摘要: 目的 比较舟山眼镜蛇毒细胞毒素(CTX)Ⅹ～ⅩⅢ(CTX-Ⅹ～ⅩⅢ)的毒性及抗肿瘤活性，筛选低毒高效的CTX。 方法 以Meier法测定CTX近似半数致死量(LD 50 );通过描记心电图测定引起大鼠100%死亡的最小剂量(MLD);以磺酰罗丹明B(SRB)法观察CTX对体外培养的Bel 7404 细胞和HL-60细胞的杀伤作用;观察荷U14及艾氏腹水癌(EAC)小鼠腹腔注射(ip)CTX-Ⅻ、ⅩⅢ的效果，测定肿瘤生长抑制率。 结果 CTX-Ⅹ～ⅩⅢ对小鼠(iv)的近似LD50值分别为(1.16±0.12)，(1.80±0.21)，(0.75±0.21)，(1.85±0.15)mg/kg;MLD为(183±18)，(310±26)，(224±16)，(343±28)μg/kg(P<0.001)。CTX对Bel 7404 细胞作用24h的IC 50 分别为:(2.22±0.28)，(2.97±0.10)，(1.12±0.13)，(2.46±0.28)μg/mL;对HL-60细胞作用24h的IC 50 为:(1.97±0.06)，(2.61±0.24)，(1.61±0.18)，(2.40±0.30)μg/mL(P<0.01)。CTX-Ⅻ和ⅩⅢ(ip)对U14实体瘤和EAC腹水癌均有剂量依赖性抑制作用。 结论 4种CTX中，Ⅹ、Ⅻ毒性较强，Ⅺ次之，ⅩⅢ最弱。CTX对体外培养肿瘤细胞的细胞毒作用强弱顺序为:Ⅻ>Ⅹ>ⅩⅢ>Ⅺ。Ⅻ和ⅩⅢ对小鼠体内接种的U14及EAC的抑制作用是ⅩⅢ>Ⅻ。在4种CTX中，ⅩⅢ的抗肿瘤作用相对较强，毒性最低。

    关键词: 细胞毒素类;肿瘤细胞，培养的;宫颈肿瘤;癌，Ehrlich瘤

    细胞毒素(cytotoxin，CTX)是眼镜蛇毒中一类重要的活性蛋白 [1] ，约占蛇毒总蛋白量的25%～40%，同一种眼镜蛇毒含有多种CTX，它们对多种实验性肿瘤细胞有选择性杀伤作用 [2] 。国内外研究一般侧重于研究某一种CTX的理化性质、生物学活性及毒性等，缺少对一种蛇毒的几种CTX的抗肿瘤活性及其毒性进行比较。笔者采用离子交换和高效液相色谱方法从舟山眼镜蛇(Naja atra)毒中分离纯化得到4种CTX(暂定名CTX-Ⅹ～ⅩⅢ)，并测定它们的相对分子质量及N端20个氨基酸序列 [3] ，比较它们在体内外抗肿瘤的活性及毒性，旨在筛选出一个高效低毒的CTX，为开发利用提供实验依据。

    1 材料和方法

    1.1 药品和试剂 CTX-Ⅹ～ⅩⅢ，从福建医科大学蛇毒研究所自采的舟山眼镜蛇毒中纯化而得 [3] ;RPMI1640培养基(美国Gibco BRL公司);新生牛血清(杭州江滨生物技术有限公司);1∶250胰蛋白酶、磺酰罗丹明B(SRB)(美国Sigma公司);其他试剂均为国产分析纯 ......