复方利咽润喉颗粒质量标准研究
摘要：目的建立高效液相色谱-蒸发光散色(HPLCELSD)法测定复方利咽润喉颗粒中熊果酸的含量。方法采用汉邦ODS C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱；柱温:30℃；流动相:甲醇水冰醋酸(83∶17∶0.1)；流速:1.0 ml/min；检测器：Alltech ELSD2000蒸发光散射检测器(漂移管温度:72℃，气体流量：1.9 L/min)。结果熊果酸在4.227~42.27 μg范围内呈良好线性关系，回收率为98.54%，RSD为2.12%。结论该方法具有良好的精密度和重现性，结果准确可靠，是测定熊果酸含量的较好方法。
关键词：熊果酸； 复方利咽润喉颗粒； 高效液相色谱蒸发光散色法； 山楂
复方利咽润喉颗粒由山楂等多味中药经加工制成的中药复方制剂。具有清热利咽、宽胸清咽等功能，临床上用于外感风热所致的咽喉发干、声音嘶哑及急慢性咽炎、扁桃体炎见上述证候者，常用于保护声带作用。 在处方组成固定，原料稳定，工艺稳定的前提下，本文对该制剂中熊果酸[1]的含量进行了测定，作为质量标准的研究内容。
1 仪器与试剂
1.1 仪器Waters高效液相色谱仪，Alliance 2695四元泵及自动进样系统、柱温箱、Empower色谱工作站；Alltech ELSD 2000 检测器； Millipore MilliQ纯水器； METTLER万分之一及十万分之一电子天平；GA10B无油低噪音空气源。
1.2 试药复方利咽润喉颗粒(江苏省中西医结合医院提供，批号050320，050322，050324)；熊果酸(中国药品生物制品检定所提供，批号110742200314)，硅胶G(青岛海洋化工有限公司)，甲醇为分析醇，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件和系统适用性实验色谱柱：Lichrospher C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱温30℃，流动相：甲醇水冰醋酸(83∶17∶0.1)，流速1.0 ml/min蒸发光散射检测法检测，漂移管温度72℃，气体流速1.9 L/min，进样量20 μl。在此条件下,供试品溶液中熊果酸与相邻成分达到基线分离,分离度大于1.5,理论板数以熊果酸峰计可达10 000。
2.2 对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品适量，加甲醇溶解制成每毫升含1.409 mg的溶液,作为对照品溶液。
2.3 标准曲线绘制精密吸取熊果酸对照品溶液( 1.409 mg/ml)3.0，5.0，10.0，15.0，20.0，30.0 μl，注入液相色谱仪，测定其峰面积，以考察在选定的HPLC条件下熊果酸线性范围。以进样量的常用对数值作为横坐标,峰面积的常用对数值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：Y= 1.642 6X+ 4.056 4，r= 0.999 6。
2.4 供试品溶液的制备取复方利咽润喉颗粒5 g，研细，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，超声提取30 min，放冷，滤液过滤，残渣用少量甲醇洗，合并滤液，蒸干，甲醇溶解并定容至10 ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取滤液，即得。
2.5 阴性对照液的制备按处方比例称取除去山楂的其他药材适量，依照复方利咽润喉颗粒的制备工艺和供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，依法测定。结果阴性样品在熊果酸相应的保留时间无干扰。见图1。
a供试品 b对照品 c阴性对照溶液
图1 HPLC色谱图(略)
2.6 精密度实验按选定的HPLC条件下以1.409 mg/ml的熊果酸对照品溶液连续进样6次，10 μl/次，以考察仪器的精密度，RSD为2.15%。
2.7 重复性实验平行提取5份样品，在所拟订色谱条件下分别进样20 μl，测定，计算结果熊果酸含量为 0.449 mg/g，RSD(%)为2.64%。
2.8 稳定性实验对同一供试品溶液每隔2 h进样1次，依法测定，结果表明供试品溶液在8 h内稳定，测得熊果酸含量RSD为 3.03%。
2.9 回收率实验采用加样回收法，取已知含量(0.449 mg/g)的样品适量，分别加入熊果酸对照品(1.106 mg/ml)1.0 ml，按上述色谱条件，计算回收率。结果见表1。
表1 加样回收率实验结果(略)
2.10 样品含量测定分别取不同批号的本品各2份，精密称定，按供试品制备方法制备测定,计算结果取平均值。结果见表2。
表2 样品含量测定结果(略)
3 讨论
3.1 作者首先比较了甲醇、乙醚、醋酸乙酯对样品中熊果酸含量的影响，结果测得样品含量分别为0.42，0.21，0.23 mg/g，结果表明乙醚，醋酸乙酯提取不完全，故选择甲醇为提取溶媒。
3.2 随后比较了超声时间对熊果酸提取的影响，分别选择的超声时间为15，30，45 ，60 min，结果测得样品含量为0.36，0.41，0.40，0.41 mg/g，说明超声提取30 min后熊果酸不再增加，故选择超声30 min。
3.3 熊果酸与齐墩果酸在紫外末端吸收很难分离较好[2~4]，选用紫外检测器，操作条件十分严格，噪音对结果影响很大，而采用ELSD检测器检测，不受外部环境干扰，分离较好，且简便、灵敏，故本方法为复方利咽润喉颗粒中熊果酸含量测定的有效分析方法。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2005.
[2] 王 旭，关 晶.大山楂口嚼片定性定量的研究[J].中国中药杂志，1999，24(11)：675.
[3] 郝润喜，孙晓飞.山楂中熊果酸的高效液相分析[J].药物分析杂志，1994，14(2)：30.
[4] 赵宇新，李曼玲.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定中药及制剂中齐墩果酸和熊果酸的含量[J]. 药物分析杂志，2004，24(2)：167.
(江苏省中医药研究院·江苏省现代中药制剂工程技术研究中心，江苏 南京 210028；江苏大学，江苏 镇江 212013), 百拇医药(孔铭， 钱大玮， 朱玲英， 周军)
关键词：熊果酸； 复方利咽润喉颗粒； 高效液相色谱蒸发光散色法； 山楂
复方利咽润喉颗粒由山楂等多味中药经加工制成的中药复方制剂。具有清热利咽、宽胸清咽等功能，临床上用于外感风热所致的咽喉发干、声音嘶哑及急慢性咽炎、扁桃体炎见上述证候者，常用于保护声带作用。 在处方组成固定，原料稳定，工艺稳定的前提下，本文对该制剂中熊果酸[1]的含量进行了测定，作为质量标准的研究内容。
1 仪器与试剂
1.1 仪器Waters高效液相色谱仪，Alliance 2695四元泵及自动进样系统、柱温箱、Empower色谱工作站；Alltech ELSD 2000 检测器； Millipore MilliQ纯水器； METTLER万分之一及十万分之一电子天平；GA10B无油低噪音空气源。
1.2 试药复方利咽润喉颗粒(江苏省中西医结合医院提供，批号050320，050322，050324)；熊果酸(中国药品生物制品检定所提供，批号110742200314)，硅胶G(青岛海洋化工有限公司)，甲醇为分析醇，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件和系统适用性实验色谱柱：Lichrospher C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱温30℃，流动相：甲醇水冰醋酸(83∶17∶0.1)，流速1.0 ml/min蒸发光散射检测法检测，漂移管温度72℃，气体流速1.9 L/min，进样量20 μl。在此条件下,供试品溶液中熊果酸与相邻成分达到基线分离,分离度大于1.5,理论板数以熊果酸峰计可达10 000。
2.2 对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品适量，加甲醇溶解制成每毫升含1.409 mg的溶液,作为对照品溶液。
2.3 标准曲线绘制精密吸取熊果酸对照品溶液( 1.409 mg/ml)3.0，5.0，10.0，15.0，20.0，30.0 μl，注入液相色谱仪，测定其峰面积，以考察在选定的HPLC条件下熊果酸线性范围。以进样量的常用对数值作为横坐标,峰面积的常用对数值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：Y= 1.642 6X+ 4.056 4，r= 0.999 6。
2.4 供试品溶液的制备取复方利咽润喉颗粒5 g，研细，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，超声提取30 min，放冷，滤液过滤，残渣用少量甲醇洗，合并滤液，蒸干，甲醇溶解并定容至10 ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取滤液，即得。
2.5 阴性对照液的制备按处方比例称取除去山楂的其他药材适量，依照复方利咽润喉颗粒的制备工艺和供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，依法测定。结果阴性样品在熊果酸相应的保留时间无干扰。见图1。
a供试品 b对照品 c阴性对照溶液
图1 HPLC色谱图(略)
2.6 精密度实验按选定的HPLC条件下以1.409 mg/ml的熊果酸对照品溶液连续进样6次，10 μl/次，以考察仪器的精密度，RSD为2.15%。
2.7 重复性实验平行提取5份样品，在所拟订色谱条件下分别进样20 μl，测定，计算结果熊果酸含量为 0.449 mg/g，RSD(%)为2.64%。
2.8 稳定性实验对同一供试品溶液每隔2 h进样1次，依法测定，结果表明供试品溶液在8 h内稳定，测得熊果酸含量RSD为 3.03%。
2.9 回收率实验采用加样回收法，取已知含量(0.449 mg/g)的样品适量，分别加入熊果酸对照品(1.106 mg/ml)1.0 ml，按上述色谱条件，计算回收率。结果见表1。
表1 加样回收率实验结果(略)
2.10 样品含量测定分别取不同批号的本品各2份，精密称定，按供试品制备方法制备测定,计算结果取平均值。结果见表2。
表2 样品含量测定结果(略)
3 讨论
3.1 作者首先比较了甲醇、乙醚、醋酸乙酯对样品中熊果酸含量的影响，结果测得样品含量分别为0.42，0.21，0.23 mg/g，结果表明乙醚，醋酸乙酯提取不完全，故选择甲醇为提取溶媒。
3.2 随后比较了超声时间对熊果酸提取的影响，分别选择的超声时间为15，30，45 ，60 min，结果测得样品含量为0.36，0.41，0.40，0.41 mg/g，说明超声提取30 min后熊果酸不再增加，故选择超声30 min。
3.3 熊果酸与齐墩果酸在紫外末端吸收很难分离较好[2~4]，选用紫外检测器，操作条件十分严格，噪音对结果影响很大，而采用ELSD检测器检测，不受外部环境干扰，分离较好，且简便、灵敏，故本方法为复方利咽润喉颗粒中熊果酸含量测定的有效分析方法。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2005.
[2] 王 旭，关 晶.大山楂口嚼片定性定量的研究[J].中国中药杂志，1999，24(11)：675.
[3] 郝润喜，孙晓飞.山楂中熊果酸的高效液相分析[J].药物分析杂志，1994，14(2)：30.
[4] 赵宇新，李曼玲.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定中药及制剂中齐墩果酸和熊果酸的含量[J]. 药物分析杂志，2004，24(2)：167.
(江苏省中医药研究院·江苏省现代中药制剂工程技术研究中心，江苏 南京 210028；江苏大学，江苏 镇江 212013), 百拇医药(孔铭， 钱大玮， 朱玲英， 周军)