交替三线性分解荧光二阶校正法同时直接测定口服液中氨基酸
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摘要 酪氨酸(TYR)和色氨酸(TRY)的荧光光谱相互重叠，用常规方法难以同时直接测定。本研究将交替三线性分解二阶校正算法与激发发射矩阵荧光法相结合，对氨基酸口服液中共存的酪氨酸和色氨酸进行了同时分辨和直接定量测定，并用加入标准法对结果进行验证，TYR和TRY 的回收率分别为(96.9±2.5)%和(93.2±1.0)%。结果表明，该方法以“数学分离”替代 “化学分离”，其它成分及背景不影响其测定。关键词 交替三线性分解算法，二阶校正，激发发射矩阵荧光法，酪氨酸，色氨酸，氨基酸口服液
1 引言
氨基酸是人体必需的重要物质，也是许多食品及食品强化剂中的重要组分。因此，对氨基酸的快速分析检测具有重要意义。目前常用的氨基酸测定方法有高效液相色谱紫外检测法[1，2]、反向液相色谱质谱法 [3]和毛细管电泳激光诱导荧光检测法 [4，5]等。也可以利用芳香族氨基酸具有内源荧光的特性，直接采用荧光方法进行测定。但是，由于芳香族氨基酸中的酪氨酸(tyrosine)、色氨酸(tryptophan)的荧光光谱相互重叠严重，如不分离则难以进行同时直接测定。若引入化学计量学方法，以“数学分离”替代 “化学分离”，则能实现该复杂成分的快速同时直接测定，使分析成本大为降低。文献报道用Kalman滤波法、偏最小二乘、主成分回归及多元线性回归等方法对该混合体系的荧光光谱进行解析[6～10]。本研究采用交替三线性分解二阶校正算法(ATLD)[11]与激发发射矩阵荧光法(excitationemission matrixspectrofluorimetry, EEMs)相结合,对氨基酸口服液中的酪氨酸和色氨酸含量进行同时直接测定，分析快速，且具有在其它成分及背景干扰共存的情况下，不影响其定量分析的优点。
2 方法原理
2.1 三线性成分模型假设测定的样本数为K,激发波长数为I,发射波长数为J,对于一个收集到的三维响应数阵X ( I×J×K)可满足下面这个三线性成分模型：xijk=N n=1ainbinckn+eijk (i=1,2,…,I; j=1,2,…,J; k=1,2,…,K)(1)其中N表示实际对荧光有贡献的因子数(组分数、背景及共存干扰因子数)；xijk是三维数阵X中的元素(i,j,k), 它表示样本k在激发光谱通道数为i、发射光谱通道数为j时的荧光强度；ckn是相对浓度阵C(K×N)中的元素(k, n)； ain是相对激发光谱阵A(I×N)中的元素(i,n)； bjn是相对发射光谱阵B(J×N) 中的元素(j,n)； eijk是三维残差数阵E(I×J×K) 中的元素(i,j,k) ......
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