高效液相色谱法测定1,3丙二醇发酵液中的有机酸
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摘要 采用高效液相色谱法在Kromasil C18色谱柱(5 μm,250 mm×46 mm i.d.)上测定了1,3丙二醇发酵液中的有机酸，流动相为02%(V/V)磷酸和乙腈混合溶液(体积比为965∶35)，发酵液经氯仿处理后直接分离定量，8 min内可将发酵液中的甲酸、乳酸、乙酸、琥珀酸、柠檬酸及延胡索酸完全分离定量。流动相流速为10 mL/min，紫外检测波长为214 nm，柱温为20℃。方法的回收率为977%~1005%;RSD为098%~235%。实验结果表明，该法是测定发酵液中有机酸的快速、有效的定量分析方法。关键词 反相高效液相色谱，有机酸，1,3丙二醇，发酵液
1 引言
1,3丙二醇(1,3PD)可应用于油墨、涂料、抗冻剂、保护剂以及医药等行业，可以作为生产优质的聚酯和聚氨酯的单体，因此具有广阔的应用前景[1]。
在1,3PD发酵过程中，生成1,3PD的同时还有其它一些有机酸生成。对有机酸的分析可以比较直观地了解菌种代谢途径，对于确定菌体内的代谢通量分布、从代谢工程角度实现菌体生理代谢网络途径的优化或阻遏以改变代谢流、发酵过程的优化控制以及1,3PD高产基因工程菌株的构建都具有重要意义。用于分析有机酸的方法有色谱法、薄层色谱法[2]和气相色谱法[3]，但这些方法都要进行衍生化处理，操作麻烦。而高效液相色谱法(HPLC)分析有机酸不仅简单快速，而且选择性好、准确度高[4]。Blanco等[5]采用液相色谱法分析酒中有机酸;Ding[6]和牟世芬[7]用离子色谱法测定了酒和饮料中的有机酸;Caccamo等[8]采用衍生化液相色谱法分析酒中有机酸;Daood等[9]以四丁基氢氧化铵作离子对试剂，分析了果汁和蔬菜中的有机酸。衍生化法和添加离子对试剂都使操作变得繁琐，而专门的有机酸柱价格又较昂贵。白冬梅等[10]采用Eclipse XDBC8柱，对琥珀酸发酵液中有机酸进行了测定，45 min可以把6种混合酸标样分离定量，分析速度快，重现性也较好。但从得到的标准样的色谱图可以看出，峰拖尾严重而且未能达到基线分离，甲酸和苹果酸的出峰时间都在2 min内 ......
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