骨折愈合过程中骨痂内修复细胞DNA含量的观察
作者：陈其昕 袁中兴
单位：浙江医科大学附属第二医院骨科*
关键词：
中华医学杂志900118
骨折修复涉及一系列细胞的活动，最终使骨愈合逐步臻于完成。我们采用Feulgen-DNA染色法对骨折愈合过程中修复细胞DNA含量变化进行了初步的研究，现报告如下。
一、材料和方法
1.兔骨折模型的制作：采用大耳白兔24只，雄性，体重2.5～3.2kg。1%戊巴比妥静脉内麻酸。无菌操作造成右胫骨下段骨折，术后木夹板固定。于术后第2、4、7、10、14、21、28、90天患肢X线摄片后处死，取出骨痂及对侧相应部位胫骨。置于10%甲醛磷酸缓冲液中固定。然后经5.5%乙二胺四乙酸二钠液脱钙，酒精逐级脱水，石蜡包埋。制成5μm薄的切片。用HE染色及Feulgen染色。
2.Feulgen染色法：见参考文献[组织病理学与组织化学——技术手朋.北京：科学出版社，1982：242.]。
3.DNA含量测定：使用OPTON显微分光光度计，先测定细胞核Feulgen-DNA染色吸光谱曲线，以确定测量用单色光的波长(本实验为500nm和560nm)。用双波长法[组织化学手册.北京：人民卫生出版社，1982：321.]对各期骨痂内间充质细胞、骨生成细胞，成软骨细胞、成骨细胞，软骨细胞和骨细胞核的透光度进行测定。计算出每个细胞核的Feulgen-DNA含量(以任意单位表示：Arbitrary Unit,简称AU)。每片测定细胞数100个以上。以淋巴细胞的DNA-AU作为2c(2 components)。对各期数据进行比较，采用秩和检验。
二、结果
1.HE染色组织学表现：骨折后第2天在骨内、外膜及血肿处有大量的间充质细胞，骨生成细胞活跃增殖，第7天就可见到明显的透明软骨骨痂形成。其周围可见有少量的梁状新骨形成。在骨折后第10天软骨骨痂形成进入高潮，从第14天开始透明软骨逐渐被骨小梁替代，至21天及28天则以骨小梁形成占据优势。基本上替代了软骨性骨痂。到第90天则见有板层骨形成，且占据优势。
2.DNA含量测定结果：从DNA均值中可看出整个骨折愈合过程划分成2个时相，即细胞核DNA含量增高相(P<0.01)，出现于骨折后第2天、第4天、第7天(分别为12±5、10±4、9±4 AU)；细胞核DNA含量正常或接近正常相，出现于正常骨骼和骨折后第10(8±4 AU)、14、21、28(各为7±4 AU)、90(7±3 AU)天。
三、讨论
本实验结果提示骨折后第2天DNA复制十分活跃，随后就逐渐下降，在骨折后第21天及以后则与正常骨骼均无明显差别(P>0.05)。这与 Tonna等用3H-TdR脉冲标记放射自显影法研究的结果接近[J BoneJoins Surg 1961;43(A):352.]。
骨折后第10天开始出现明显的DNA复制及细胞增殖的抑制。此时出现了明显的透明软骨，表明修复细胞增殖抑制与透明软骨的出现有密切关系。也可能与骨不连接等疾患的发生有关。
(1989年5月3日收稿 同年9月15日修回), 百拇医药
单位：浙江医科大学附属第二医院骨科*
关键词：
中华医学杂志900118
骨折修复涉及一系列细胞的活动，最终使骨愈合逐步臻于完成。我们采用Feulgen-DNA染色法对骨折愈合过程中修复细胞DNA含量变化进行了初步的研究，现报告如下。
一、材料和方法
1.兔骨折模型的制作：采用大耳白兔24只，雄性，体重2.5～3.2kg。1%戊巴比妥静脉内麻酸。无菌操作造成右胫骨下段骨折，术后木夹板固定。于术后第2、4、7、10、14、21、28、90天患肢X线摄片后处死，取出骨痂及对侧相应部位胫骨。置于10%甲醛磷酸缓冲液中固定。然后经5.5%乙二胺四乙酸二钠液脱钙，酒精逐级脱水，石蜡包埋。制成5μm薄的切片。用HE染色及Feulgen染色。
2.Feulgen染色法：见参考文献[组织病理学与组织化学——技术手朋.北京：科学出版社，1982：242.]。
3.DNA含量测定：使用OPTON显微分光光度计，先测定细胞核Feulgen-DNA染色吸光谱曲线，以确定测量用单色光的波长(本实验为500nm和560nm)。用双波长法[组织化学手册.北京：人民卫生出版社，1982：321.]对各期骨痂内间充质细胞、骨生成细胞，成软骨细胞、成骨细胞，软骨细胞和骨细胞核的透光度进行测定。计算出每个细胞核的Feulgen-DNA含量(以任意单位表示：Arbitrary Unit,简称AU)。每片测定细胞数100个以上。以淋巴细胞的DNA-AU作为2c(2 components)。对各期数据进行比较，采用秩和检验。
二、结果
1.HE染色组织学表现：骨折后第2天在骨内、外膜及血肿处有大量的间充质细胞，骨生成细胞活跃增殖，第7天就可见到明显的透明软骨骨痂形成。其周围可见有少量的梁状新骨形成。在骨折后第10天软骨骨痂形成进入高潮，从第14天开始透明软骨逐渐被骨小梁替代，至21天及28天则以骨小梁形成占据优势。基本上替代了软骨性骨痂。到第90天则见有板层骨形成，且占据优势。
2.DNA含量测定结果：从DNA均值中可看出整个骨折愈合过程划分成2个时相，即细胞核DNA含量增高相(P<0.01)，出现于骨折后第2天、第4天、第7天(分别为12±5、10±4、9±4 AU)；细胞核DNA含量正常或接近正常相，出现于正常骨骼和骨折后第10(8±4 AU)、14、21、28(各为7±4 AU)、90(7±3 AU)天。
三、讨论
本实验结果提示骨折后第2天DNA复制十分活跃，随后就逐渐下降，在骨折后第21天及以后则与正常骨骼均无明显差别(P>0.05)。这与 Tonna等用3H-TdR脉冲标记放射自显影法研究的结果接近[J BoneJoins Surg 1961;43(A):352.]。
骨折后第10天开始出现明显的DNA复制及细胞增殖的抑制。此时出现了明显的透明软骨，表明修复细胞增殖抑制与透明软骨的出现有密切关系。也可能与骨不连接等疾患的发生有关。
(1989年5月3日收稿 同年9月15日修回), 百拇医药