低温灌注、深低温冷冻对同种异体肢体移植排斥反应的影响
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摘要:目的建立同种异体肢体移植动物模型,研究低温灌注、深低温冷冻供肢对同种异体肢体移植排斥反应的影响。方法大鼠48只(Wistar大鼠16只,SD大鼠32只),随机分为4组,各4只Wistar大鼠(供体),8只SD大鼠(受体)。A组:供体肢体离断后移植到受体;B组:处理同A组,术后加用环孢素A(CsA);C组:处理同A组,供体经深低温冷藏处理;D组:处理同C组,术后给予CsA。术后第2、4、6、8周摄X线片,第3周取外周血检测自发淋巴母细胞生成率,第8周取外周血检测白细胞介素2(IL2)。结果异体肢体移植32例,成功29例。4组移植肢体存活时间分别为：A组(8.0±2.2)d,B组(39.2±0.8)d,C组(14.0±4.2)d,D组(46.2±0.6)d。B、C、D组存活时间与A组比较有统计学意义(P<0.05)。B、D组术后6周可达骨性连接,而A、C组仅1例达骨连接且明显延迟。术后3周B、C、D组自发淋巴母细胞生成率与未移植鼠比值均<2。术后8周外周血IL2活性,A组最高,C组次之,B、C、D组与A组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论低温灌注、深低温冷冻和CsA可协同抑制同种异体肢体移植的排斥反应,对急性排斥反应有显著的防治作用。关键词:移植,同种; 冷冻; 低温保藏; 移植物排斥; 四肢; 大鼠
肢体内大块组织乃至整个肢体缺失属于复合组织缺失,对其治疗是医学界的难题之一。随着临床异体手移植取得初步成功,有关肢体移植的动物实验及基础研究也相应地得到发展\[12\]。笔者利用深低温冷冻保存供肢的同种异体肢体移植,建立同种异体肢体移植动物模型,研究深低温冷冻供肢对异体肢体移植排斥反应的影响。
1材料与方法
1.1动物与分组健康清洁级雄性大鼠48只,体质量250~350 g,包括Wistar大鼠16只和SD大鼠32只\[中国科学院上海实验动物中心,许可证号:SCXK(沪)20020010\]。随机分为4组,各有Wistar大鼠(供体)4只,SD大鼠(受体)8只。A组:Wistar大鼠肢体离断后移植到SD大鼠;B组:处理同A组,术后加用免疫抑制剂环孢素A(CsA);C组:处理同A组,供体经深低温冷藏处理;D组:处理同C组,术后给予CsA。供体大鼠截取移植肢体后即处死。
1.2手术方法\[3\]
1.2.1麻醉1%戊巴比妥钠腹腔注射(40~50 mg/kg)麻醉,供体供肢及受体相应肢体手术区域以8%硫化钠脱毛剂脱毛。
1.2.2供肢处理双目手术显微镜下手术。从供体大腿中段截取供肢后立即用4 ℃低温保存液UW液经股动脉冲洗供肢内的残血,至股静脉流出的液体变淡为止 ......
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