安心对垂体后叶素所致实验性心肌缺血的保护作用
摘要：目的观察安心改善心肌缺血的作用。方法采用垂体后叶素(PIT)所致大鼠心肌缺血模型，监测标准Ⅱ导联心电图；小鼠腹腔注射PIT，测定血清脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)以及磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性。结果安心能明显缓解PIT所致大鼠心电图T波的改变。在PIT所致小鼠心肌缺血模型中，安心能增加SOD的活性，降低血清LDH，CK，MDA的活性。结论 安心对PIT所致的心肌缺血有较好的保护作用。
关键词：安心； 心肌缺血； 垂体后叶素
Protective Effect of Anxin on Pituitrin -induced Myocardial Ischemic Injury
WANG Zhiwen, HONG Tie, YANG Zhen
(Department of Pharmacology, Pharmacy College of Jilin University,Changchun, Jilin 130021，China； Academy of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica of Jilin Province ,Changchun 130021，China)
Abstract：ObjectiveTo observe protective effects of Anxin ,a complex of Chinese medicine,on myocardial ischemic injury. MethodsThe electrocardiograph(ECG) was observed in myocardial ischemia rats induced by pituitrin (PIT) through lingual vein;the contents of MDA ,SOD,CK and LDH in serum were assayed,respectively, in myocardial ischemia mice which pituitrin was peritoneal injected.ResultsHigh (2.8 g/kg)，medium (1.4 g/kg) dose of Anxin could obviously relieve the ECG changes caused by pituitrin-induced myocardial ischemia in rats. The threshold dose of Anxin(4 g/kg,2 g/kg)decreased CK,LDH,MDA production and increased SOD activity in the serum of mice.ConclusionAnxin possesses the protective effect on myocardial ischemia induced by PIT.
Key words：Anxin; Myocardial ischemia; Pituitrin
心肌缺血是指供应给心肌的血液不能满足需要时，导致缺氧，代谢改变，功能障碍，甚至心肌结构破坏的病理状态[1]。中药治疗心肌缺血取得一定的进展，其特点为疗效高、毒副作用小。安心是以中医临床实践为基础研制出中药复方制剂，由人参Radix Ginseng，丹参Radix Salviae Miltiorrhizae，苦参Radix Sophorae Flavescentis，玉竹Rhizoma Polygonati Odorati，仙灵脾Herba Epimedii，麦冬Radix Ophiopogonis，泽兰Herba Lycop，葶苈子Semen Lepidh8味中药组成。本研究采用垂体后叶素(PIT)所致动物心肌缺血模型，观察安心改善心肌缺血的作用。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 仪器 BL420E+生物机能实验系统(成都泰盟)；北京普析通用TU1810紫外可见分光光度计。
1.2 受试药物及试剂安心的制备：人参、丹参、苦参、玉竹、仙灵脾、麦冬、泽兰、葶苈子8味中药共同煎煮3次，2 h/次，滤过，合并滤液，浓缩成稠膏，真空低温干燥，粉碎，过筛，成粉，用时配制成所需浓度。阳性对照药：步长稳心颗粒(批号051002)，山东步长制药有限公司产品。试剂：垂体后叶素(PIT)由上海禾丰制药有限公司出品(批号5E20009)。本实验所用脂质过氧化产物丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)以及磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。
1.3 动物及分组
1.3.1 动物20～22 g雄性昆明种小鼠，200～220 g，雄性Wistar大鼠，均购自吉林大学基础医学院实验中心，合格证号：20030001。
1.3.2 分组及给药将小鼠50只，随机分为6组，每组10只。正常组ig等体积蒸馏水；阳性药物组ig步长稳心颗粒溶液(6 g/kg)；受试药物高、中、低剂量组ig安心溶液(4，2，1 g/kg)。各组给药1次/d，共计14 d。将大鼠50只，随机分为5组，每组10只。模型组ig等体积蒸馏水；阳性药物组ig步长稳心颗粒溶液(4.2 g/kg)；受试药物高、中、低剂量组ig安心溶液(2.8，1.4，0.7 g/kg)。各组给药1次/d，共计14 d。
1.4 方法
1.4.1 垂体后叶素导致大鼠T波改变的实验[2]末次给药后30 min，将大鼠用25%乌拉坦(1.2 g/kg)腹腔注射麻醉，仰卧固定，记录标准Ⅱ导联心电图。5 min后舌下静脉注射垂体后叶素0.5 U/kg，在10 s内推完。分别记录注射前(0 s)及注射后第15，30 s及1，2，5，10 min的心电图，观察T波的变化。
1.4.2 安心对PIT致小鼠心肌缺血CK，LDH，SOD，MDA影响的实验末次给药后1 h，模型组和安心高、中、低剂量组动物腹腔注射PIT，剂量为20 U/kg，正常组腹腔注射等容积生理盐水。2 h后采血，将血以3 000 r/min离心15 min，分离血清，按试剂盒说明书，测定血清中MDA的含量和SOD以及CK和LDH的活性。
2 结果
2.1 安心对垂体后叶素导致大鼠T波改变的影响结果见表1。结果表明，安心高、中剂量组在注射PIT后第15，30 s及1，2，5，10 min的T波抬高均明显低于模型组(P<0.01，P<0.05)，说明安心高、中剂量组对垂体后叶素致大鼠心肌缺血有抵抗作用。
2.2 安心对PIT致小鼠心肌缺血CK，LDH，SOD，MAD的作用 结果见表2。结果表明，模型组血清LDH，CK，MDA水平明显高于正常组水平，血清SOD的活性显著低于正常组，而安心高、中剂量组可以降低血清LDH，CK水平，且增高了SOD的活性，降低了MDA的含量(P<0.01或P<0.05)。
表1 安心对PIT导致大鼠T波改变的影响(略)
与模型对照组比较，*P<0.05， **P<0.01；n=10
表2 安心对PIT致小鼠心肌缺血CK，LDH，SOD，MDA的作用(略)
与模型组比较，* P<0.05，**P<0.01 ；与正常组比较，##P<0.01 ;n=10
3 讨论
本文利用垂体后叶素导致心肌缺血模型评价中药复方安心改善心肌缺血的药理作用。垂体后叶素(PIT)是从牛、猪等垂体后叶中提取的多肽物质，内含缩宫素及加压素，加压素能明显使冠状动脉、毛细血管、小动脉、小静脉收缩[3]。给大鼠舌下静脉注射PIT后，可迅速使冠状动脉血管收缩痉挛，血氧供应障碍，造成心肌缺血模型。由于大鼠心电图ST段极短，基本与T波融合，因此我们将注射PIT后T波抬高或下降幅度作为评价大鼠心肌缺血损伤程度的指标。心肌酶的释放量是心肌损害程度的主要标志，在一定程度上反映心肌病变程度。急性心肌梗塞时，在心肌缺血缺氧坏死过程中，由于细胞肿胀，细胞膜的完整性受到破坏，膜对蛋白酶的通透性增加，酶由细胞内释出增多，使血清中酶活力增加[4]。因此，LDH，CK的测定有助于急性心肌梗塞病程的判定[5]。MDA是脂质过氧化产物，组织中MDA含量的变化能直接反映过氧化的程度，在一定程度上也能间接反映氧自由基的生成情况。心肌缺血时，细胞内游离钙浓度增加，Ca2+可激活催化黄嘌呤脱氢酶转变为黄嘌呤氧化酶的蛋白水解酶，使黄嘌呤氧化酶的活性升高，加强黄嘌呤氧化酶生成氧自由基的途径，而氧自由基引起的膜脂质过氧化反应，又促使膜对Ca2+的通透性增加，进一步加剧细胞内钙聚集，由此形成恶性循环，加速细胞内一系列病理改变[6]。因此，氧自由基产物增加既是心肌损伤的原因，也是反映心肌损伤程度的指标。SOD是机体防御新陈代谢及其他生命活动中氧自由基损伤和破坏的抗氧化酶。大量氧自由基生成及脂质过氧化反应是心肌缺血损伤的主要机制之一。SOD在不同的内环境下活性不同，对健康人而言，SOD含量与SOD活力成正比；冠心病患者心肌缺血、缺氧，致使自由基产生过多，脂质过氧化反应增强，SOD活力水平明显低于健康人[7]。心肌缺血时氧自由基产生增多，氧自由基与不饱和脂肪酸反应形成过氧化脂质，过氧化酯质进一步分解成MDA，MDA可与蛋白质的游离氨基及核酸等形成Schiff碱，而使生物大分子发生交联，心肌细胞膜的完整性受到破坏，造成对机体的损伤。本研究采用垂体后叶素复制的心肌缺血模型，观察安心对其保护作用。结果表明，安心能抑制观察期间内大鼠心电图T波改变，尤其抑制心肌缺血模型大鼠造模后第15 s时T波抬高。提高小鼠血清SOD活性，降低血清LDH，CK，MDA含量。结果提示复方安心对实验性心肌缺血模型有一定改善作用，为临床治疗提供了很好的理论依据。
参考文献：
[1] 徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学，第2版[M].北京：人民卫生出版社，1991：1781.
[2] 叶春玲，吕艳青.护心灵对垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血的保护作用[J].中成药，2001，11(11)：23.
[3] 周 琼，陆大祥，付咏梅，等.甘氨酸对小鼠心肌缺血损伤的防治作用研究[J].中国药理生理杂志，2002，18(4)：12.
[4] HG沃格尔，WH 沃格尔.药理学实验指南—新药发现和药理学评价[M].北京：科学出版，2001：11.
[5] 姚秀娟，崔 毅，于宝蓉，等.蓑若碱对麻醉大鼠缺血再灌注心律失常和脂质过氧化的保护[J].第四军医大学学报，1992，13(5)：3.
[6] 顿 文，杨立法，周尔凤，等.甲基磺酮醇胺的抗心律失常与抗脂质过氧化的研究[J].中国药理学报，1991，12(3)：177.
[7] Tomoda H,Morimoto K,Aoki N.Superoxide dismutase activity as a predictor of myocardial reperfusion and salvage in acute myocardial infarction[J].Am Heart J,1996,131:849.
(吉林大学药学院 ，吉林 长春 130021； 吉林省中医中药研究院，吉林 长春 130021), 百拇医药(王智文, 洪铁 ， 杨振)
关键词：安心； 心肌缺血； 垂体后叶素
Protective Effect of Anxin on Pituitrin -induced Myocardial Ischemic Injury
WANG Zhiwen, HONG Tie, YANG Zhen
(Department of Pharmacology, Pharmacy College of Jilin University,Changchun, Jilin 130021，China； Academy of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica of Jilin Province ,Changchun 130021，China)
Abstract：ObjectiveTo observe protective effects of Anxin ,a complex of Chinese medicine,on myocardial ischemic injury. MethodsThe electrocardiograph(ECG) was observed in myocardial ischemia rats induced by pituitrin (PIT) through lingual vein;the contents of MDA ,SOD,CK and LDH in serum were assayed,respectively, in myocardial ischemia mice which pituitrin was peritoneal injected.ResultsHigh (2.8 g/kg)，medium (1.4 g/kg) dose of Anxin could obviously relieve the ECG changes caused by pituitrin-induced myocardial ischemia in rats. The threshold dose of Anxin(4 g/kg,2 g/kg)decreased CK,LDH,MDA production and increased SOD activity in the serum of mice.ConclusionAnxin possesses the protective effect on myocardial ischemia induced by PIT.
Key words：Anxin; Myocardial ischemia; Pituitrin
心肌缺血是指供应给心肌的血液不能满足需要时，导致缺氧，代谢改变，功能障碍，甚至心肌结构破坏的病理状态[1]。中药治疗心肌缺血取得一定的进展，其特点为疗效高、毒副作用小。安心是以中医临床实践为基础研制出中药复方制剂，由人参Radix Ginseng，丹参Radix Salviae Miltiorrhizae，苦参Radix Sophorae Flavescentis，玉竹Rhizoma Polygonati Odorati，仙灵脾Herba Epimedii，麦冬Radix Ophiopogonis，泽兰Herba Lycop，葶苈子Semen Lepidh8味中药组成。本研究采用垂体后叶素(PIT)所致动物心肌缺血模型，观察安心改善心肌缺血的作用。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 仪器 BL420E+生物机能实验系统(成都泰盟)；北京普析通用TU1810紫外可见分光光度计。
1.2 受试药物及试剂安心的制备：人参、丹参、苦参、玉竹、仙灵脾、麦冬、泽兰、葶苈子8味中药共同煎煮3次，2 h/次，滤过，合并滤液，浓缩成稠膏，真空低温干燥，粉碎，过筛，成粉，用时配制成所需浓度。阳性对照药：步长稳心颗粒(批号051002)，山东步长制药有限公司产品。试剂：垂体后叶素(PIT)由上海禾丰制药有限公司出品(批号5E20009)。本实验所用脂质过氧化产物丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)以及磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。
1.3 动物及分组
1.3.1 动物20～22 g雄性昆明种小鼠，200～220 g，雄性Wistar大鼠，均购自吉林大学基础医学院实验中心，合格证号：20030001。
1.3.2 分组及给药将小鼠50只，随机分为6组，每组10只。正常组ig等体积蒸馏水；阳性药物组ig步长稳心颗粒溶液(6 g/kg)；受试药物高、中、低剂量组ig安心溶液(4，2，1 g/kg)。各组给药1次/d，共计14 d。将大鼠50只，随机分为5组，每组10只。模型组ig等体积蒸馏水；阳性药物组ig步长稳心颗粒溶液(4.2 g/kg)；受试药物高、中、低剂量组ig安心溶液(2.8，1.4，0.7 g/kg)。各组给药1次/d，共计14 d。
1.4 方法
1.4.1 垂体后叶素导致大鼠T波改变的实验[2]末次给药后30 min，将大鼠用25%乌拉坦(1.2 g/kg)腹腔注射麻醉，仰卧固定，记录标准Ⅱ导联心电图。5 min后舌下静脉注射垂体后叶素0.5 U/kg，在10 s内推完。分别记录注射前(0 s)及注射后第15，30 s及1，2，5，10 min的心电图，观察T波的变化。
1.4.2 安心对PIT致小鼠心肌缺血CK，LDH，SOD，MDA影响的实验末次给药后1 h，模型组和安心高、中、低剂量组动物腹腔注射PIT，剂量为20 U/kg，正常组腹腔注射等容积生理盐水。2 h后采血，将血以3 000 r/min离心15 min，分离血清，按试剂盒说明书，测定血清中MDA的含量和SOD以及CK和LDH的活性。
2 结果
2.1 安心对垂体后叶素导致大鼠T波改变的影响结果见表1。结果表明，安心高、中剂量组在注射PIT后第15，30 s及1，2，5，10 min的T波抬高均明显低于模型组(P<0.01，P<0.05)，说明安心高、中剂量组对垂体后叶素致大鼠心肌缺血有抵抗作用。
2.2 安心对PIT致小鼠心肌缺血CK，LDH，SOD，MAD的作用 结果见表2。结果表明，模型组血清LDH，CK，MDA水平明显高于正常组水平，血清SOD的活性显著低于正常组，而安心高、中剂量组可以降低血清LDH，CK水平，且增高了SOD的活性，降低了MDA的含量(P<0.01或P<0.05)。
表1 安心对PIT导致大鼠T波改变的影响(略)
与模型对照组比较，*P<0.05， **P<0.01；n=10
表2 安心对PIT致小鼠心肌缺血CK，LDH，SOD，MDA的作用(略)
与模型组比较，* P<0.05，**P<0.01 ；与正常组比较，##P<0.01 ;n=10
3 讨论
本文利用垂体后叶素导致心肌缺血模型评价中药复方安心改善心肌缺血的药理作用。垂体后叶素(PIT)是从牛、猪等垂体后叶中提取的多肽物质，内含缩宫素及加压素，加压素能明显使冠状动脉、毛细血管、小动脉、小静脉收缩[3]。给大鼠舌下静脉注射PIT后，可迅速使冠状动脉血管收缩痉挛，血氧供应障碍，造成心肌缺血模型。由于大鼠心电图ST段极短，基本与T波融合，因此我们将注射PIT后T波抬高或下降幅度作为评价大鼠心肌缺血损伤程度的指标。心肌酶的释放量是心肌损害程度的主要标志，在一定程度上反映心肌病变程度。急性心肌梗塞时，在心肌缺血缺氧坏死过程中，由于细胞肿胀，细胞膜的完整性受到破坏，膜对蛋白酶的通透性增加，酶由细胞内释出增多，使血清中酶活力增加[4]。因此，LDH，CK的测定有助于急性心肌梗塞病程的判定[5]。MDA是脂质过氧化产物，组织中MDA含量的变化能直接反映过氧化的程度，在一定程度上也能间接反映氧自由基的生成情况。心肌缺血时，细胞内游离钙浓度增加，Ca2+可激活催化黄嘌呤脱氢酶转变为黄嘌呤氧化酶的蛋白水解酶，使黄嘌呤氧化酶的活性升高，加强黄嘌呤氧化酶生成氧自由基的途径，而氧自由基引起的膜脂质过氧化反应，又促使膜对Ca2+的通透性增加，进一步加剧细胞内钙聚集，由此形成恶性循环，加速细胞内一系列病理改变[6]。因此，氧自由基产物增加既是心肌损伤的原因，也是反映心肌损伤程度的指标。SOD是机体防御新陈代谢及其他生命活动中氧自由基损伤和破坏的抗氧化酶。大量氧自由基生成及脂质过氧化反应是心肌缺血损伤的主要机制之一。SOD在不同的内环境下活性不同，对健康人而言，SOD含量与SOD活力成正比；冠心病患者心肌缺血、缺氧，致使自由基产生过多，脂质过氧化反应增强，SOD活力水平明显低于健康人[7]。心肌缺血时氧自由基产生增多，氧自由基与不饱和脂肪酸反应形成过氧化脂质，过氧化酯质进一步分解成MDA，MDA可与蛋白质的游离氨基及核酸等形成Schiff碱，而使生物大分子发生交联，心肌细胞膜的完整性受到破坏，造成对机体的损伤。本研究采用垂体后叶素复制的心肌缺血模型，观察安心对其保护作用。结果表明，安心能抑制观察期间内大鼠心电图T波改变，尤其抑制心肌缺血模型大鼠造模后第15 s时T波抬高。提高小鼠血清SOD活性，降低血清LDH，CK，MDA含量。结果提示复方安心对实验性心肌缺血模型有一定改善作用，为临床治疗提供了很好的理论依据。
参考文献：
[1] 徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学，第2版[M].北京：人民卫生出版社，1991：1781.
[2] 叶春玲，吕艳青.护心灵对垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血的保护作用[J].中成药，2001，11(11)：23.
[3] 周 琼，陆大祥，付咏梅，等.甘氨酸对小鼠心肌缺血损伤的防治作用研究[J].中国药理生理杂志，2002，18(4)：12.
[4] HG沃格尔，WH 沃格尔.药理学实验指南—新药发现和药理学评价[M].北京：科学出版，2001：11.
[5] 姚秀娟，崔 毅，于宝蓉，等.蓑若碱对麻醉大鼠缺血再灌注心律失常和脂质过氧化的保护[J].第四军医大学学报，1992，13(5)：3.
[6] 顿 文，杨立法，周尔凤，等.甲基磺酮醇胺的抗心律失常与抗脂质过氧化的研究[J].中国药理学报，1991，12(3)：177.
[7] Tomoda H,Morimoto K,Aoki N.Superoxide dismutase activity as a predictor of myocardial reperfusion and salvage in acute myocardial infarction[J].Am Heart J,1996,131:849.
(吉林大学药学院 ，吉林 长春 130021； 吉林省中医中药研究院，吉林 长春 130021), 百拇医药(王智文, 洪铁 ， 杨振)