA诱导的淋巴细胞增殖反应降低26.5%，此三种多糖在浓度为1和2.5μg/ml时，均可使之显著恢复。最近，我们以同种异型抗原刺激的混合淋巴细胞培养反应(MLR)为模型，观察灵芝多糖GL—B对细胞免疫功能的影响。结果证明，GL—B(50～800μg/ml)可浓度依赖性的促进小鼠的MLR，并可反转小剂量环孢霉素A(0.01μg/ml)对MLR的抑制作用，并使之恢复正常。当环孢霉素A的浓度增至0.1～1μg/ml时，对MLR的抑制作用达80%，对此GL—B几无拮抗作用。GL—B亦可部分拮抗氢化可的松对MLR的抑制作用。抗肿瘤药氟尿嘧啶、丝裂霉素C和阿糖胞苷均可明显抑制MLR，GL—B可剂量依赖性地拮抗这些药物对MLR的抑制作用(表7-3)。同样，我们亦发现，24月龄小鼠的MLR较3月龄小鼠降低35.3%，GL—B可使之恢复(表7-4)。
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表7-3 灵芝多糖GL—B对丝裂霉素C、氟尿嘧啶和阿糖胞苷
所致混合淋巴细胞反应(MLR)抑制的恢复作用
组别
药物浓度(μg/ml)
[3H]TdR摄取(dpm)
对照
-
31361±4242
丝裂霉素C(抑制对照)
0.01
16842±1266+++
, 百拇医药
丝裂霉素C+GL-B
0.01+50
19003±978**
丝裂霉素C+GL-B
0.01+100
24209±1505***
丝裂霉素C+GL-B
0.01+200
27606±2372***
对照
-
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28946±1527
5-氟尿嘧啶(抑制对照)
0.1
16250±1614+++
5-氟尿嘧啶+GL-B
0.1+50
20875±1750***
5-氟尿嘧啶+GL-B
0.1+100
26201±2130***
5-氟尿嘧啶+GL-B
, 百拇医药
0.1+200
28823±1728***
对照
-
23678±1348
阿糖胞苷(抑制对照)
0.01
13092±1973+++
阿糖胞苷+GL-B
0.01+50
17658±2420**
, 百拇医药
阿糖胞苷+GL-B
0.01+100
24380±2949***
阿糖胞苷+GL-B
0.01+200
30030±4649***
x-±s,n=6,+++P<0.001与对照比较, **P<0.01,***P<0.001与抑制对照比较。
表7-4 灵芝多糖GL—B对24月龄老年小鼠的同种
异型抗原刺激的混合淋巴细胞反应(MLR)的影响
, 百拇医药
组别
鼠龄(月)
浓度(μg/ml)
[3H]TdR摄取×10-3(dpm)
年轻对照
3
-
45.4±2.1
老年对照
24
-
19.4±3.8+++
, 百拇医药
GL-B
24
50
34.8±4.5
GL-B
24
100
36.1±2.6***
GL-B
24
200
40.2±4.2***
, 百拇医药
x-±s,n=6,+++P<0.001与年轻对照比较,**P<0.01,***P<0.001与老年对照比较。
我们还采用抗L3T4及抗Lyt2单克隆抗体和间接荧光免疫法检测了混合淋巴细胞培养中T细胞亚类的数量。结果指出，GL—B(50～200μg/ml)可显著增加其中总T细胞的回收量以及L3T4+细胞和Lyt2+细胞的回收量，Lyt2+细胞的百分比亦明显增加。空斑减少试验还显示，GL—B可显著增强细胞毒T细胞(CTL)的功能，在浓度为200μg/ml时，其杀伤活性增加100%。小鼠L3T4+细胞属于T辅助细胞(Th)，这一结果说明，GL—B能促使Th细胞增殖。而T抑制细胞(Ts)和CTL均带有Lyt2+抗原，故GL—B促进Lyt2+细胞增殖的确切含义尚待研究，但由于我们又观察到GL—B可增强CTL的杀伤活性，表明GL—B增加的Lyt2+细胞中，至少有一部分属于CTL细胞。
体外试验亦证明，树舌多糖可增强ConA刺激的小鼠脾细胞增殖反应。薄芝液对ConA刺激的脾细胞增殖反应的影响视所用浓度而异，低浓度(1.5μg/ml)时有促进作用，高浓度(25μg/ml)则抑制之。
灵芝蛋白LZ—8在体外对小鼠脾细胞有强大的促有丝分裂作用，最适刺激浓度为3.3μg/ml。LZ—8尚可增强ConA和LPS的促有丝分裂作用。, 百拇医药
我们发现，灌胃松杉树芝多糖(50～200mg/kg)可显著增强二硝基氯苯(DNCB)所致小鼠迟发型皮肤过敏反应(DCH)，拮抗环磷酰胺对DCH的抑制作用。每日强迫小鼠在冷水中游泳5min，共10d，即出现明显的应激性免疫功能抑制，DCH反应可降低50%左右。在应激同时，每日灌胃松杉树芝多糖(50mg/kg，100mg/kg)可使DCH反应维持在接近正常的水平。表明松杉树芝多糖可拮抗应激所致细胞免疫功能抑制。从松杉树芝菌丝体和发酵液中所获多糖亦有类似的增强细胞免疫效应作用。
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我们还证明，灵芝多糖BN3A，BN3B和BN3C(1μg/ml，5μg/ml)均可显著促进刀豆素A(ConA)诱导的C57BL/6j小鼠的脾淋巴细胞增殖反应。在浓度为30μg/ml时，BN3A和BN3C还可部分拮抗氢化可的松对淋巴细胞增殖反应的抑制作用。我们还发现，与3月龄小鼠相比，14月龄小鼠的ConA诱导的淋巴细胞增殖反应降低26.5%，此三种多糖在浓度为1和2.5μg/ml时，均可使之显著恢复。最近，我们以同种异型抗原刺激的混合淋巴细胞培养反应(MLR)为模型，观察灵芝多糖GL—B对细胞免疫功能的影响。结果证明，GL—B(50～800μg/ml)可浓度依赖性的促进小鼠的MLR，并可反转小剂量环孢霉素A(0.01μg/ml)对MLR的抑制作用，并使之恢复正常。当环孢霉素A的浓度增至0.1～1μg/ml时，对MLR的抑制作用达80%，对此GL—B几无拮抗作用。GL—B亦可部分拮抗氢化可的松对MLR的抑制作用。抗肿瘤药氟尿嘧啶、丝裂霉素C和阿糖胞苷均可明显抑制MLR，GL—B可剂量依赖性地拮抗这些药物对MLR的抑制作用(表7-3)。同样，我们亦发现，24月龄小鼠的MLR较3月龄小鼠降低35.3%，GL—B可使之恢复(表7-4)。
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表7-3 灵芝多糖GL—B对丝裂霉素C、氟尿嘧啶和阿糖胞苷
所致混合淋巴细胞反应(MLR)抑制的恢复作用
组别
药物浓度(μg/ml)
[3H]TdR摄取(dpm)
对照
-
31361±4242
丝裂霉素C(抑制对照)
0.01
16842±1266+++
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丝裂霉素C+GL-B
0.01+50
19003±978**
丝裂霉素C+GL-B
0.01+100
24209±1505***
丝裂霉素C+GL-B
0.01+200
27606±2372***
对照
-
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28946±1527
5-氟尿嘧啶(抑制对照)
0.1
16250±1614+++
5-氟尿嘧啶+GL-B
0.1+50
20875±1750***
5-氟尿嘧啶+GL-B
0.1+100
26201±2130***
5-氟尿嘧啶+GL-B
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0.1+200
28823±1728***
对照
-
23678±1348
阿糖胞苷(抑制对照)
0.01
13092±1973+++
阿糖胞苷+GL-B
0.01+50
17658±2420**
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阿糖胞苷+GL-B
0.01+100
24380±2949***
阿糖胞苷+GL-B
0.01+200
30030±4649***
x-±s,n=6,+++P<0.001与对照比较, **P<0.01,***P<0.001与抑制对照比较。
表7-4 灵芝多糖GL—B对24月龄老年小鼠的同种
异型抗原刺激的混合淋巴细胞反应(MLR)的影响
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组别
鼠龄(月)
浓度(μg/ml)
[3H]TdR摄取×10-3(dpm)
年轻对照
3
-
45.4±2.1
老年对照
24
-
19.4±3.8+++
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GL-B
24
50
34.8±4.5
GL-B
24
100
36.1±2.6***
GL-B
24
200
40.2±4.2***
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x-±s,n=6,+++P<0.001与年轻对照比较,**P<0.01,***P<0.001与老年对照比较。
我们还采用抗L3T4及抗Lyt2单克隆抗体和间接荧光免疫法检测了混合淋巴细胞培养中T细胞亚类的数量。结果指出，GL—B(50～200μg/ml)可显著增加其中总T细胞的回收量以及L3T4+细胞和Lyt2+细胞的回收量，Lyt2+细胞的百分比亦明显增加。空斑减少试验还显示，GL—B可显著增强细胞毒T细胞(CTL)的功能，在浓度为200μg/ml时，其杀伤活性增加100%。小鼠L3T4+细胞属于T辅助细胞(Th)，这一结果说明，GL—B能促使Th细胞增殖。而T抑制细胞(Ts)和CTL均带有Lyt2+抗原，故GL—B促进Lyt2+细胞增殖的确切含义尚待研究，但由于我们又观察到GL—B可增强CTL的杀伤活性，表明GL—B增加的Lyt2+细胞中，至少有一部分属于CTL细胞。
体外试验亦证明，树舌多糖可增强ConA刺激的小鼠脾细胞增殖反应。薄芝液对ConA刺激的脾细胞增殖反应的影响视所用浓度而异，低浓度(1.5μg/ml)时有促进作用，高浓度(25μg/ml)则抑制之。
灵芝蛋白LZ—8在体外对小鼠脾细胞有强大的促有丝分裂作用，最适刺激浓度为3.3μg/ml。LZ—8尚可增强ConA和LPS的促有丝分裂作用。, 百拇医药