α地中海贫血的临床和实验研究
作者：黄有文 王荣新 张尼佳 吴冠芸 张俊武
单位：黄有文 王荣新 张尼佳；(南宁，中国人民解放军第三三医院 530021)吴冠芸 张俊武(中国医学科学院基础医学研究所)
关键词：地中海贫血；基因
中华医学杂志900314
提要 普查500例新生儿脐血，α地中海贫血(α地贫)的发生率为16.6%，各类型α地贫75例，静止型6例，临床无症状，血液学无异常，标准型症状轻微，血液学无明显改变，均需基因分析而确诊。血红蛋白H病(Hb H病)30例，临床有轻度至中度贫血，肝脾肿大，经基因分析20例，其中5例为缺失型Hb H病，13例为非缺失型，2例是Hbcs型Hb H病，同时对Hb Bart's水肿胎儿综合征提出了诊断条件。
α地中海贫血(α地贫)α球蛋白链受到部分或完全抑制所致的一种遗传性血红蛋白病.我国南方发病率较高.现报道经α珠蛋白基因分析确诊的33例静止型和标准型α地贫及血红蛋白H病(HbH病)和Hb Bart's水肿胎儿综合征的临床、血液学研究和基因图谱分析。
, 百拇医药
对象和方法
一、对象
1. 新生儿脐血：南宁市第一、二医院、南宁市红十字会医院、广西中医学院第二附属医院、自治区人民医院、区妇幼保健院、邕宁和武鸣县、武鸣双桥乡卫生院妇产科出生的新生儿脐血不加选择的为检查对象，共500例。
2. 静止型α地贫(α地贫2)：6例，男2例，女4例。年龄11～75岁。为Hb H病和α地贫患者，系产前诊断家系调查所发现的门诊患者。汉族5例，壮族1例，均为广西籍。
3. 标准型α地贫(α地贫1)：27例，(病例来源同静止型)，男13例，女14例。年龄18～66岁，平均29.8岁。汉族10例，壮族17例，均为广西籍。
4. Hb H病：30例，19例是门诊患者，11例为住院患者。男14例，女16例。年龄8～45岁，平均27.2岁。汉壮族各15例，全为广西籍，其诊断符合1987年11月在上海召开的全国溶血性贫血会议所制定的诊断标准。本组有20例并经基因分析确证。
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5. Hb Bart's水肿胎儿综合征12例，男6例，女6例，4例自然分娩，3例在妊娠6～12周取胎儿绒毛提取DNA经基因分析确诊。5例经B型超声检查及引产后化验检查确诊。
二、方法
1. 血液学常规检查和溶血性贫血检查按全国血红蛋白病协作组所制定的方法。
2. 醋酸纤维薄膜电泳[1]：取静脉血制成溶血液，经四氯化碳抽取离心后，用醋酸纤维薄膜电泳(pH8.6)，不连续电泳(电压220mV)，30分钟，然后洗脱各区带，进行血红蛋白组分测定。
3. α珠蛋白基因图谱分析：用α、δ珠蛋白基因探针，重组质粒JWLOL经Mbo Ⅱ酶解后得到的1.6Kb片段和重组质粒pRBαI经Patl酶解产生1.5Kb片段作为α基因探针。重组质粒pRBδ1经Hinf Ⅰ酶解产生1.9Kb片段，可用作δ基因探针。在α地贫基因分析中使用的限制性内切酶为BamHI、Bgl Ⅱ、EcoR I和Hind Ⅲ。各种限制性内切酶在α珠蛋白基因簇内的识别点不同[2～4]。
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4. 本实验结果经统计学处理，数据用
±S表示。
结 果
一、脐血α地贫的检出率
Hb Bart's 含量在1%以上者83例(16.6%)。Hb电泳测定结果见表1。
表1 脐血Hb Bart's含量测定 例数
Hb Bart's区带含量(%)
百分率(%)
16
1～
19.3
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9
2～
10.8
52
3.4～
62.6
2
10～
2.4
1
20～
1.2
2
, http://www.100md.com 30～
2.4
1
70～
1.2
二、静止型α地贫血液改变
Hb100～140g/L，平均125g/L，红细胞(4.1～4.8)×1012/L，平均4.5×1012/L，网织红细胞0.7～1.5%，平均1.0%，抗碱Hb 0.33～4.2%，平均2.24%，HbA20.3～2.1%，平均1.4%。
三、标准型α地贫血液改变
Hb 118.1±23.7g/L，红细胞4.4±0.6×1012/L，网织红细胞1.3±0.6%，抗碱Hb 1.8±1.2%，HbA23.0±1.3%。
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四、HbH病
每一例都有轻度至中度贫血，肝脾肿大，肝肿大17例，在肋缘下1～7cm，脾肿大26例，分别在肋缘下1～9cm。红细胞包涵体检查全部病例均阳性，血液学结果：Hb 72±18g/L，红细胞3.4±0.8×1012/L，网织红细胞6±3%，抗碱Hb 2.4±2.0%，HbA22.0±1.1%。
五、Hb Bart's水肿胎儿综合征
12例均呈皮肤苍白，皮下高度水肿，9例有胸腹腔积液，肝脾肿大，以肝肿大为显著，常占据全腹腔，5例有两个以上器官畸形。胎盘巨大(400～1700g)，水肿，质脆。Hb19～95g/L，平均49.5g/L，红细胞0.94～3.69×1012/L，平均2.61×1012/L，网织红细胞20～26.3%，平均24%，成熟红细胞大小不均，异形性明显，以靶型居多，红细胞内Hb含量过少，胞浆呈多嗜性和嗜碱性点彩，部分病例脐血中出现较多幼红细胞。脐血Hb电泳：Hb Bart's含量78.2～96.8%，平均86.3%，Hb Portland3.2～19.2%，平均13.6%，抗碱Hb 42～75%，平均56.1%。
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六、α珠蛋白基因分析结果(表2)
静止型6例，均为左侧缺失型，其基因型为(α-/αα)。标准型27例，缺失2个α珠蛋白基因，其基因型为(αα/--)。Hb H病30例中有20例作了α珠蛋白基因图谱分析，其中缺失型5例，基因型(α-/--)，非缺失型13型，其基因型(ααT/--)，Hb CS型Hb H病2例，基因型为(ααCS/--)。Hb Bart's为缺失4个α珠蛋白基因，基因型(--/--)。各类型α地贫经α、δ珠蛋白特异的限制性内切酶片段杂交自显影的分析。不同类型α地贫经α、δ一基因特异片段(Kb)结果不同。
表2 不同的基因类型经α和δ基因特异片段(Kb)结果 基因型
α
δ
Bam HI
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BglⅡ
EcoRⅠ
HindⅢ
正常
14
12.5
23
16.5
(αα/αα)
7.2
5
14.5
13
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α地贫/杂合子
14
12.5
23
20
(αα/--)
7.2
17
16.5或
5
14.5
13
缺失型Hb H病
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10
15.8
19
(α-/--)
17
5
非缺失型Hb H病
14
12.5
23
20
(ααT/α)
7.2
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17
16.5或
5
14.5
13
Hb Bart's
-
-
17
20
(--/--)
5
13
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静止型α地贫
14
12.5……
左侧缺失型
10
7.2……
(α/αα)
静止型α地贫
14
15.8……
右侧缺失型
10
12.5……
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(αα/α)
7.2……
讨 论
静止型、标准型α地贫由于临床无症状或很轻，血液学改变不明显，不影响劳动能力和生殖功能，因而临床实际工作中难以确诊此病。目前，国内尚少见有成人的病例报告。静止型是α+地贫杂合子，标准型为α°地贫杂合子，两者相互通婚或后者通婚可分娩出Hb H病和Hb Bart's患儿。经α珠蛋白基因分析证实本组12例Hb Bart's水肿胎儿综合征的父母都是标准型α地贫患者。因而，做好婚前检查，避免携带有α地贫基因者的联姻是十分重要的。
Hb H病在临床上有轻度至中等程度的贫血，血液学改变明显，Hb H成分在碱性缓冲液中是向阳极移动最快的一种成分，而在pH6.5时是唯一向阳极动的成分，此项检查对诊断此病有肯定性诊断价值。所有病例红细胞包涵体均阳性，20例作了α珠蛋白基因分析，缺失型5例，非缺失型13例，Hbcs型2例，非缺失型虽无结构基因的缺失，但有功能缺陷，其临床表现严重，需输血，其中8例做了脾切除。有2例作了产前诊断获得成功，因此基因检查为防治这型α地贫的重要手段之一。
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Hb Bart's水肿胎儿综合征是α°地贫纯合子型，完全缺失α珠蛋白基因，为死胎或出生后数分钟死亡。本病特点为：(1)胎儿高度水肿、畸形、死胎及胎盘过大、肝脾肿大；(2)孕妇有水肿胎儿分娩史；(3)妊娠过程胎儿发育异常，孕妇常伴有妊娠高血压综合征；(4)脐血Hb Bart's含量多在80%以上；(5)基因分析证实缺失4个α珠蛋白基因；(6)有遗传关系的家系。我们认为上述六项可作为此病诊断条件，至少必须具备1、4两项。本组病例完全符合Weatherall[5]的诊断条件。本病对社会、家庭、婚姻及孕妇身心健康均有严重影响。目前我国对此病在妊娠早期取胎儿绒毛提取DNA进行基因分析作产前诊断，这是防治本病的重要措施之一[6]。
参考文献
1. 邓家栋，等.血液病实验诊断，第1版，天津科技出版社，1985：321-322.
2. 吴冠芸，等.重组质粒pRBαI在探测α珠蛋白中的应用.中国医学科学院学报 1983；5：275.
, 百拇医药
3. 王黎明，等，δ珠蛋白基因探针在鉴别α地中海贫血中的应用.生物物理学报1985；4：42.
4. 张俊武，等.四川地区Hb H病人的α珠蛋白类型.中华血液学杂志 1985；2：73.
5. Weatherall, et al. The hemoglobin constitue of infant with the haemaglobin Hb Bart's hydrops fetal syndrome. Br J Haemat 1970；18：357.
6. 黄有文，等.α地中海贫血早期产前基因诊断.中华血液学杂志 1988；4：193.
(1989年3月9日收稿 同年7月28修回), http://www.100md.com
单位：黄有文 王荣新 张尼佳；(南宁，中国人民解放军第三三医院 530021)吴冠芸 张俊武(中国医学科学院基础医学研究所)
关键词：地中海贫血；基因
中华医学杂志900314
提要 普查500例新生儿脐血，α地中海贫血(α地贫)的发生率为16.6%，各类型α地贫75例，静止型6例，临床无症状，血液学无异常，标准型症状轻微，血液学无明显改变，均需基因分析而确诊。血红蛋白H病(Hb H病)30例，临床有轻度至中度贫血，肝脾肿大，经基因分析20例，其中5例为缺失型Hb H病，13例为非缺失型，2例是Hbcs型Hb H病，同时对Hb Bart's水肿胎儿综合征提出了诊断条件。
α地中海贫血(α地贫)α球蛋白链受到部分或完全抑制所致的一种遗传性血红蛋白病.我国南方发病率较高.现报道经α珠蛋白基因分析确诊的33例静止型和标准型α地贫及血红蛋白H病(HbH病)和Hb Bart's水肿胎儿综合征的临床、血液学研究和基因图谱分析。
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对象和方法
一、对象
1. 新生儿脐血：南宁市第一、二医院、南宁市红十字会医院、广西中医学院第二附属医院、自治区人民医院、区妇幼保健院、邕宁和武鸣县、武鸣双桥乡卫生院妇产科出生的新生儿脐血不加选择的为检查对象，共500例。
2. 静止型α地贫(α地贫2)：6例，男2例，女4例。年龄11～75岁。为Hb H病和α地贫患者，系产前诊断家系调查所发现的门诊患者。汉族5例，壮族1例，均为广西籍。
3. 标准型α地贫(α地贫1)：27例，(病例来源同静止型)，男13例，女14例。年龄18～66岁，平均29.8岁。汉族10例，壮族17例，均为广西籍。
4. Hb H病：30例，19例是门诊患者，11例为住院患者。男14例，女16例。年龄8～45岁，平均27.2岁。汉壮族各15例，全为广西籍，其诊断符合1987年11月在上海召开的全国溶血性贫血会议所制定的诊断标准。本组有20例并经基因分析确证。
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5. Hb Bart's水肿胎儿综合征12例，男6例，女6例，4例自然分娩，3例在妊娠6～12周取胎儿绒毛提取DNA经基因分析确诊。5例经B型超声检查及引产后化验检查确诊。
二、方法
1. 血液学常规检查和溶血性贫血检查按全国血红蛋白病协作组所制定的方法。
2. 醋酸纤维薄膜电泳[1]：取静脉血制成溶血液，经四氯化碳抽取离心后，用醋酸纤维薄膜电泳(pH8.6)，不连续电泳(电压220mV)，30分钟，然后洗脱各区带，进行血红蛋白组分测定。
3. α珠蛋白基因图谱分析：用α、δ珠蛋白基因探针，重组质粒JWLOL经Mbo Ⅱ酶解后得到的1.6Kb片段和重组质粒pRBαI经Patl酶解产生1.5Kb片段作为α基因探针。重组质粒pRBδ1经Hinf Ⅰ酶解产生1.9Kb片段，可用作δ基因探针。在α地贫基因分析中使用的限制性内切酶为BamHI、Bgl Ⅱ、EcoR I和Hind Ⅲ。各种限制性内切酶在α珠蛋白基因簇内的识别点不同[2～4]。
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4. 本实验结果经统计学处理，数据用
±S表示。结 果
一、脐血α地贫的检出率
Hb Bart's 含量在1%以上者83例(16.6%)。Hb电泳测定结果见表1。
表1 脐血Hb Bart's含量测定 例数
Hb Bart's区带含量(%)
百分率(%)
16
1～
19.3
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9
2～
10.8
52
3.4～
62.6
2
10～
2.4
1
20～
1.2
2
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2.4
1
70～
1.2
二、静止型α地贫血液改变
Hb100～140g/L，平均125g/L，红细胞(4.1～4.8)×1012/L，平均4.5×1012/L，网织红细胞0.7～1.5%，平均1.0%，抗碱Hb 0.33～4.2%，平均2.24%，HbA20.3～2.1%，平均1.4%。
三、标准型α地贫血液改变
Hb 118.1±23.7g/L，红细胞4.4±0.6×1012/L，网织红细胞1.3±0.6%，抗碱Hb 1.8±1.2%，HbA23.0±1.3%。
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四、HbH病
每一例都有轻度至中度贫血，肝脾肿大，肝肿大17例，在肋缘下1～7cm，脾肿大26例，分别在肋缘下1～9cm。红细胞包涵体检查全部病例均阳性，血液学结果：Hb 72±18g/L，红细胞3.4±0.8×1012/L，网织红细胞6±3%，抗碱Hb 2.4±2.0%，HbA22.0±1.1%。
五、Hb Bart's水肿胎儿综合征
12例均呈皮肤苍白，皮下高度水肿，9例有胸腹腔积液，肝脾肿大，以肝肿大为显著，常占据全腹腔，5例有两个以上器官畸形。胎盘巨大(400～1700g)，水肿，质脆。Hb19～95g/L，平均49.5g/L，红细胞0.94～3.69×1012/L，平均2.61×1012/L，网织红细胞20～26.3%，平均24%，成熟红细胞大小不均，异形性明显，以靶型居多，红细胞内Hb含量过少，胞浆呈多嗜性和嗜碱性点彩，部分病例脐血中出现较多幼红细胞。脐血Hb电泳：Hb Bart's含量78.2～96.8%，平均86.3%，Hb Portland3.2～19.2%，平均13.6%，抗碱Hb 42～75%，平均56.1%。
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六、α珠蛋白基因分析结果(表2)
静止型6例，均为左侧缺失型，其基因型为(α-/αα)。标准型27例，缺失2个α珠蛋白基因，其基因型为(αα/--)。Hb H病30例中有20例作了α珠蛋白基因图谱分析，其中缺失型5例，基因型(α-/--)，非缺失型13型，其基因型(ααT/--)，Hb CS型Hb H病2例，基因型为(ααCS/--)。Hb Bart's为缺失4个α珠蛋白基因，基因型(--/--)。各类型α地贫经α、δ珠蛋白特异的限制性内切酶片段杂交自显影的分析。不同类型α地贫经α、δ一基因特异片段(Kb)结果不同。
表2 不同的基因类型经α和δ基因特异片段(Kb)结果 基因型
α
δ
Bam HI
, 百拇医药
BglⅡ
EcoRⅠ
HindⅢ
正常
14
12.5
23
16.5
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7.2
5
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α地贫/杂合子
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23
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(αα/--)
7.2
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16.5或
5
14.5
13
缺失型Hb H病
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10
15.8
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(α-/--)
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5
非缺失型Hb H病
14
12.5
23
20
(ααT/α)
7.2
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16.5或
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Hb Bart's
-
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17
20
(--/--)
5
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静止型α地贫
14
12.5……
左侧缺失型
10
7.2……
(α/αα)
静止型α地贫
14
15.8……
右侧缺失型
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12.5……
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7.2……
讨 论
静止型、标准型α地贫由于临床无症状或很轻，血液学改变不明显，不影响劳动能力和生殖功能，因而临床实际工作中难以确诊此病。目前，国内尚少见有成人的病例报告。静止型是α+地贫杂合子，标准型为α°地贫杂合子，两者相互通婚或后者通婚可分娩出Hb H病和Hb Bart's患儿。经α珠蛋白基因分析证实本组12例Hb Bart's水肿胎儿综合征的父母都是标准型α地贫患者。因而，做好婚前检查，避免携带有α地贫基因者的联姻是十分重要的。
Hb H病在临床上有轻度至中等程度的贫血，血液学改变明显，Hb H成分在碱性缓冲液中是向阳极移动最快的一种成分，而在pH6.5时是唯一向阳极动的成分，此项检查对诊断此病有肯定性诊断价值。所有病例红细胞包涵体均阳性，20例作了α珠蛋白基因分析，缺失型5例，非缺失型13例，Hbcs型2例，非缺失型虽无结构基因的缺失，但有功能缺陷，其临床表现严重，需输血，其中8例做了脾切除。有2例作了产前诊断获得成功，因此基因检查为防治这型α地贫的重要手段之一。
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Hb Bart's水肿胎儿综合征是α°地贫纯合子型，完全缺失α珠蛋白基因，为死胎或出生后数分钟死亡。本病特点为：(1)胎儿高度水肿、畸形、死胎及胎盘过大、肝脾肿大；(2)孕妇有水肿胎儿分娩史；(3)妊娠过程胎儿发育异常，孕妇常伴有妊娠高血压综合征；(4)脐血Hb Bart's含量多在80%以上；(5)基因分析证实缺失4个α珠蛋白基因；(6)有遗传关系的家系。我们认为上述六项可作为此病诊断条件，至少必须具备1、4两项。本组病例完全符合Weatherall[5]的诊断条件。本病对社会、家庭、婚姻及孕妇身心健康均有严重影响。目前我国对此病在妊娠早期取胎儿绒毛提取DNA进行基因分析作产前诊断，这是防治本病的重要措施之一[6]。
参考文献
1. 邓家栋，等.血液病实验诊断，第1版，天津科技出版社，1985：321-322.
2. 吴冠芸，等.重组质粒pRBαI在探测α珠蛋白中的应用.中国医学科学院学报 1983；5：275.
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3. 王黎明，等，δ珠蛋白基因探针在鉴别α地中海贫血中的应用.生物物理学报1985；4：42.
4. 张俊武，等.四川地区Hb H病人的α珠蛋白类型.中华血液学杂志 1985；2：73.
5. Weatherall, et al. The hemoglobin constitue of infant with the haemaglobin Hb Bart's hydrops fetal syndrome. Br J Haemat 1970；18：357.
6. 黄有文，等.α地中海贫血早期产前基因诊断.中华血液学杂志 1988；4：193.
(1989年3月9日收稿 同年7月28修回), http://www.100md.com