水飞蓟素药学研究进展综述(2)
3制剂研究
水飞蓟素目前剂型有口服制剂:水飞蓟素片、益肝灵片、水飞蓟宾卵磷脂复合物硬胶囊。商品名有:利肝隆,利加隆,益肝灵等。注射剂:主要是做成水飞蓟宾衍生物,如:葡-N?甲胺盐,二乙胺盐,N,二甲基甘氨酸盐,玻泪酸酶铀盐等或制成包合物再做成水溶性注射剂。在我国,生产水飞蓟素制剂有几十年的历史,常见的剂型主要为片剂、胶囊,现在尚有德国马博士制药厂生产的水飞蓟素制剂在我国销售。这些制剂主要为水飞蓟素提取物或游离水飞蓟宾,在其释放度和生物利用度试验中发现结果均不理想。有的制剂根本不能有效崩解,影响释放。李钢等对国产与进口的水飞蓟素片的溶出度实验结果也证明了这一点。[11]
由于水飞蓟素难溶于水及一般有机溶剂,口服吸收差，其生物利用度较低,从而影响了其临床疗效。为改善其生物利用度，国内外药学工作者作了大量的工作。改善难溶性药物吸收的措施一般有超细粉碎、成盐，添加助溶剂等。近年来采用制成环糊精包合物、固体分散体，合成磷脂复合物，制成不同剂型等方法，研究表明，溶出度及生物利用度大大提高。
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3.1成盐、成酯制成注射剂
国外对水飞蓟宾一葡甲胺盐、水飞蓟宾?二偏琥珀酸酯钠盐、水飞蓟宾?环糊精、水飞蓟宾?磷酸盐、水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复盐等的研究报道较多。主要是水飞蓟宾磷脂酰胆碱复盐,是意大利Imvernidellbefra公司开发的脂溶性制剂,并于1985年7月申请欧州专利,同时也在美国、日本等十几个国家申请专利。它不仅改善了水飞蓟宾的生物利用度,提高了疗效,而且还具有清除自由基、抗脂质过氧化等多种作用,因而应用范围较广。国内研制的水飞蓟素复合物较局限仅限于水飞蓟素水溶性衍生物如水飞蓟宾.葡甲脂盐、水飞蓟宾?邻苯二甲酸单酸纳盐的注射剂[1]。王鸿辰[2]等研究了水飞蓟素在非水溶媒、复合溶媒中的溶解性能。结果表明：聚乙二醇-乙醇-水(5：2：3)混合溶媒中可溶解16mg/ml，可作为注射剂的溶媒。但制成的注射液加水稀释至含水量占75%以上时即出现浑浊，因此只可作肌肉注射，不宜静脉注射。
3.2固体分散技术的应用
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固体分散技术可通过增大药物的表面积，使药物较快溶解，药物在固体分散体中具较大的表面积，载体又可抑制药物聚集及对药物有抑晶性等，从而大大提高溶解度和溶出速率，促进药物的溶出和吸收。
在固体分散体载体的应用中，最常用的水溶性载体为PEG4000和PEG6000，他们的熔点低，毒性小。在肠胃道易吸收，不干扰药物的含量测定，能够显著增加药物的溶出速率，提高药物的生物利用度。缪海均等[8]对水飞蓟宾固体分散体胶囊的人体生物利用度进行了测定，比较了水飞蓟宾固体分散体胶囊与片剂的药代动力学参数，胶囊的Cmax和AUC0-1值较大。对两种制剂的Cmax和AUC0-1、Tmax经T检验和方差分析，均有显著性差异(P小于0.01)，以片剂为标准，胶囊剂的相对生物利用度为F=219%，吸收优于片剂。
固体分散技术是近几十年发展起来的制剂新技术,是指制备制剂时固体药物,特别是难溶性药物的分散技术，该技术目前主要有药物微粉化,制成粉状溶液或溶剂沉淀物,制成固体分散体三大类。国内药学工作者采用不同的水溶性载体将水飞蓟素制成固体分散体,并对增溶方法进行了比较研究。
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陈大为等[12-14]曾分别制备水飞蓟素PEG熔融物、PVP共沉淀物、环状糊精包合物及分别制备了水飞蓟素与可压性淀粉、微晶纤维素、β-环状糊精的研磨混合物,并与国产水飞蓟素片及德国的利肝隆片进行比较,其溶解度与一定时间的最大溶出量均有了30-60倍数的提高。通过紫外、红外及薄层扫描等多种分析方法的鉴定,固体分散体及研磨混合物中水飞蓟素的结构未发生改变。
邓莉等[15]以尿素、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、泊洛沙姆188等三种载体,用熔融法和共沉淀法制备水飞蓟宾固体分散体,并进行差热分析、X?射线粉末衍射分析以鉴别药物在载体中的存在状态,最后进行了体外溶出研究。结果表明水飞蓟宾在PVP中以无定型存在,在泊洛沙姆188中以微细结晶存在,在尿素中大部分仍以晶体形式存在,少量以分子状态存在。溶出研究结果表明,泊洛沙姆188作载体的水飞蓟宾固体分散体的溶解度最大,溶出速度最快。
朱铉等[16]研究了载体与表面活性剂对水飞蓟素固体分散体中水飞蓟宾溶出速度的影响,得出了水飞蓟素以聚乙二醇为载体的固体分散体提高水飞蓟宾的溶出速率的结论。
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汤秀珍等[17]以聚乙烯吡咯烷酮(PVP),聚乙二醇6000,聚乙二醇6000与吐温-80混合载体,制备固体分散体:以β-CD、HP-β-CD制备包合物,测定溶解度及体外溶出速度。结果:水中溶解度PVP固体分散体大于包合物,载体比例越大,药物溶出愈快:比例相同时,PVP固体分散体溶出最快。结论:PVPK30作为水飞前素团体分散体的载体,载药量大,增溶效果显著。
李风前等[18]研究了PEG6000固体分散体系对难溶性药物增溶的相关晶格变化规律。结果,与原药比较,固体分散体中的药物的释放速率明显增大,PEG6000固体分散体系对难溶性药物水飞蓟素具有显著的增溶作用。X-射线多晶衍射分析表明,PEG6000及药物在国体分散体中的晶格点与面间距离、衍射峰位移及相对强度等发生了规律性变化,药物和载体间无相互作用。结论:PEG6000固体分散体的增溶作用与载体材料和药物的晶格参数的改变密切相关。
3.3水飞蓟素磷脂复合物
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从固体制剂角度来看，磷脂复合物为一种较为特殊的固体分散体，他有固定的熔点，是一种其化学本质较稳定，不同于药物和磷脂的分子化合物(络合物)，该类化合物随磷脂种类及药物磷脂比例的不同而不同，一个磷脂分子可与不同数目的药物分子结合。复合物光谱学特征推断，药物与磷脂的极性基团部分发生了较强的相互作用，抑制了分子中单链的自由转动，而磷脂的两个长脂肪酸链不参与复合反应，可自由移动，包裹了磷脂的极性部分形成一个亲脂性的表面，使复合物表现出较强的脂溶性。它改变了药物的理化性质，使药物的脂溶性增加，水溶性减少。促进药物分子与细胞膜结合而促进吸收，提高药物的生物利用度[19]。
张光军等对水飞蓟宾-卵磷脂复合物理化性质进行了研究，通过红外光谱和磷核磁共振波谱进行分析，水飞蓟宾和卵磷脂分子中均含有多个碳原子，其碳核磁共振谱非常复杂，不易识别，而水飞蓟宾中不含磷原子，卵磷脂中只有一个磷原子，对照卵磷脂和水飞蓟宾的磷核磁共振图谱，即可判断水飞蓟宾与卵磷脂在磷酸根基团上是否生成新的化学键。作者认为，水飞蓟宾和卵磷脂在适宜的条件下制备的是一种分子型复合物，水飞蓟宾与卵磷脂之间没有新的共价键形成，没有新的化合物形成，故水飞蓟宾及卵磷脂自身化学性质在体内不会改变。该复合物提高了水飞蓟宾的脂溶性，故推测可以提高血药浓度和生物利用度[20]。
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对水飞蓟素磷脂复合物的研究较深入，文献报道较多[19]，用四氯化碳、鬼笔碱处理大鼠，造成肝损伤的病理模型，灌胃给予水飞蓟素复合物，结果显示AST和ALT明显降低，而相应的水飞蓟素仅引起两种酶的轻微下降。究其原因，除磷脂复合物改善药物的胃肠道吸收外，可能卵磷脂稳定肝细胞膜与水飞蓟素抗肝活性产生了协同效应。
DanieleSavio等[2]研究了水飞蓟素与卵磷脂1：2比例制成的软胶囊与其同比例混合的硬胶囊之间的差异，结果表明，软胶囊的Cmax为硬胶囊的三倍，AUC-1是硬胶囊的2倍，Tmax也明显缩短。Gatt等采用交换液相色谱法，分别测定了健康志愿者口服水飞蓟素及其磷脂复合物的血浆药物浓度，结果表明，磷脂复合物的达峰时间较长，峰浓度较高，消除半衰期快，曲线下面积是游离药物的3倍。国内学者[21-22]采用HPLC法对家兔体内生物利用度进行了研究，结果与Gatt等所测定的基本一致。Morazzoni P等[23]研究了大鼠体内口服给药药物动力学，结果表明：给予复合物后，水飞蓟素在尿液与胆汁中的回收率较给予水飞蓟素的有显著提高，分别从0..032%和0.001%提高到3.26%和3.73%，血浆中水飞蓟素的浓度也大大高于后者。可见磷脂复合物可促进水飞蓟素的吸收，提高血浆和胆汁中药物的浓度，从而提高了生物利用度。
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4.小结
4.1水飞蓟素的化学成分基本清楚，但对于各异构体的分离还有待进一步研究。
4.2HPLC法进行含量测定时，以水飞蓟宾计算水飞蓟宾及异水飞蓟宾的量基本可行，但尚需进一步探讨。质量控制以总黄酮和水飞蓟宾的含量测定进行控制。
4.3现阶段新药申报中存在的问题：主要是改剂型品种、申请已有国家标准的品种，在研究中制剂的剂量折算应以水飞蓟素总黄酮含量进行折算。辅料用量、加入的分散剂选择缺乏比较研究依据。对药品的溶出及生物利用度是否有影响，安全性如何应提供依据。
4.4目前国内已有磷脂复合物、固体分散技术应用于水飞蓟素制剂的研究中，制成滴丸剂、软胶囊剂、胶囊剂等。相信随着制剂技术的发展、新辅料、复合型辅料、表面活性剂的应用，将有望解决水飞蓟素水溶性低而影响疗效的缺点，充分利用我国大量种植的水飞蓟资源，使水飞蓟素更好的服务于人类，有更广阔的应用前景。, http://www.100md.com
水飞蓟素目前剂型有口服制剂:水飞蓟素片、益肝灵片、水飞蓟宾卵磷脂复合物硬胶囊。商品名有:利肝隆,利加隆,益肝灵等。注射剂:主要是做成水飞蓟宾衍生物,如:葡-N?甲胺盐,二乙胺盐,N,二甲基甘氨酸盐,玻泪酸酶铀盐等或制成包合物再做成水溶性注射剂。在我国,生产水飞蓟素制剂有几十年的历史,常见的剂型主要为片剂、胶囊,现在尚有德国马博士制药厂生产的水飞蓟素制剂在我国销售。这些制剂主要为水飞蓟素提取物或游离水飞蓟宾,在其释放度和生物利用度试验中发现结果均不理想。有的制剂根本不能有效崩解,影响释放。李钢等对国产与进口的水飞蓟素片的溶出度实验结果也证明了这一点。[11]
由于水飞蓟素难溶于水及一般有机溶剂,口服吸收差，其生物利用度较低,从而影响了其临床疗效。为改善其生物利用度，国内外药学工作者作了大量的工作。改善难溶性药物吸收的措施一般有超细粉碎、成盐，添加助溶剂等。近年来采用制成环糊精包合物、固体分散体，合成磷脂复合物，制成不同剂型等方法，研究表明，溶出度及生物利用度大大提高。
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3.1成盐、成酯制成注射剂
国外对水飞蓟宾一葡甲胺盐、水飞蓟宾?二偏琥珀酸酯钠盐、水飞蓟宾?环糊精、水飞蓟宾?磷酸盐、水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复盐等的研究报道较多。主要是水飞蓟宾磷脂酰胆碱复盐,是意大利Imvernidellbefra公司开发的脂溶性制剂,并于1985年7月申请欧州专利,同时也在美国、日本等十几个国家申请专利。它不仅改善了水飞蓟宾的生物利用度,提高了疗效,而且还具有清除自由基、抗脂质过氧化等多种作用,因而应用范围较广。国内研制的水飞蓟素复合物较局限仅限于水飞蓟素水溶性衍生物如水飞蓟宾.葡甲脂盐、水飞蓟宾?邻苯二甲酸单酸纳盐的注射剂[1]。王鸿辰[2]等研究了水飞蓟素在非水溶媒、复合溶媒中的溶解性能。结果表明：聚乙二醇-乙醇-水(5：2：3)混合溶媒中可溶解16mg/ml，可作为注射剂的溶媒。但制成的注射液加水稀释至含水量占75%以上时即出现浑浊，因此只可作肌肉注射，不宜静脉注射。
3.2固体分散技术的应用
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固体分散技术可通过增大药物的表面积，使药物较快溶解，药物在固体分散体中具较大的表面积，载体又可抑制药物聚集及对药物有抑晶性等，从而大大提高溶解度和溶出速率，促进药物的溶出和吸收。
在固体分散体载体的应用中，最常用的水溶性载体为PEG4000和PEG6000，他们的熔点低，毒性小。在肠胃道易吸收，不干扰药物的含量测定，能够显著增加药物的溶出速率，提高药物的生物利用度。缪海均等[8]对水飞蓟宾固体分散体胶囊的人体生物利用度进行了测定，比较了水飞蓟宾固体分散体胶囊与片剂的药代动力学参数，胶囊的Cmax和AUC0-1值较大。对两种制剂的Cmax和AUC0-1、Tmax经T检验和方差分析，均有显著性差异(P小于0.01)，以片剂为标准，胶囊剂的相对生物利用度为F=219%，吸收优于片剂。
固体分散技术是近几十年发展起来的制剂新技术,是指制备制剂时固体药物,特别是难溶性药物的分散技术，该技术目前主要有药物微粉化,制成粉状溶液或溶剂沉淀物,制成固体分散体三大类。国内药学工作者采用不同的水溶性载体将水飞蓟素制成固体分散体,并对增溶方法进行了比较研究。
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陈大为等[12-14]曾分别制备水飞蓟素PEG熔融物、PVP共沉淀物、环状糊精包合物及分别制备了水飞蓟素与可压性淀粉、微晶纤维素、β-环状糊精的研磨混合物,并与国产水飞蓟素片及德国的利肝隆片进行比较,其溶解度与一定时间的最大溶出量均有了30-60倍数的提高。通过紫外、红外及薄层扫描等多种分析方法的鉴定,固体分散体及研磨混合物中水飞蓟素的结构未发生改变。
邓莉等[15]以尿素、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、泊洛沙姆188等三种载体,用熔融法和共沉淀法制备水飞蓟宾固体分散体,并进行差热分析、X?射线粉末衍射分析以鉴别药物在载体中的存在状态,最后进行了体外溶出研究。结果表明水飞蓟宾在PVP中以无定型存在,在泊洛沙姆188中以微细结晶存在,在尿素中大部分仍以晶体形式存在,少量以分子状态存在。溶出研究结果表明,泊洛沙姆188作载体的水飞蓟宾固体分散体的溶解度最大,溶出速度最快。
朱铉等[16]研究了载体与表面活性剂对水飞蓟素固体分散体中水飞蓟宾溶出速度的影响,得出了水飞蓟素以聚乙二醇为载体的固体分散体提高水飞蓟宾的溶出速率的结论。
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汤秀珍等[17]以聚乙烯吡咯烷酮(PVP),聚乙二醇6000,聚乙二醇6000与吐温-80混合载体,制备固体分散体:以β-CD、HP-β-CD制备包合物,测定溶解度及体外溶出速度。结果:水中溶解度PVP固体分散体大于包合物,载体比例越大,药物溶出愈快:比例相同时,PVP固体分散体溶出最快。结论:PVPK30作为水飞前素团体分散体的载体,载药量大,增溶效果显著。
李风前等[18]研究了PEG6000固体分散体系对难溶性药物增溶的相关晶格变化规律。结果,与原药比较,固体分散体中的药物的释放速率明显增大,PEG6000固体分散体系对难溶性药物水飞蓟素具有显著的增溶作用。X-射线多晶衍射分析表明,PEG6000及药物在国体分散体中的晶格点与面间距离、衍射峰位移及相对强度等发生了规律性变化,药物和载体间无相互作用。结论:PEG6000固体分散体的增溶作用与载体材料和药物的晶格参数的改变密切相关。
3.3水飞蓟素磷脂复合物
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从固体制剂角度来看，磷脂复合物为一种较为特殊的固体分散体，他有固定的熔点，是一种其化学本质较稳定，不同于药物和磷脂的分子化合物(络合物)，该类化合物随磷脂种类及药物磷脂比例的不同而不同，一个磷脂分子可与不同数目的药物分子结合。复合物光谱学特征推断，药物与磷脂的极性基团部分发生了较强的相互作用，抑制了分子中单链的自由转动，而磷脂的两个长脂肪酸链不参与复合反应，可自由移动，包裹了磷脂的极性部分形成一个亲脂性的表面，使复合物表现出较强的脂溶性。它改变了药物的理化性质，使药物的脂溶性增加，水溶性减少。促进药物分子与细胞膜结合而促进吸收，提高药物的生物利用度[19]。
张光军等对水飞蓟宾-卵磷脂复合物理化性质进行了研究，通过红外光谱和磷核磁共振波谱进行分析，水飞蓟宾和卵磷脂分子中均含有多个碳原子，其碳核磁共振谱非常复杂，不易识别，而水飞蓟宾中不含磷原子，卵磷脂中只有一个磷原子，对照卵磷脂和水飞蓟宾的磷核磁共振图谱，即可判断水飞蓟宾与卵磷脂在磷酸根基团上是否生成新的化学键。作者认为，水飞蓟宾和卵磷脂在适宜的条件下制备的是一种分子型复合物，水飞蓟宾与卵磷脂之间没有新的共价键形成，没有新的化合物形成，故水飞蓟宾及卵磷脂自身化学性质在体内不会改变。该复合物提高了水飞蓟宾的脂溶性，故推测可以提高血药浓度和生物利用度[20]。
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对水飞蓟素磷脂复合物的研究较深入，文献报道较多[19]，用四氯化碳、鬼笔碱处理大鼠，造成肝损伤的病理模型，灌胃给予水飞蓟素复合物，结果显示AST和ALT明显降低，而相应的水飞蓟素仅引起两种酶的轻微下降。究其原因，除磷脂复合物改善药物的胃肠道吸收外，可能卵磷脂稳定肝细胞膜与水飞蓟素抗肝活性产生了协同效应。
DanieleSavio等[2]研究了水飞蓟素与卵磷脂1：2比例制成的软胶囊与其同比例混合的硬胶囊之间的差异，结果表明，软胶囊的Cmax为硬胶囊的三倍，AUC-1是硬胶囊的2倍，Tmax也明显缩短。Gatt等采用交换液相色谱法，分别测定了健康志愿者口服水飞蓟素及其磷脂复合物的血浆药物浓度，结果表明，磷脂复合物的达峰时间较长，峰浓度较高，消除半衰期快，曲线下面积是游离药物的3倍。国内学者[21-22]采用HPLC法对家兔体内生物利用度进行了研究，结果与Gatt等所测定的基本一致。Morazzoni P等[23]研究了大鼠体内口服给药药物动力学，结果表明：给予复合物后，水飞蓟素在尿液与胆汁中的回收率较给予水飞蓟素的有显著提高，分别从0..032%和0.001%提高到3.26%和3.73%，血浆中水飞蓟素的浓度也大大高于后者。可见磷脂复合物可促进水飞蓟素的吸收，提高血浆和胆汁中药物的浓度，从而提高了生物利用度。
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4.小结
4.1水飞蓟素的化学成分基本清楚，但对于各异构体的分离还有待进一步研究。
4.2HPLC法进行含量测定时，以水飞蓟宾计算水飞蓟宾及异水飞蓟宾的量基本可行，但尚需进一步探讨。质量控制以总黄酮和水飞蓟宾的含量测定进行控制。
4.3现阶段新药申报中存在的问题：主要是改剂型品种、申请已有国家标准的品种，在研究中制剂的剂量折算应以水飞蓟素总黄酮含量进行折算。辅料用量、加入的分散剂选择缺乏比较研究依据。对药品的溶出及生物利用度是否有影响，安全性如何应提供依据。
4.4目前国内已有磷脂复合物、固体分散技术应用于水飞蓟素制剂的研究中，制成滴丸剂、软胶囊剂、胶囊剂等。相信随着制剂技术的发展、新辅料、复合型辅料、表面活性剂的应用，将有望解决水飞蓟素水溶性低而影响疗效的缺点，充分利用我国大量种植的水飞蓟资源，使水飞蓟素更好的服务于人类，有更广阔的应用前景。, http://www.100md.com