缺口末端标记技术；细胞调亡；组织切片____

改进dUTP缺口末端标记技术法的操作体会

http://www.100md.com 《实用医技杂志》 2007年第1期

缺口末端标记技术；细胞调亡；组织切片,,],缺口末端标记技术；细胞调亡；组织切片,[关键词]缺口末端标记技术；细胞调亡；组织切片,1前期处理,2冲洗,3非特异性染色,4蛋白酶K的消化时间组织,5TUNEL反应液,6POD转换液,7显色笔者,8复染,9封

     [摘要] 通过对多种石蜡组织切片运用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)法检测细胞凋亡，在进行前期处理、冲洗、减少非特异性染色、蛋白酶K消化时间、显色、复染、封片等方面总结了一定经验。

    [关键词] 缺口末端标记技术；细胞调亡；组织切片

    末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(Terminal deoxyribonucleic transferasemediated dUTP nick endlabeling,TUNEL)是依据凋亡细胞内内源性核酸内切酶被激活而将自身染色体DNA切断成缺口或含180 bp～200 bp的3’OH末端片段这一特点，利用末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)将标有标记物(如地高辛、生物素或荧光素等)的脱氧核苷酸(如 dUTP)转移到3’OH末端，再进行显色显示凋亡细胞。由于正常细胞或繁殖细胞没有DNA断裂，亦无3’OH末端，故不被显色。TUNEL法检测细胞凋亡是目前国内外学者所广泛采用的一种先进方法，但不易掌握。我们在经过反复摸索后，成功应用该法检测了多种石蜡组织切片的细胞凋亡。现谈谈在TUNEL法操作过程中需要注意的一些环节。

     1 前期处理

    为确保离体组织的凋亡检测效果，值得高度重视的是离体组织固定须在组织离体后15 min内进行，否则组织发生自溶就会出现DNA的断裂 ......

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